❖ Môi trường:
- Thạch casein đậu tương hoặc thạch thường: dùng đếm vk hiếu khí - Thạch Sabouraud- kháng sinh để đếm vi nấm
❖ Chuẩn bị mẫu thử:
- Lấy 10 g (hoặc 10 mL) để thí nghiệm
- Mẫu thử là chất rắn hay lỏng có thể tạo dd hay nhũ dịch trong nước: pha loãng bằng đệm phosphate pH 7.2 hoặc NaCl 0.9 % để được nồng độ cần thiết theo quy định
- Mẫu thử là chất lỏng không hòa vào nước: thêm chất nhũ hóa (tween 20, tween 80,..vv..) và làm nóng nhẹ 45 oC để tạo thành nhũ dịch đồng nhất
❖ Kiểm tra chất ức chế: 2 cách
Cách 1 Cách 2
- VSV chỉ thị: S. aureus (G+), E. coli (G-), C. albicans (vi nấm)
- Nhũ dịch thử chứa khoảng 100 VSV/mL - Đĩa thử 1: 1 mL chế phẩm
- Đĩa thử 2: 1 mL chế phẩm + 1 mL nhũ dịch VSV - Đĩa chứng: 1 mL nước cất vô trùng + 1 mL nhũ dịch
VSV
- Đổ 15 – 20 mL thạch thích hợp (dưới 45 oC) vào 3 đĩa
- Ủ 30-35 oC/24-48 h đối với vk, 25-28 oC/48-72 h đối với vi nấm
- Đếm số khuẩn lạc trên mỗi đĩa
- Đĩa 2 ~ Đĩa 1 + Đĩa 3: mẫu thử không có chất ức chế
- Đĩa 2 ~ Đĩa 1 hoặc Đĩa 2 << Đĩa 1 + Đĩa 3: mẫu thử có chất ức chế
- VSV chỉ thị: S. aureus, P. aeruginosa, E. coli, Samonella.
- Ống chứng: 100 vk
- Ống thử: 100 vk + mẫu thử
- Mẫu thử không ức chế VSV nếu mật độ vk giống nhau ở ống chứng và ống thử
❖ Đếm số lượng vsv:
- Cho vào mỗi đĩa petri 1 mL chất thử ở vài nồng độ pha loãng thích hợp - Đổ 15 – 20 mL thạch thích hợp (dưới 45 oC) vào 2-3 đĩa
- Ủ 30-35 oC/24-48 h đối với vk, 25-28 oC/72-120 h đối với vi nấm
- Đếm số khuẩn lạc trên mỗi đĩa có số khuẩn lạc < 300 vk hoặc < 100 vi nấm. Lấy giá trị trung bình. 5. Xác định hoạt lực kháng sinh
52
- Đánh giá hoạt tính sinh học của thuốc mà các phương pháp hóa lý không làm được - Đánh giá hoạt lực các kháng sinh có cấu trúc phức tạp hoặc nhiều thành phần
- Cho biết độ nhạy cảm của vk gây bệnh với các kháng sinh được thử và mức độ kháng thuốc của chúng
b. Nguyên tắc:
- So sánh khả năng ức chế chủng vi sinh vật chỉ thị ở những nồng độ đã biết của kháng sinh thử (chưa biết hoạt lực) và nồng độ đã biết của kháng sinh chuẩn (đã biết hoạt lực)
- Phép thử xác định hoạt lực phải được thiết kế sao cho có thể tính toán được tính có giá trị của mô hình toán học được dùng làm cơ sở cho phương trình hoạt lực.
- Nếu áp dụng mô hình đường thẳng song song, hai đường logarit liều-đáp ứng của chất chuẩn và chế phẩm thử phải song song với nhau và phải tuyến tính trong khoảng liều được dùng trong tính toán. - Cũng có thể sử dụng mô hình tỷ số độ dốc để tính toán