2.2.2.1. Máy siêu âm màu: Voluson 730, đầu dị 3.5 MHz của hãng Medison (Hàn Quốc ).
2.2.2.2. Máy đo mức độ tổn thương gan
Việc thực hiện sinh thiết gan cĩ vài hạn chế: sự khơng thoải mái về mặt tâm sinh lý của bệnh nhân cĩ thể dẫn đến một tỉ lệ cao bệnh nhân từ chối sinh thiết và thỉnh thoảng vẫn cĩ tỉ lệ tử vong. Do đĩ cĩ một nhu cầu ngày càng tăng các phương pháp khơng xâm nhập để lựa chọn nhằm đánh giá mức độ của sự xơ hĩa của gan [13], [40]. Trong số các tiếp cận đáng quan tâm thì đo độ đàn hồi dường như là một kỹ thuật hứa hẹn nhất. FibroScan là kỹ thuật khơng xâm nhập, bệnh nhân khơng đau, thực hiện nhanh chĩng và khách quan để định lượng xơ hĩa gan. Chúng tơi dùng máy FibroScan của cơng ty Echosens của Pháp chế tạo theo nguyên lý siêu âm.
Thiết bị này dựa trên nguyên lý đàn hồi thống qua (transient
elastography) một chiều, một kỹ thuật sử dụng cả sĩng siêu âm (5MHz) và sĩng đàn hồi tần số thấp (50Hz), sự truyền vận tốc của các sĩng này liên quan trực tiếp tới tính đàn hồi.
Hình 2. 1. Máy FibroScan, cơng ty Echosens của Pháp
• Kỹ thuật đo độ cứng của mơ gan với sĩng siêu âm 3. 5 MHz, và sĩng đàn hồi 50Hz.
• Cho phép đo độ cứng mơ gan dựa theo nguyên lý đàn hồi.
• Thể hiện con số định lượng là kPa (kilo Pascal) tương ứng với kết quả sinh thiết gan xếp loại theo mơ học Metavir. Độ tương hợp 98%.
kPa 1 - 4,9 5 - 6,9 7 - 9,4 9,5 - 12,5 12,5 - 75
Metavir F0 F1 F2 F3 F4
+ Mức độ xơ hĩa gan theo chỉ số sắp xếp từ F0 đến F4 với: . F0: khơng cĩ sự xơ hĩa.
. F1: xơ hĩa khoảng cửa mà khơng cĩ vách ngăn. . F2: cĩ một vài vách ngăn.
. F3: cĩ nhiều vách ngăn mà khơng cĩ xơ gan. . F4: xơ gan.
Hình 2.2. Đầu dị máy FibroScan
Đầu dị máy FibroScan là loại đầu dị kép bao gồm siêu âm A Mode (tần số 3,5 Mhz) và siêu âm TM Mode (nguồn sĩng cơ học 50 Hz). Sự truyền vận tốc của sĩng này liên quan trực tiếp đến tính đàn hồi của nhu mơ gan.
Hình 2.3. A - mode, TM - mode, Elastogram* Độ đàn hồi của gan được xếp theo phân loại Metavir * Độ đàn hồi của gan được xếp theo phân loại Metavir
Hình 2.4. Các giá trị ngưỡng được xếp để phân loại tổn thương ganTheo phân loại này, giá trị lớn hơn 12,5 kPa xếp F4 và trải dài Theo phân loại này, giá trị lớn hơn 12,5 kPa xếp F4 và trải dài đến 75 kPa, vì vậy mức độ chênh lệch về tổn thương cũng nhiều trong F4 tùy theo chỉ số kPa. Do đĩ trong điều trị tùy bệnh nhân, nếu F4 mà
FibroScan chưa lớn hơn 20 kPa cĩ thể nĩi xơ gan giai đoạn đầu, mức độ nhẹ.
2.2.2.3. Xét nghiệm máu
•Cơng thức máu: thực hiện trên máy ADVIA 2120 (Siemens).
•Prothrombine time: thực hiện trên hệ thống ACL 7000 Instrumentation Laboratory.
•Sinh hĩa: thực hiện trên hệ thống ADVIA 1650 (Siemens).
•Miễn dịch: thực hiện trên hệ thống CENTAUR (Siemens).
•HBsAg: được phát hiện bằng kỹ thuật Elisa (Enzyme liked Immunosorbent assay - Kỹ thuật miễn dịch gắn men), sử dụng kit Monolisa HBsAg Ultra - Bio - Rad của Pháp.
•Anti-HCV: chúng tơi thực hiện bằng kỹ thuật Elisa (thế hệ 3), Kit Ultra – Bio –Rad của Pháp.
•Tự miễn: Chúng tơi thực hiện bằng kỹ thuật Elisa, Kit Biorad.
•HCV RNA: Chúng tơi dùng kỹ thuật RT –PCR, Icycler –Biorad, Kit: in house (kit tự pha chế tại phịng lab của Medic).
Đây là kỹ thuật khuếch đại DNA đích. Ly trích HCV RNA của HCV bằng hệ thớng ly trích tự đợng MagnaPure (Roche). Dùng kỹ thuật phiên mã ngược RNA của bợ gen siêu vi thành cDNA rời dùng kỹ thuật trùng hợp chuỡi để khuếch đại bợ gen RNA của HCV.Từ 1 phân tử HCV ban đầu sẽ được khuếch đại lên cả nghìn lần, hàng triệu lần, từ đó dễ dàng phát hiện được có sự hiện diện HCV RNA với đợ nhạy và đợ đặc hiệu cao (ngưỡng phát hiện 50 copies/mL).
•HCV b. RNA: Chúng tơi dùng kỹ thuật b. DNA, Versant 440, Bayer Healthcare Diagnostic. Đây là kỹ thuật khuếch đại tín hiệu (Branched DNA). Định lượng được cho tất cả các kiểu gen của HCV (ngưỡng phát hiện 3200 copies/mL).
• HCV genotype: Chúng tơi thực hiện bằng kỹ thuật giải trình tự chuỗi trên hệ thống Open gene System, Trugene HCV5’NC genotyping kit Bayer (Siemens). Kỹ thuật này xác định kiểu gen HCV bằng kỹ thuật giải trình
tự chuỡi, thực hiện PCR với cặp mời đặc hiệu trên vùng 5’ khơng mã hoá để được sản phẩm khuếch đại.
Hình 2.5. Real time PCR
- Thuốc nghiên cứu:
• Peginterferon alfa-2a: dùng Pegasys của cơng ty Roche - Thụy sĩ.
• Peginterferon alfa-2b: dùng Peg-Intron của cơng ty Schering plough - Mỹ.
• Ribavirin: dùng Ribazole của cơng ty Getz Pharma của Mỹ sản xuất tại Pakistan.