Chương 2 NỘI DUNG VẬT LIỆU – ĐỊA ĐIỂM –
3.1. XÁC ĐỊNH KHẢ NĂNG DIỆT KHUẨN CỦA DUNG DỊCH ANOLIT TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM
TRONG PHÒNG THÍ NGHIỆM
Chúng tôi tiến hành nuôi cấy vi khuẩn giống trong môi trường canh thang BHI, sau thời gian khoảng 12 – 14 giờ lấy ra tiến hành thí nghiệm.
Để đánh giá khả năng diệt khuẩn của dung dịch Anolit cho hiệu quả như thế
nào chúng tôi tiến hành thí nghiệm :
Cho 9ml dung dịch Anolít nồng độ 30ppm vào 1ml canh trùng của mỗi loại vi khuẩn để thu nhận dung dịch hỗn hợp với nồng độ clo hoạt tính 270mg/lit. (Tỷ lệ 9ml Anolit : 1 ml canh trùng, tỷ lệ này dựa trên các số liệu thực nghiệm của Viện nghiên cứu gia cầm toàn Nga). Kết quả khử trùng của dung dịch Anolit nồng độ 270mg/lit được trình bày ở bảng 3.1
Từ kết quả bảng 3.1 cho thấy hầu hết các loại vi khuẩn với mật độ 1012 CFU/1ml đã bị vô hiệu hoá hoàn toàn sau 5 phút tiếp xúc.
Trong đó tổng số vi khuẩn hiếu khí từ 1,9x1012 ± 0,5x1012 CFU/ml sau 5 phút tiếp xúc giảm còn 2,2x102 ± 0,9x102 vi khuẩn, số lượng vi khuẩn đã giảm đi được 10 lg và sau 15 phút thì bị diệt hoàn toàn.
E.Coli, Salmonella, Staphylococcus aureus sau 5 phút tiếp xúc đã bị diệt hoàn toàn.
Cl.perfringens giảm được 8 lg, từ 7,6x109 ± 4,6x109 CFU/ml giảm còn 3,4x10 ± 1,2x10 CFU/ml và sau 15 phút tiếp xúc thì bị diệt hoàn toàn.
B.subtilis giảm 9 lg, từ 1,4x1011 ± 0,5x1011 CFU/ml sau thời gian 5 phút tiếp xúc giảm còn 2,6x102 ± 2,2x102 CFU/ml và sau 30 phút thì chỉ còn rất ít con sống sót.
Bảng 3.1. Mức sát khuẩn của dung dịch Anolit nồng độ 270mg/lit đối với một số vi khuẩn gây ô nhiễm (số lượng vi khuẩn được tính bằng CFU/ml)
Số lượng VK /1ml sau khi xử lý Anolit (CFU/ml) Tên vi khuẩn Số lượng VK /1ml
trước khi xử lý Anolit (CFU/ml) ± m 5 phút ± m 15 phút ± m 30 phút ± m Vi khuẩn hiếu khí 1,9x1012 ± 0,5x1012 2,2x102 ± 0,9x102 0 0 E.Coli 2,0x1012 ± 0,9x1012 0 0 0 S.aureus 1,2x1012 ± 0,3x1012 0 0 0 Salmonella.sp 1,5x1013 ± 0.9x1013 0 0 0 Cl.perfringens 7,6x109 ± 4,6x109 3,4x10 ± 1,2x10 0 0 Bacillus subtils 1,4x1011 ± 0,5x1011 2,6x102 ± 2,2x102 1,7x102 ±1,3x102 1,6x10 ± 0,3x10
Sau 30 phút tác dụng với dung dịch Anolit nồng độ 270mg/lit thì tất cả
các loại vi khuẩn đều bị tiêu diệt hoàn toàn, ngoại trừ vài chục con B.subtilis sống sót.
Từ kết quả thí nghiệm trên cho thấy tác dụng diệt khuẩn của dung dịch Anolit là rất tốt nên chúng tôi tiến hành thí nghiệm tiếp theo : pha loãng vi khuẩn ở các nồng độ khác nhau cho tiếp xúc với dung dịch Anolit (30ppm).
Dựa trên thực tế, ô nhiễm vi khuẩn trên thịt đã được nhiều nghiên cứu chỉ ra rằng : số lượng các loại vi khuẩn gây ô nhiễm dao động từ 102 – 106 CFU/g. Do vậy mà chúng tôi tiến hành pha loãng vi khuẩn xuống các nồng độ
106, 105, 104, 103, 102, 10 CFU/ml để phù hợp với thực tế và cho tiếp xúc với dung dịch Anolit nồng độ 30ppm (theo tỷ lệ 9ml canh trùng + 1ml Anolit).
Cho 9ml canh trùng của mỗi loại vi khuẩn pha loãng ở các nồng độ
khác nhau được xử lý với 1ml dung dịch Anolit nồng độ 30ppm, sau khi xử lý với các mức thời gian là 5 phút, 15 phút, 30 phút chúng tôi thu được kết quả
thể hiện trên bảng 3.2
Qua kết quả bảng 3.2 chúng tôi thấy với mật độ vi khuẩn từ 103 đến 104 CFU/ml thì khi ta cho 9ml canh trùng của các loại vi khuẩn xử lý với 1ml dung dịch Anolit thì đa số các loại vi khuẩn khảo sát đều bị tiêu diệt hoàn toàn sau 15 phút tác dụng. Cụ thể :
Vi khuẩn hiếu khí : với số lượng vi khuẩn là 5,9x104 ± 2,6x103 CFU/ml sau thời gian 5 phút tiếp xúc với dung dịch Anolit thì đã giảm đi còn 2,8x102 ± 9,8x10 CFU/ml và sau thời gian 15 phút thì bị diệt hoàn toàn.
E.coli : với số lượng vi khuẩn 4,6x103 ± 7,3x102 CFU/ml sau 5 phút tiếp xúc với dung dịch Anolit thì đã bị diệt hoàn toàn.
Staph. aureus : Với số lượng vi khuẩn 3,0x103 ± 7,5x10 CFU/ml sau 5 phút tiếp xúc với dung dịch Anolit, chúng cũng bị diệt hoàn toàn.
Bảng 3.2. Xác định mức sát khuẩn của dung dịch Anolit (30ppm) đối với một số vi khuẩn gây ô nhiễm. (Số lượng vi khuẩn được tính bằng CFU/ml)
Số lượng VK /1ml sau khi xử lý Anolit (CFU/ml) Tên vi khuẩn Số lượng VK /1ml
trước khi xử lý Anolit (CFU/ml) ± m 5 phút ± m 15 phút ± m 30 phút ± m Vi khuẩn hiếu khí 5,9x104 ± 2,6x103 2,8x102 ± 9,8x10 0 0 E.Coli 4,6x103 ± 7,3x102 0 0 0 S.aureus 3,0x103 ± 7,5x10 0 0 0 Salmonella.sp 3,3x103 ± 2,6x102 0 0 0 Cl.perfringens 1,5x104 ± 1,3x103 2,1x102 ± 3,7x10 0 0 Bacillus subtilis 2,8x102± 1,7x10 9,6x10 ± 0,9x10 2,7x10 ± 0,6x10 0,6x10 ± 0,2x10
Salmonella : Cũng như vậy, với số lượng vi khuẩn 3,3x103 ± 2,6x102 CFU/ml bị diệt hoàn toàn sau 5 phút tiếp xúc.
Cl.perfringens : số lượng vi khuẩn 1,5x104 ± 1,3x103 CFU/ml sau 5 phút tiếp xúc đã giảm đi còn 2,1x102 ± 3,7x10 vi khuẩn và sau 15 phút tiếp xúc thì cũng bị diệt hoàn toàn.
Bacillus subtilis : với mật độ vi khuẩn ít hơn so với các loại vi khuẩn khác, cụ thể là : với số lượng 2,8x102± 1,7x10 CFU/ml thì sau thời gian 5 phút tiếp xúc với dung dịch Anolit số lượng vi khuẩn giảm đi được chút ít ( còn 9,6x10 ± 0,9x10CFU/ml) và sau thời gian 15 phút vẫn còn vài con sống sót.
Do đó, riêng đối với vi khuẩn có nha bào (B.subtilis và Cl.perfringens) thì đòi hỏi thời gian tác dụng của Anolit nồng độ 30 ppm (30mg/lit) lâu hơn nữa hoặc là dung dịch Anolit phải có nồng độ clo hoạt tính cao hơn.
Với mỗi loại vi khuẩn khác nhau thì sự mẫn cảm của chúng với Anolit cũng khác nhau.
So với các nghiên cứu do Viện nghiên cứu chăn nuôi gia cầm (Liên bang Nga) thực hiện đã cho thấy việc khử trùng của dung dịch Anolit nồng độ
270ppm đối với các vi khuẩn phân lập từ môi trường không khí chuồng nuôi sau thời gian 30 phút tiếp xúc đã làm giảm số lượng các loại vi khuẩn xuống. Cụ thể : E.Coli giảm 13 lg, Salmonella giảm 11 lg, Staphylococcus giảm 11 lg. Mức độ khử trùng cac nhất đạt được là thuộc vi khuẩn E.Coli (Báo cáo hội thảo Quốc tế lần thứ nhất về Công nghệ hoạt hoá điện hoá, Moskva - 1997).
Cùng với các nghiên khác, nghiên cứu của chúng tôi cũng cho thấy tác dụng diệt khuẩn của dung dịch Anolít là rất hiệu quả.