V (ml) (CCID Hiệu giỏ
66, ta sẽ thu ủượ c khỏng huyết thanh ủặ chi ệu týp II cú hiệu giỏ khỏng thể cao nhất.
4.3.1. Nguyờn liệu ủầ u
Khỉ ủược dựng cho sản xuất tại trung tõm phải ủạt theo tiờu chuẩn ủược duyệt bởi cơ quan Kiểm ủịnh quốc gia chấp nhận. Khỉ lấy thận làm tế bào sản xuất văcxin phải khoẻ mạnh và chưa ủược dựng cỏc thử nghiệm gỡ trước ủú. Khỉ ủược nuụi cỏch ly trong phũng ủỳng qui cỏch và theo dừi ớt nhất 6 tuần trước khi sử dụng. Trong thời gian theo dừi, toàn bộ khỉ ủược theo dừi phải sống khoẻ mạnh. Khỉ lấy thận ủể sản xuất phải ủược kiểm tra kỹ lưỡng, ủặc biệt vi khuẩn lao, virus B, Khỏng thể SV40, Foamy, SIV và khỏng thể virus bại liệt.
Khỉ ủược nuụi nhốt trong lồng, ủặt cỏch xa nhau trong nhà chăn nuụi. Nếu trong thời gian theo dừi, tỷ lệ chết tổng cộng ủạt tới 5%(khụng kể cỏc bệnh lõy nhiễm mà bị chết) thỡ toàn bộ khỉ phải tiếp tục nuụi ủể kiểm tra thờm 6 tuần kể từ
thời gian này. Những nhúm khỉ ủó kiểm tra phải ủược cỏch ly như kiểm dịch dự ủó hết thời gian kiểm dịch cho tới khi tất cả khỉ ủược sử dụng. Khi ủó dựng ủến con cuối cựng, thỡ phũng nuụi khỉ phải ủược vệ sinh và khử trựng theo ủỳng khuyến cỏo thực hành sản xuất tốt của WHO, và phải ủể phũng trống 1 tuần trước khi sử dụng lại. Tất cả khỉ ủược sử dụng lấy thận sản xuất, trước khi ủưa về lấy thận phải ủược lấy 3ml mỏu và tiờm thử nghiệm Tubeculine. Tỏch huyết thanh và ủược chuyển vào thử nghiệm trong phũng thớ nghiệm, xử lý bằng pha loóng 1/4 trong nước muối sinh lý, sau ủú bất hoạt tại 560C trong 30 phỳt. Huyết thanh ủó bất hoạt ủược bảo quản ở
-200C cho ủến khi sử dụng. Mẫu huyết thanh ủược thử xỏc ủịnh sự cú mặt của khỏng thể SIV bằng bộ sinh phẩm chẩn ủoỏn miễn dịch gắn enzyme (do hóng cung cấp), ủồng thời mẫu huyết thanhcũng xỏc ủịnh sự cú mặt của khỏng thể virus Foamy bằng bộ sinh phẩm chẩn ủoỏn miễn dịch huỳnh quang (Viện nghiờn cứu bại liệt Nhật bản cung cấp). Huyết thanh sử dụng xỏc ủịnh sự cú mặt của khỏng thể virus SV40 và khỏng thể bại liệt bằng kỹ thuật trung hoà vi lượng trờn nuụi cấy tế bào JVKT (Phương phỏp của viện nghiờn cứu bại liệt Nhật bản) . Nhúm cỏch ly kiểm dịch là 1 quần thể khỉủó ủược chọn lọc, khoẻ mạnh (ðều là khỉ õm tớnh), nhốt trong lồng riờng, phũng riờng, cho ăn uống và làm vệ sinh riờng (khụng ủược tiếp xỳc với
khỉ khỏc trong thời gian cỏch ly 6 ủến 8 tuần) , sau ủú sử dụng thận cho sản xuất tế
bào. Kết quả ở bảng trờn cho ta thấy: Trong 7 năm, kiểm tra huyết thanh của khỉ
khụng cú khỉ nào bị mắc lao (Tubeculine õm tớnh).
Năm 2000 kiểm tra huyết thanh của 173 con khỉ phỏt hiện 28 khỉ cú khỏng thể Foamy chiếm 16,1%. SV40 cú 38 con chiếm 21,9 %. 19 con cú khỏng thể SIV chiếm 10,9% và 1 con cú khỏng thể bại liệt chiếm 0,57 %.
Năm 2001 , kiểm tra huyết thanh của 100 khỉ cú 43 con cú khỏng thể Foamy chiếm 43%. 37 con cú khỏng thể SV40 chiếm 37%. 24 con cú khỏng thể SIV chiếm 24%. 2 con cú khỏng thể Polio chiếm 2%.
Năm 2002, kiểm tra 188 mẫu huyết thanh khỉ thỡ cú 11 con cú khỏng thể
Foamy chiếm 5,8%. 24 con cú khỏng thể SV chiếm 12,7%. 14 con cú khỏng thể SIV chiếm 7,44%. 2 con cú khỏng thể Polio chiếm 1,06%.
Năm 2003, khiểm tra 51 mẫu huyết thanh của khỉ cú: 1 con cú khỏng thể
Foamy chiếm 1,9%. 7 con cú khỏng thể SV chiếm 13,72%. 1 con cú khỏng thể SIV chiếm 1,96% và khụng cú con nào cú khỏng thể Polio.
Năm 2004, kiểm tra 193 mẫu huyết thanh cú: 21 cú cú khỏng thể Foamy chiếm 10,88%. 13 con cú khỏng thể SV40 chiếm 6,73%. 8 con cú khỏng thể SIV chiếm 4,14% và 2 con cú khỏng thể Polio chiếm 1,03%.
Năm 2005, kiểm tra 75 mẫu huyết thanh cú: 33 con cú khỏng thể Foamy chiếm 44% và 1 con cú khỏng thể Polio chiếm 1,33%. Cũn lại õm tớnh với cỏc thử
nghiệm SV40, SIV.
Năm 2006, kiểm tra 39 mẫu huyết thanh cú: 28 khỉ cú khỏng thể Foamy chiếm 71,79%. Khụng cú con nào bị nhiễm SV40 và khỏng thể Polio. 3 khỉ cú khỏng thể SIV chiếm 7,69%. Như vậy khỉ sạch của năm 2006 chỉ cũn 11 chiếm 28,21%.
Tất cả những khỉ õm tớnh với cỏc thử nghiệm trờn ủược chọn riờng và cỏch ly trong thời gian từ 6 ủến 8 tuần, sau ủú sử dụng thận ủể sản xuất tế bào. Cỏc thử
nghiệm trờn ủó chứng tỏ cụng việc kiểm tra khỉ trước khi sản xuất tế bào ủó và ủang
tỳc ủể ủưa ra những sản phẩm ủạt tiờu chuẩn của WHO ủề ra. Trong bảy năm từ
2000 ủến 2006 cơ quan ủó tiến hành thử nghiệm hơn 800 mẫu huyết thanh khỉ ủề
chọn lọc ra những khỉủủ tiờu chuẩn cho sản xuất tế bào thận khỉủạt yờu cầu của cơ
quan Kiểm ủịnh Quốc gia và của WHO. Những khỉ sạch trờn ủược nuụi nhốt riờng sang phũng nuụi cỏch ly ủể sản xuất từ 6 ủến 8 tuần. Trong thời gian này, mỗi khỉ ủược nhốt riờng 1 lồng, cho ăn uống và dọn vệ sinh riờng cỏc lồng và phũng nuụi. Thực hiện nuụi như vậy ủến khi lấy thận làm tế bào ủến con khỉ cuối cựng thỡ lồng chuồng và phũng nuụi ủược khử trựng sạch và cỏch ly ủể phũng trống ớt nhất là 1 tuần trước khi nhốt lụ khỉ mới vào ủể tiến hành thử nghiệm như trờn.
Tổng kết sau bảy năm từ năm 2000 ủến 2006 cụng tỏc kiểm nghiệm khỉ sạch trước khi ủưa vào sản xuất ủược thực hiện thường xuyờn, kết quả ủỏng tin cậy, ủạt yờu cầu theo tiờu chuẩn của Tổ chức y tế thế giới.