- Ria cấy: kiểm tra dung quang của khuẩn lạc THT
4.2.3 Kết quả kiểm tra thuần khiết và số lượng vi khuẩn sau khi nhân gi ống lần 2 (trong nồi lên men Fermentor 100 lít)
4.2.3.1 Kết quả kiểm tra thuần khiết
Sau khi kiểm tra ñạt các chỉ tiêu ở giai ñoạn nhân giống lần 1 (trong nồi lên men 10 lít), giống tiếp tục ñược tập trung vào nồi lên men 100 lít. ðây là giai ñoạn cuối cùng của quá trình nhân giống vacxin và sau ñó là vô hoạt bằng formol rồi hấp phụ keo phèn. Và cũng là một giai ñoạn mang tính chất quyết ñịnh, bởi nó quyết ñịnh lượng kháng nguyên trong vacxin. Chỉ khi số
lượng vi khuẩn trong canh trùng nuôi cấy ñạt tiêu chuẩn mới tiến hành vô hoạt bằng formol.
Xét về mặt khoa học, việc xác ñịnh thời ñiểm thu hoạch vacxin là hết sức cần thiết, liên quan ñến số lượng vi khuẩn. ðể tránh trường hợp thu hoạch canh trùng vacxin quá sớm (canh trùng non - vi khuẩn chưa nhân lên
ñược với số lượng lớn nhất) hoặc quá muộn (canh trùng già - giai ñoạn suy thoái của vi khuẩn).
Trong các nghiên cứu trước ñây tại Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương, người ta ñã lấy mẫu sau mỗi giờ nuôi cấy, ñếm sốñể lựa chọn thời ñiểm canh trùng có nồng ñộ vi khuẩn cao nhất. Kết quả khẳng ñịnh, sau 6 - 7 giờ tính từ
thời ñiểm bắt ñầu nuôi cấy trong nồi lên men, nồng ñộ vi khuẩn ñạt cao nhất. Trên cơ sở ñó, sau khoảng 6 - 7 giờ nuôi cấy trong nồi lên men 100 lít, chúng tôi tiến hành lấy mẫu ñể kiểm tra thuần khiết và ñếm số lượng vi khuẩn. Kết quảñược trình bày trong bảng 4.6.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………51
Bảng 4.6: Kết quả kiểm tra thuần khiết sau khi nhân giống lần 2 Môi trường nuôi cấy/kết quả thuần khiết Lô vacxin Thạch máu Thạch thường Nước thịt ống Nước thịt gan yếm khí Thạch nấm TB 1 TK TK TK TK TK TB 2 TK TK TK TK TK TB 3 TK TK TK TK TK TB 4 TK TK TK K TK TB 5 TK TK TK TK TK
Ghi chú: TK = thuần khiết
Kết quả trong bảng 4.6 cho thấy, 5 lô vacxin kiểm tra trên các môi trường nuôi cấy cơ bản (bồi dưỡng ở 370C/24h) ñều thuần khiết sau khi nhân giống trong nồi lên men 100lít.
4.2.3.2 Kết quả ñếm số vi khuẩn sau khi nhân giống lần 2 (trong nồi lên men 100 lít)
Kết quả ñếm số trong giai ñoạn này làm căn cứ cho bước pha loãng với nước sinh lý 0,9% ñể có ñược liều lượng 10 tỷ VK/1ml vacxin, sau khi ñã vô hoạt bằng formol nồng ñộ 36%. Kết quảñếm sốñược trình bày trong bảng 4.7.
Bảng 4.7: Kết quảñếm số vi khuẩn sau khi nhân giống lần 2
Lô vacxin ðĩa 1 ðĩa 2 ðĩa 3 ðĩa 4 ðĩa 5 T.Bình Số lượng VK(tỷ/ml) TB 1 195 197 203 200 199 198,8 19,88 TB 2 191 190 194 195 193 192,6 19,26 TB 3 195 193 198 196 194 195,2 19,52 TB 4 197 196 199 191 193 195,2 19,52 TB 5 190 189 192 191 193 191,0 19,10
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………52
Theo tiêu chuẩn sản xuất vacxin vô hoạt tụ huyết trùng trâu bò thì số
lượng vi khuẩn trong giai ñoạn này phải ñạt từ 19 - 20 tỷ VK/ml canh trùng nuôi cấy. Kết quả trong bảng 4.7 cho thấy, 5 lô vacxin tụ huyết trùng trâu bò sản xuất sau khi nuôi cấy lần 2 (trong nồi lên men 100 lít), số lượng vi khuẩn
ñều ñạt ở mức cho phép. Cụ thể, ở lô TB1, số lượng vi khuẩn cao nhất, 19,88 tỷ vi khuẩn/1ml; thấp nhất ở lô TB5, 19,10 tỷ vi khuẩn/1ml.
Tóm lại, sau toàn bộ quá trình nuôi cấy sản xuất và kiểm tra vi sinh vật thường qui, kết quả cho thấy các lô sản xuất vacxin tụ huyết trùng trâu bò
ñược nghiên cứu, ñều phù hợp với tiêu chuẩn trong quy trình sản xuất của Xí nghiệp thuốc thú y Trung ương.