Chương 2 NỘI DUNG VẬT LIỆU – ĐỊA ĐIỂM –
2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
- Phương pháp nghiên cứu mô hình thử nghiệm trong phòng thí nghiệm.
Sử dụng các phương pháp nghiên cứu, phương pháp phân lập, giám định vi khuẩn theo TCVN, đồng thời tham khảo của FAO (1992), New Zealand (1991) và của Bộ y tế, các phương pháp của Viện thú y Quốc gia.
Phương pháp lấy mẫu và chuẩn bị mẫu theo TCVN 4833 – 1: 2002 (ISO 3100 – 1:1991) và TCVN 4833 – 2: 2002(ISO 3100 – 2: 1988).
Phương pháp phát hiện và đếm số vi khuẩn E.coli theo TCVN 5156 – 1990 Phương pháp phát hiện và đếm số vi khuẩn Staphylococcus aureus theo TCVN 5155 -1990.
Phương pháp phát hiện và đếm số vi khuẩn Salmonella theo TCVN 5153 – 1990
Phương pháp giám định vi khuẩn E.coli, Staphylococcus aureus và Salmonella theo phương pháp sinh hoá.
- Bố trí thí nghiệm: + Thí nghiệm 2.1.1:
Nuôi cấy các giống vi khuẩn
Pha loãng mẫu ở các nồng độ khác nhau, cho tiếp xúc với dung dịch Anolit (30ppm) với thời gian tiếp xúc 5 phút, 15 phút, 30 phút.
Nuôi cấy trong điều kiện 37oC. Xác định tỷ lệ sống sót của vi khuẩn Đếm số trước và sau thí nghiệm.
+ Thí nghiệm 2.1.2. và 2.1.3. Gà thí nghiệm được bố trí theo phương pháp phân lô (lô đối chứng và lô thí nghiệm)
. Thí nghiệm phun thân thịt: Thịt gà được chia làm 2 lô
Lô đối chứng: 9 gà phun bằng nước bình thường lên toàn bộ thân thịt.
Lô thí nghiệm: 9 gà được phun bằng dung dịch Anolit nồng độ 50ppm lên toàn bộ thân thịt.
Sau khi phun 15 phút, 30 phút lấy mẫu thịt để phân tích.
. Thí nghiệm rửa thân thịt: Thịt gà được chia làm 2 lô Lô đối chứng: 9 gà được rửa bằng nước bình thường.
Lô thí nghiệm: 9 gà được rửa bằng dung dịch Anolit nồng độ 50ppm. Mẫu được lấy sau khi rửa 15 phút, 30 phút lấy mẫu và đem phân tích.
. Thí nghiệm ngâm thân thịt: Thịt gà được chia làm 2 lô Lô đối chứng: 9 gà được ngâm trong nước lạnh 4oC.
Lô thí nghiệm: 9 gà được ngâm trong dung dịch Anolít 50ppm lạnh 4oC Mẫu được lấy sau khi ngâm 15 phút, 30 phút lấy mẫu và đem phân tích.
. Thí nghiệm tắm: Gà được chia làm 2 lô
Lô đối chứng: 15 gà được tắm bằng nước bình thường trước khi giết mổ.
Lô thí nghiệm: 15 gà được tắm bằng dung dịch Anolit nồng độ 50ppm trước khi giết mổ.
Mỗi thí nghiệm được lặp lại 3 lần. - Các bước tiến hành:
+ Bước 1: Nuôi cấy giống vi khuẩn trong môi trường BHI (Brain Heart Influsion) ở tủấm 370C, thời gian 12 giờ.
+ Bước 2: Gây nhiễm vi khuẩn vào bề mặt thân thịt. Để 15 phút cho vi khuẩn bám dính vào bề mặt thân thịt. Lấy mẫu để kiểm tra, đếm số lượng vi khuẩn.
+ Bước 3:
Khử trùng thân thịt bằng nước. Lấy mẫu sau thời gian 15 phút và 30 phút để
kiểm tra, đếm số lượng vi khuẩn.
Khử trùng thân thịt bằng dung dịch Anolit nồng độ 50ppm. Lấy mẫu sau thời gian 15 phút và 30 phút để kiểm tra, đếm số lượng vi khuẩn.
+ Bước 4: Xử lý mẫu và nuôi cấy vi khuẩn.
Xử lý mẫu: Cân 1g thịt (bề mặt thân thịt)/ mẫu, đổ thêm vào túi đựng mẫu 9ml nước cất (dung dịch Buffer Pepton).
Sử dụng máy làm nhuyễn mẫu (Stomacher) đập nát và đồng nhất mẫu trong khoảng thời gian 2 phút. Mẫu trong túi đập có độ pha loãng là 10-1.
Tiếp tục pha loãng mẫu với các nồng độ 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6...
Mỗi nồng độ pha loãng được cấy vào 2 hộp lồng thạch đếm số, mỗi hộp lồng 1ml.
Các hộp lồng thạch đã cấy mẫu được nuôi cấy ở nhiệt độ 37 ±10C. Sau 24 giờ nuôi cấy mang ra đọc kết quả.
- Phương pháp sử lý số liệu:
Số lượng khuẩn lạc trong 1 gam thực phẩm được tính theo công thức: ∑ C
N =
(n1 + 0,1n2) x d
C : Là số khuẩn lạc trên các đĩa được cấy mẫu ở 2 đậm độ pha loãng liên tiếp đã chọn để đếm số.
n1 và n2 : Là số đĩa chọn để đếm số. d : Hệ số pha loãng của đậm độ ban đầu.
Số liệu thu thập được từ kết quả nghiên cứu, được xử lý bằng phương pháp thống kê sinh học và sử dụng chương trình máy tính EXEL để tính .
Chương 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN