- Pha mụi trường lỏng
c) Kiểm tra trực khuẩn lao bằng phương phỏp nuụi cấy
Thử nghiệm phỏt hiện trực khuẩn lao bằng phương phỏp nuụi cấy ủược ỏp dụng cho cỏc mẫu sau: - Mẫu nước nổi nuụi tế bào
- Mẫu thụ ủơn của từng mẻ gặt riờng.
Cỏc bước tiến hành:
Chuẩn bị mẫu:
- Thể tớch mẫu thử 10ml trong một mẫu.
- Ly tõm týp chứa mẫu 3000 vũng/1 phỳt, thời gian là 20 phỳt.
- Loại bỏ nước nổi, giữ lại cặn cựng vài giọt dung dịch ủọng lại ởủỏy týp.
- Thờm vào 2ml NaCl 0,9%
Gõy nhiễm:
- Cho 0,2ml mẫu thử lờn bề mặt 1 ống thạch, lỏng ủều.
- Cỏc ống thửủặt nằm nghiờng, mặt vỏt ủó gõy nhiễm mẫu lờn giỏ ủỡ. - Toàn bộống thửủược nuụi ở 370C trong 8 tuần.
ðọc kết quả sau 8 tuần: Ống thử mẫu khụng cú khuẩn lạc mọc và giống ống ủối chứng, mẫu thửủú khụng cú trực khuẩn lao.
d) Kiểm tra tỏc nhõn ngoại lai trờn nuụi cấy tế bào
Phỏt hiện tỏc nhõn ngoại lai trờn nuụi cấy cỏc loại tế bào. Áp dụng cho tất cả
cỏc mẫu nước nổi nuụi tế bào.
Cỏc bước tiến hành:
Chuẩn bị tế bào dựng cho thử nghiệm:
Dựng 4 loại tế bào: - Tế bào thận khỉ cựng loài. - Tế bào Vero
- Tế bào thận thỏ tiờn phỏt - Tế bào HEP2C.
Mỗi mẫu nước nổi gõy nhiễm 3 chai, ủể 3 chai khụng gõy nhiễm làm ủối chứng (K).
Gõy nhiễm mẫu:
- Cho 2,5ml mẫu lờn bề mặt tế bào.
- Chai tế bào ủối chứng (K), cho 2,5ml LHE 2% BS vào trong 1 chai. - Hấp phụở 370C trong 60 phỳt (Cứ 20 phỳt lại lỏng nhẹ tế bào 1lần).
- Thờm 7,5ml LHE 2% BS trong chai.
- Tiếp tục nuụi ở 370C trong 14 ngày.
ðọc kết quả vào ngày thứ 7 và 14:
Cả 3 chai gõy nhiễm 1 mẫu tế bào. Tế bào phỏt triển bỡnh thường, khụng cú thoỏi húa, khụng bị hủy hoại, cú hỡnh ảnh tương tự như cỏc chai tế bào nhúm ủối chứng, tế bào hỡnh sợi, ở giữa phỡnh to, 2 dầu thon nhỏ lại, nguyờn sinh chất khụng thay ủổi. Như vậy, khụng cú tỏc nhõn ngoại lai trong mẫu nước nổi nuụi tế bào.
3.4.2.3. Kiểm tra an toàn văcxin bỏn thành phẩm
ðể tiến hành kiểm tra an toàn văcxin bỏn thành phẩm tụi tiến hành làm cỏc thử nghiệm: