Khai thác trứng in vitro
Khai thác trứng in vitro là phương pháp khai thác trứng trực tiếp từ các buồng trứng. đây là phương pháp chủ yếu ựể tiến hành thu lượm trứng phục vụ lĩnh vực công nghệ phôi ựộng vật ở góc ựộ nghiên cứu cơ bản và ựược ứng dụng ở hầu hết các phòng thắ nghiệm về công nghệ phôi trên thế giới (Fukushima và cs, 1985); (Fukuda và cs, 1990); (Keskintepe và cs, 1995); (Mizushima và cs, 2000); (Paloma Duque và cs, 2003). Phương pháp này cho phép cung cấp một lượng trứng lớn với chất lượng ổn ựịnh.
Các bước khai thác trứng
Thu buồng trứng từ lò mổ: Thu buồng trứng ngay sau khi con vật bị giết, dùng panh cố ựịnh buồng trứng và dùng kéo cắt lấy toàn bộ buồng trứng.
Bảo quản và vận chuyển: Buồng trứng ựược rửa 3 Ờ 4 lần trong dung dịch muối sinh lý (NaCl 0,9%) có bổ sung kháng sinh (100.000 ựơn vị Penicillin và 50 mg/lắt Streptomycin) và bảo quản trong môi trường PBS (Phosphate Buffered Saline) ở nhiệt ựộ khống chế 30 Ờ 350C. Các buồng trứng thu ựược ựược chuyển về phòng thắ nghiệm trong vòng 2 Ờ 4 giờ.
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 19 Thu trứng từ buồng trứng: Buồng trứng khi mang về ựến phòng thắ nghiệm ựược
lấy ra và rửa lại 3 Ờ 4 lần bằng môi trường PBS và dùng bơm tiêm hoặc máy hút chuyên dụng có kắch thước lỗ kim là 18G ựể chọc hút các nang trứng. Cách khác có thể dùng phương pháp cắt lát ựể
bộc lộ nang trứng từ buồng trứng trong ựĩa petri có chứa môi trường nuôi dưỡng PBS. Kể từ giai ựoạn này, các bước tiếp theo ựều ựược thực hiện trong tủ vô trùng. Thông thường, người ta tiến hành chọc hút các nang trứng có ựường kắnh từ 2 Ờ 6 mm.
Rửa và chọn lọc trứng: Dịch nang
trứng sau khi hút ra gồm trứng và các tế bào nang trứng ựược bơm vào các ựĩa Petri (hãng NUNC-CHLB đức). Tiến hành soi tìm trứng trên kắnh hiển vi soi nổi có ựộ phóng ựại 40 Ờ 100 lần. Trứng ựược hút ra bằng pipet thủy tinh và rửa vài lần trong môi trường DPBS (DulbeccoỖs Phosphate Bufferred Saline) hoặc các môi trường thắch hợp khác.
Khai thác trứng in vivo
Ngoài phương pháp khai thác trứng in vitro ựã trình bày ở trên, người ta nghiên cứu áp dụng một phương pháp
mới gọi là phương pháp Ovum Pick Up (OPU). Phương pháp này ựược xây dựng
Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội Ờ Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ẦẦẦẦẦẦẦẦẦ. 20
trên cơ sở phương pháp hút trứng với sự trợ giúp của máy siêu âm dùng trong các kỹ thuật hỗ trợ sinh sản ở người.
Phương pháp OPU ựược sử dụng ựể khai thác trứng từ các cá thể có tiềm năng di truyền cao (Sản lượng sữa cao, sản lượng thịt nhiềuẦ), kết hợp với công nghệ thụ tinh trong ống nghiệm sử dụng tinh ựược giống tốt cho phép tạo ra các phôi có nhiều ưu ựiểm vượt trội. Các phôi này ựược cấy vào ựộng vật nhận phôi (ựã ựược gây ựộng dục ựồng pha) ựể tạo ra các con non như mong muốn.
Các thắ nghiệm về thu trứng bò bằng phương pháp trên ựược tiến hành bởi (Callesen và cs, 1987); sau ựó là (Pieterse và cs, 1988) là những người ựầu tiên sử dụng phương pháp OPU như là một phương pháp khai thác trứng hiệu
quả và ựều ựặn trên bò. Trên dê cũng ựã có một số tác giả trên thế giới ựã sử dụng phương pháp này như (Wieczorek và cs, 2009) ựể thu trứng làm thắ nghiệm, tuy nhiên ở Việt Nam vẫn chưa ai sử dụng.