V (ml) (CCID Hiệu giỏ
66, ta sẽ thu ủượ c khỏng huyết thanh ủặ chi ệu týp II cú hiệu giỏ khỏng thể cao nhất.
4.2.1. Kiểm tra nguyờn liệu ủầ u cho sản xuất văcxin bại liệt – khỉ sản xuất
ðể sản xuất cỏc chế phẩm Sinh học như: Virus hoặc văcxin bại liệt,… ủược nuụi cấy trờn tế bào thận khỉ tiờn phỏt là nguyờn liệu ủầu quan trọng nhất. Hiện nay, cú nhiều dũng tế bào ủược sử dụng, nhưng tế bào thận khỉ tiờn phỏt vẫn ủược dựng phổ biến ở nhiều nước trờn Thế giới, trong ủú, cú Việt Nam. Kể từ khi Giỏo sư
Hoàng Thuỷ Nguyờn bắt ủầu sản xuất văcxin bại liệt ở Việt Nam, vào ủầu những năm 1960 cho ủến nay, thỡ tế bào thận khỉ tiờn phỏt là dũng tế bào duy nhất ủược sử
dụng ở nước ta. Do ủú, yờu cầu chất lượng nuụi cấy tế bào thận khỉ luụn luụn ủược
ủặt ra cho Trung tõm. Việc nuụi cấy tế bào phải ủảm bảo ủủ cỏc tiờu chuẩn của WHO ủề ra, trong ủú, văcxin sản xuất phải cú hiệu lực và an toàn cho người sử
dụng, ủồng thời một trong những yờỳ tố mang tớnh quyết ủịnh chớnh là hệ thống chủng giống gốc.
Giống virus Phải ủược biết rừ ràng về nguồn gốc ủể dựng cho sản xuất văcxin và những phương phỏp làm giảm ủộc lực hoặc bất hoạt. Tất cả cỏc giống virus phải ủược bảo quản ở -600C. Chỉ cú những giống virus ủược cơ quan Kiểm
ủịnh Quốc gia chuẩn y mới ủược dựng.
Hệ thống chủng giống ðể sản xuất văcxin thỡ virus dựng ủể sản xuất phải là virus giống gốc (SO) hoặc giống virus sản xuất bằng phương phỏp cấy truyền từ
văcxin giống gốc (SO + 1 hoặc SO + 2) và phải ủược cơ quan Kiểm ủịnh Quốc gia cho phộp. Chủng virus bại liệt sản xuất tại Trung tõm Nghiờn cứu, Sản xuất Văcxin và Sinh phẩm Y tế 135 Lũ ủỳc do Viện nghiờn cứu Bại liệt Nhật bản cung cấp .
Thực hiện cụng việc này, chỳng tụi tiến hành theo GMP của Trung tõm kiểm
ủịnh Quốc gia và khuyến cỏo của WHO, ủược thực hiện theo thường quy ủó viết thành quy trỡnh sản xuất do nhõn viờn của Trung tõm nghiờn cứu sản xuất văcxin và Sinh phẩm y tế chỳng tụi thực hiện
Lấy mẫu huyết thanh của khỉ từ trong tủ lạnh ra ngoài. ðụng tan trong bể ủiều nhiệt, lấy lượng mẫu cần dựng vào Ellfedol và ủiều chỉnh bể ủiều nhiệt lờn
560C. Chuyển lượng huyết thanh từ Effeldol vào bểủiều nhiệt bất hoạt tại 560C/30 phỳt tiến hành pha thực hiện thử nghiệm.
Bảng 4.11. Kết quả kiểm tra cỏc test thử nghiệm cho khỉ trong 7 năm (2000 - 2006)
Cỏc thử nghiệm kiểm tra huyết thanh khỉ
Lao Foamy SV40 SIV Polio
N ă m Số khỉ thử nghiệm (+) % (+) % (+) % (+) % (+) % 2000 173 0 0 28 16,10 38 21,9 19 10,90 1 0,57 2001 100 0 0 43 43,0 37 37,0 24 24,0 2 4,00 2002 188 0 0 11 5,80 24 12,7 14 7,44 2 1,06 2003 51 0 0 1 1,90 7 13,72 1 1,96 0 0,0 2004 193 0 0 21 10,88 13 6,73 8 4,14 2 1,03 2005 75 0 0 33 44,00 0 0,0 0 0,0 1 1,33 2006 39 0 0 28 71,79 0 0,0 3 7,69 0 0,0 Tổng 819 0 0 165 20,14 119 14,52 69 8,42 8 0,97
Trong bảy năm, từ năm 2000 ủến năm 2006 chỳng tụi tiến hành kiểm tra 819 con khỉ tại ðảo Rều – Quảng Ninh (Bảng 1) cho thấy: Khụng khỉ nào bị mắc lao, foamy dương tớnh 165 con chiếm 20,14%, SV40 dương tớnh 119 con chiếm 14,52%, SIV dương tớnh 69 con chiếm 8,42% và cuối cựng là dương tớnh với virus Polio là 8 con chiếm 0,97%.
Khỉ dựng cho sản xuất phải ủạt :
- Tiờm tubeculin trong da, ủường kớnh vết tiờm nhỏ hơn 1 cm
- Khụng cú khỏng thể Polio, khỏng thể Foamy, khỏng thể SIV và KT SV40 Khỉ dựng cho kiểm ủịnh:
- Âm tớnh với 4 CTKT (Lao, Polio, khỏng thể SIV và SV40) ở bảng trờn - Cú thể dương tớnh với Foamy
Tất cả cỏc khỉ cũn lại dương tớnh với cỏc test thử nghiệm ủều ủược lập thành biờn bản và hủy dưới sự chứng kiến của phũng QA và phũng QC. Sau bảy năm thực hiện, chỳng tụi tổng kết ủược số lượng khỉ sạch phục vụ cho sản xuất như bảng sau:
Bảng 4.12. Tỷ lệ khỉ sạch cho sản xuất vắc xin bại liệt Số % khỉ bị loại Số % khỉ sử dụng Năm Số khỉ Số lượng (+) Tỷ lệ % Số lượng (-) Tỷ lệ % 2000 173 73 42,19 100 57,81 2001 100 75 75,0 25 25,0 2002 188 43 22,87 145 77,13 2003 51 9 17,64 42 82,36 2004 193 37 19,17 156 80,83 2005 75 33 44,0 42 56,0 2006 39 28 71,79 11 28,21 Tổng 819 298 36,39 521 63,61 Bảy năm, từ năm 2000 ủến 2006 chỳng tụi ủó tiến hành ủỏnh số khỉ, lấy mỏu làm cỏc thử nghiệm tiờu chuẩn. Tổng số khỉ kiểm tra là 819 con, số con bị loại là 298 con chiếm 36,39%. Số khỉủạt tiờu chuẩn ủể sản xuất là 521 con chiếm 63,61%. Như vậy, khỉ ủạt tiờu chuẩn ủể sản xuất phải trải qua cỏc thử nghiệm rất nghiờm ngặt của phũng kiểm ủịnh Trung tõm. Khỉ trước khi ủược sử dụng phải cú giấy chứng nhận khỉ sạch do phũng kiểm ủinh cung cấp theo cỏc tiờu chớ của cỏc test thử
nghiệm tại bảng 1.
4.2.2. Kết quả kiểm tra tế bào sử dụng cho sản xuất văcxin bại liệt trong bảy năm từ năm 2000 – 2006