3. ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.4.3 Phương pháp kiểm nghiệm vacxin
3.4.3.1 Phương pháp lấy mẫu kiểm nghiệm
Theo Tiêu chuẩn ngành 10 TCN 160 - 92 ỘVacxin thú y - Quy trình lấy mẫu và sử dụng mẫu trong kiểm nghiệmỢ.
3.4.3.2 Phương pháp kiểm tra vô trùng
- Mỗi lô vacxin ựược kiểm tra trên các môi trường cơ bản sau: + 2 ống thạch máu
+ 2 ống thạch thường + 2 ống nước thịt
+ 2 ống nước thịt gan yếm khắ + 2 ống thạch nấm
+ 2 lọ nước thịt dinh dưỡng 50ml
- Lượng vacxin cấy kiểm tra vào mỗi ống môi trường 0,2ml.
Vacxin Tụ huyết trùng trâu bò ựược kiểm tra trên các môi trường theo hai bước sau:
+ Bước 1: Cấy mẫu vào 2 lọ nước thịt dinh dưỡng 50ml, theo dõi ở 37oC trong 3 ngày.
+ Bước 2: Cấy chuyển từ 2 lọ nước thịt dinh dưỡng trên sang 2 ống thạch máu, 2 ống thạch thường, 2 ống nước thịt, 2 ống nước thịt gan yếm khi và 2
ống thạch nấm, theo dõi ở 37oC trong 7 ngày. Riêng 2 ống thạch nấm ựể ở
nhiệt ựộ phòng 25 - 30oC.
đọc kết quả:
Lô vacxin ựược ựánh giá là ựạt chỉ tiêu vô trùng khi không có bất cứ một loaị vi sinh vật tạp nào mọc trên các môi trường trong thời gian theo dõi.
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ38
3.4.3.3 Phương pháp kiểm tra an toàn
An toàn là một trong những chỉ tiêu quan trọng của một loại vacxin. Bất cứ loại vacxin nào sau khi sản xuất ựều phải kiểm tra chỉ tiêu này.
để tiến hành kiểm tra an toàn của vacxin vô hoạt tụ huyết trùng trâu bò sản xuất bằng công nghệ lên men sục khắ, chúng tôi sử dụng phương pháp thay thế - dùng ựộng vật thay thế là thỏ và chuột bạch.
Kiểm tra an toàn ựối với thỏ: mỗi lô vacxin kiểm tra ựối với 2 thỏ khoẻ
mạnh, mỗi con có trọng lượng từ 1,5 - 2kg. Mỗi con tiêm 1 liều vacxin sử dụng cho trâu bò vào dưới da. Theo dõi liên tục trong 10 ngày.
Kiểm tra an toàn ựối với chuột bạch: mỗi lô vacxin kiểm tra ựối với 10 chuột bạch, có trọng lượng từ 18 - 20g. Mỗi chuột tiêm 1/4 liều vacxin sử
dụng cho trâu bò vào dưới da. Theo dõi liên tục trong 10 ngày.
Nội dung theo dõi ựã ựược quy ựịnh với những tiêu chắ: sốt, kém ăn, sốc vacxin tức thì, viêm, sưng cục bộ nơi tiêm và các phản ứng phụ khácẦ
đánh giá kết quả: Sau 10 ngày theo dõi lô ựộng vật ựược sử dụng ựể
kiểm tra an toàn vacxin phải sống khoẻ mạnh, không có phản ứng hoặc phản
ứng nằm trong phạm vi cho phép và không có con nào chết thì lô vecxin mới
ựạt tiêu chuẩn.
3.4.3.4 Phương pháp kiểm tra hiệu lực
Kiểm tra hiệu lực của vacxin là yêu cầu cần thiết ựối với mỗi lô vacxin.
để kiểm tra hiệu lực của vacxin vô hoạt tụ huyết trùng trâu bò, người ta dùng 2 loại ựộng vật thắ nghiệm là thỏ và chuột bạch.
- Kiểm tra hiệu lực ựối với thỏ: 4 thỏ khoẻ mạnh, trọng lượng 1,5 - 2kg
ựược tiêm 1/4 liều vacxin cho trâu bò vào dưới da/con. Sau 21 ngày gây miễn dịch, 4 thỏ thắ nghiệm cùng 2 thỏ ựối chứng khoẻ mạnh không tiêm vacxin, cùng trọng lượng ựược thử thách với vi khuẩn THT trâu bò cường ựộc, liều 10MLD vào dưới da/con. động vật ựược theo dõi liên tục 10 ngày, thỏ thắ
Trường đại học Nông nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ẦẦẦ39
nghiệm phải sống ắt nhất 50% trong khi thỏựối chứng phải chết hết.
- Kiểm tra hiệu lực ựối với chuột bạch: 10 chuột bạch khoẻ mạnh, mỗi con trọng lượng 18 - 20g, ựược gây miễn dịch với liều 0,25ml/con tương
ựương 1/8 liều vacxin sử dụng cho trâu bò vào dưới da/con. Sau 21 ngày gây miễn dịch, 10 chuột bạch thắ nghiệm cùng 5 chuột ựối chứng không tiêm vacxin, ựược thử thách với vi khuẩn cường ựộc P.multocida, mỗi con tiêm với liều 1MLD vào dưới da. Tất cả chuột ựược theo dõi từ 5 - 7 ngày. động vật
ựược theo dõi liên tục 10 ngày, chuột bạch thắ nghiệm phải sống ắt nhất 50% trong khi chuột ựối chứng phải chết hết.