buồng trứng
Buồng trứng dê vận chuyển từ lò mổ về phòng thắ nghiệm trong vòng 2 Ờ 4 giờ. Thiết bị giữ và vận chuyển mẫu chuyên dụng do hãng Cryologic (Úc) cung cấp. Thiết bị này có nguồn ựiện ựộc lập (bình ắc qui) và có nút ựiều chỉnh nhiệt ựộ, màn hình hiển thị chắnh
xác nhiệt ựộ giữ mẫu (250C, 300C, 370C).
Trứng ựược thu bằng phương pháp hút trứng trực tiếp từ các nang, chỉ sử dụng trứng loại tốt cho các thắ nghiệm nuôi thành thục trứng sau ựó ở trong tủ nuôi Sanyo ở chế ựộ 5%CO2, 390C, kết quả chúng tôi thu ựược ựược trình bày ở bảng 1 và biểu ựồ 1.
Bảng 1: Ảnh hưởng của nhiệt ựộ bảo quản ựến tỉ lệ trứng dê thành thục
in vitro
Nhiệt ựộ bảo quản mẫu thắ nghiệm Số trứng sử dụng (n) Số trứng thành thục (n) Tỉ lệ trứng thành thục (%) 250C 87 38 43,68a 300C 94 56 59,57b 370C 86 50 58,14b (Các chữ a, b: Sai khác thống kê rõ rệt (P<0,05))
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 39
Biểu ựồ 1: Ảnh hưởng của nhiệt ựộ bảo quản ựến tỉ lệ trứng dê thành thục in vitro
Từ kết quả ở bảng 1 và biểu 1, chúng ta thấy, Tỷ lệ trứng thành thục sau nuôi cấy với các lô trứng ựược bảo quản ở nhiệt ựộ 300C và 370C cao hơn hẳn so với ở nhiệt ựộ 250C. Như
vậy, nhiệt ựộ bảo quản thắch hợp trong việc bảo quản mẫu buồng trứng dê dao ựộng trong khoảng 30-370C. Kết quả này cũng phù hợp với kết quả nghiên cứu của (N.Crozet và cs, 1995), nhiệt ựộ bảo quản buồng trứng khi vận chuyển là 300C, (M.Khatun và cs, 2010), nhiệt ựộ bảo quản buồng trứng khi vận chuyển là 350C.
Thời gian bảo quản mẫu cũng là một vấn ựề ựáng lưu ý. Về nguyên tắc, thời gian bảo quản
càng ngắn càng tốt (Wang.Z.K và cs, 1995). Tuy nhiên trên thực tế, ựịa ựiểm thu mẫu xa phòng thắ nghiệm (từ vài Km ựến hơn 10Km), Thời gian mổ dê ở
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 40
các lò mổ sớm (khoảng 3 Ờ 4 giờ sáng) làm cho thời gian này không thể nhanh hơn 02 giờ. Nhìn chung, việc thu mẫu cũng tương tự giữa phòng thắ nghiệm của chúng tôi và nhiều phòng thắ nghiệm trên thế giới, quá trình thu mẫu là vất vả vì mẫu cần thu ngay khi con vật vừa bị giết ựể ựảm bảo khả năng sống của tế bào trứng bên trong.
Thông thường, có thể sử dụng hai loại dung dịch ựể vận chuyển buồng trứng. Một là, dùng dung dịch nước muối sinh lý; hai là, dùng dung dịch PBS. Cả hai dung dịch này ựều cần bổ sung kháng sinh như một yếu tố chống nhiễm khuẩn trong suốt quá trình thu và vận chuyển mẫu buồng trứng.
Tại phòng thắ nghiệm của chúng tôi, việc bảo quản mẫu ựược ưu tiên thực hiện trong môi trường PBS có bổ sung kháng sinh (100000UI Penicilin+0,05 gr Streptomycin) vì ựây là môi trường giàu dinh dưỡng hơn, có ảnh hưởng tốt ựến sức sống của trứng hơn. Tuy nhiên, giá thành của dung dịch này cũng cao hơn, nhất là phải chú ý lọc vô trùng môi trường ngay sau khi pha bằng cách sử dụng màng lọc vô trùng, sau ựó môi trường ựược bảo quản tủ lạnh (+40C), khi dùng phải làm ấm ựến 370C.