- Ria cấy: kiểm tra dung quang của khuẩn lạc THT
4.2.1 Kết quả kiểm tra giống sản xuất
4.2.1.1 Kết quả kiểm tra thuần khiết giống
Kiểm tra sự thuần khiết của giống là một trong những yêu cầu bắt buộc, không thể thiếu ñối với bất cứ quy trình sản xuất vacxin nào. Vì vậy, ở ñây với giống vi khuẩn Tụ huyết trùng trâu bò, việc kiểm tra thuần khiết ñược tiến hành theo tiêu chuẩn ngành 10 TCN 161 - 92.
Giống ñưa vào sản xuất là vi khuẩn tụ huyết trùng trâu bò cường ñộc, bảo ñảm tiêu chuẩn giống Quốc gia, nhận từ Ban giữ giống vi sinh vật của Xí nghiệp (4 ống T2, 4 ống T4). Mỗi ống giống ñược nhân viên kỹ thuật thuộc
ñơn vị sản xuất phiết kính, nhuộm gram ñể kiểm tra hình thái, tính chất bắt màu của vi khuẩn, ria cấy trên thạch ñĩa kiểm tra ñộ thuần khiết. ðồng thời với các bước kiểm tra trên, dùng que cấy bạch kim lấy khuẩn lạc giống tụ
huyết trùng trâu bò cấy vào môi trường tăng sinh, bao gồm: môi trường Hottinger + nước gan + nước dạ dày. Môi trường tăng sinh chứa trong 4 lọ
tam giác, mỗi lọ chứa 500ml môi trường. Nuôi cấy ở nhiệt ñộ 370C/6giờ. Sau ñó tiến hành kiểm tra thuần khiết trên các môi trường cơ bản, gồm 2
ống thạch máu, 2 ống thạch thường, 2 ống nước thịt, 2 ống nước thịt gan yếm khí và 2 ống thạch nấm. Các môi trường này sau khi cấy, ñược bồi dưỡng trong tủấm 370C và ñọc kết quả sau 24 giờ.
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………45
Bảng 4.2: Kết quả kiểm tra thuần khiết của 5 lô giống THT trâu bò sản xuất vacxin
Môi trường nuôi cấy/kết quả thuần khiết Lô vacxin Thạch máu Thạch thường Nước thịt ống Nước thịt gan yếm khí Thạch nấm TB 1 TK TK TK TK TK TB 2 TK TK TK TK TK TB 3 TK TK TK TK TK TB 4 TK TK TK TK TK TB 5 TK TK TK TK TK
Ghi chú: TK = Thuần khiết
Như vậy cả 5 lô giống nuôi cấy trên môi trường tăng sinh ñều thuần khiết.
4.2.1.2 Kết quảñếm số lượng vi khuẩn giống THT trâu bò sản xuất vacxin
Sau khi có kết quả thuần khiết, các bình giống ñược tập trung lại với nhau. Bước tiếp theo, lấy mẫu ñếm số lượng vi khuẩn trong môi trường tăng sinh.
Tiến hành: Dùng một dãy gồm 7 ống nghiệm vô trùng (ñánh số thứ tự từ
1 - 7) ñã ñược chia sẵn trong mỗi ống 4,5ml nước muối sinh lý. Hút 0,5ml canh trùng từ bình giống cho vào ống 1. Trộn ñều. Hút từ ống 1 sang ống 2: 0,5ml. Trộn ñều. Cứ làm như thế ñến ống thứ 7. Trộn ñều. Kết quả ñược ñộ
pha loãng canh trùng từống 1 ñến ống 7 lần lượt là 10-1,10-2,…10-7.
Từ ống thứ 7 dùng ống hút lấy canh trùng ñã ñược pha loãng, cấy vào 5
ñĩa thạch máu, mỗi ñĩa 0,1ml. Láng ñều. Bồi dưỡng trong tủấm 370C. Sau 24 giờ ñem ra ñếm số khuẩn lạc mọc trên mặt thạch. Tính số khuẩn lạc trung bình mọc trên 5 ñĩa thạch, rồi nhân với 10 ñểñược số lượng vi khuẩn có trong 1ml canh trùng ở ñộ pha loãng 10-7 (A). Cuối cùng nhân với hệ số pha loãng
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………46 ñể tính ra số lượng vi khuẩn có trong 1 ml canh trùng ban ñầu.
Kết quảñếm số lượng vi khuẩn giống có trong 1 ml môi trường tăng sinh của 5 lô giống vacxin tụ huyết trùng trâu bò sản xuất ñược tổng hợp trong bảng 4.3.
Bảng 4.3: Kết quảñếm số lượng vi khuẩn THT trâu bò giống trong môi trường tăng sinh
Lô vacxin ðĩa 1 ðĩa 2 ðĩa 3 ðĩa 4 ðĩa 5 T.Bình Số lượng VK(tỷ/ml) TB 1 15 17 18 16 14 16,0 1,60 TB 2 16 14 13 17 16 15,2 1,52 TB 3 13 15 14 13 15 14,0 1,40 TB 4 16 13 14 17 16 15,2 1,52 TB 5 12 14 14 15 13 13,6 1,36
Ởgiai ñoạn nuôi cấy vi khuẩn trong môi trường tăng sinh vẫn là nuôi cấy thông thường (phương pháp nuôi cấy tĩnh). Theo tiêu chuẩn, số lượng vi khuẩn/ml canh trùng sau 24 giờ nuôi cấy ở 370C từ 1 - 2 tỷ VK/ml ñược coi là
ñạt yêu cầu. Từ kết quả thể hiện trong bảng 4.3 thấy rằng số lượng vi khuẩn ở
cả 5 lô giống vacxin tụ huyết trùng trâu bò ñều ở mức hơn 1 tỷ VK/ml canh trùng, kết quả này phù hợp với yêu cầu sản xuất mà Xí nghiệp thuốc ñề ra. Số
lượng vi khuẩn/ml canh trùng cao nhất ở lô số 1: 1,60 tỷ VK, thấp nhất là lô số 5: 1,36 tỷ VK.