e. Cách tính kết quả
3.1.4. Phương pháp màng lọc vi sinh vật:
- Kích thước lỗ lọc 0.47μm hay 0.22μm. Đường kính và màng lọc phụ thuộc vào đường kính phễu lọc thường là 45mm.
- Phễu lọc, giá đỡ màng lọc phải được vơ trùng sau mỗi lần lọc.
- Mật độ VSV trong dịch lọc thích hợp : < 150 khuẩn lạc/ màng. - Thể tích dịch lọc trong 1 lần: 50 – 10ml
- Nếu thể tích dịch lọc nhỏ hơn thì phải pha lỗng bằng dung dịch pha lỗng hay nước cất vơ trùng.
Hình 3.8 : Các bộ phận của thiết bị lọc vi sinh vật
Ưu điểm: Xác định được mật độ VSV cụ thể trong một thể tích mẫu lớn:
10ml, 100ml…
Nhược điểm: Khơng thích hợp cho việc phân tích các mẫu thực phẩm rắn.
3.1.5.Phương pháp MPN (phương pháp tối khả) : 3.1.5.1.Nguyên tắc:
Mẫu được pha lỗng thành một dãy thập phân, 2 nồng độ kế tiếp nhau khác nhau 10 lần. Mẫu được ủ trong mơi trường thích hợp cĩ ống durham. Mỗi nồng độ pha lỗng được lặp lại 3 ống. Theo dõi sự sinh hơi trong từng ống nghiệm. Xác định ống dương tính ở mỗi nồng độ pha lỗng và dựa vào bảng MPN để suy ra số lượng nhĩm vi sinh vật tương ứng hiện diện trong 1g hoặc 1ml mẫu ban đầu.
3.1.5.2.Sơ đồ quy trình kiểm nghiệm:
1ml (10-1) + 9ml nước vơ trùng 1ml(10-2) + 9ml nước cất vơ trùng
Stormacher
10-1 10-2 10-3
Hình 3.9: Sơ đồ quy trình kiểm nghiệm
Bước 1: 10gr thực phẩm + 90ml Nacl 0.85% hoặc là nước vơ trùng, Stormacher thu được nồng độ 10-1, mục đích đồng nhất để phân bố đều vi sinh vật.
Bước 2: Pha lỗng mẫu để giảm số lượng vi sinh vật cĩ trong mẫu ban đầu. Lấy 1ml mẫu ở nồng độ 10-1 cho vào ống nghiệm thứ nhất, sau đĩ cho 9ml nước vơ trùng, ta được ống nghiệm cĩ nồng độ 10-2. Sau đĩ lấy 1ml mẫu ở nồng độ 10-2
cho vào ống nghiệm thứ hai, cho thệm 9ml nước cất vơ trùng thu được ống nghiệm cĩ nồng độ 10-3. Làm tương tự như trên ta được ống nghiệm cĩ nồng độ 10-4, 10-5…
Bước 3:Nuơi cấy dịch mẫu trong mơi trường Laury Tryptose (LT) ở 3 nồng độ liên tiếp (10-1, 10-2, 10-3) như sau: Mỗi nồng độ lấy 3 ống nghiệm cho vào mỗi ống nghiệm 1 ống durham, cho mơi trường LT vào 9 ống nghiệm sao cho nghập ống durham. Ghi 3 nồng độ liên tiếp bên ngồi ống nghiệm (mỗi nồng độ 3 ống nghiệm). Tiếp đến cho 1ml dung dịch mẫu ở nồng độ 10-1 vào 3 ống nghiệm cĩ ghi nồng độ 10-1 (chứa mơi trường LT), tương tự cho các nồng độ ở các nồng độ tiếp theo. (hình) ủ ở 37oC/24h.
Những lưu ý khi tiến hành nuơi cấy vi khuẩn lên mơi trường Laury Trytose (LT):
- Tiến hành gần ngọn lửa đèn cồn để tránh nhiễm khuẩn.
- Nhớ lắc mẫu trước khi tiến hành nuơi cấy vi khuẩn trên mơi trường Laury Trytose.
- Khơng lắc những ống cĩ durham
Bước 4: Đọc kết quả các ống Laury trytose. Cĩ 3 trường hợp xảy ra: + Ống durham khơng thay đổi.
+ Ống durham nổi lên trên. + Ống durham sinh hơi.
Đọc kết quả trong các ống LT dương tính, sau đĩ cấy chuyển các ống LT dương tính nà vào các ống mơi trường BGBL 2% bằng cấy cấy que cấy vịng nhúng vào mơi trường LT dương tính ở trên, rồi cho vào ống cĩ mơi trường BGBL. Ghi nồng độ tên sản phẩm, ủ 37oC/24h.
Ống LT +: mơi trường đục và ống durham nổi hoặc cĩ bọt khí trong ống (thể tích bọt khí trong ống = 1/10 thể tích ống durham).
Bước 5: Đọc kết quả ống BGBL dương tính, lập tye lệ các ống BGBL dương tính ở 3 nồng độ liên tiếp. Tra bảng Mac Crady tìm số MPN tương ứng.
+ Ống BGBL dương tính: Mơi trường vẩn đục và ống durham nổi, cĩ bọt khí. + Ống BGBL âm tính: Khơng cĩ hiện tượng gì xảy ra.
Bước 6: Tính kết quả
Tổng số coliform (cfu/g hoặc cfu/ml) = Số MPN x 10n
n là số nguyên dương của nồng độ pha lỗng đầu tiên được nuơi cấy.
Bước 7: Từ kết quả tính được, so sánh với tiêu chuẩn về an tồn vệ sinh thực phẩm.