5.1. Kết luận
Dựa trên những kết quả thu ựược chúng tôi ựã rút ra một số kết luận như sau:
1. đã bước ựầu xây dựng ựược quy trình chuyển gen vào bèo tấm
Woffia globosa nguyên cây thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens.
Hiệu quả chuyển gen vào bèo tấm W. globosa nguyên cây ựạt cao nhất với các yếu tố:
+ Trong 05 chủng vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens nghiên cứu, chủng AGL-1 cho hiệu quả xâm nhiễm cao nhất.
+ Mật ựộ vi khuẩn lây nhiễm thắch hợp nhất cho biến nạp ở OD600 là 0,5Ờ1,0 x 109 tế bào/ml.
+ điều kiện lây nhiễm bèo tấm Ờ vi khuẩn thắch hợp nhất là ly tâm hút chân không bằng máy ly tâm chân không với áp suất chân không 75cmHg, tốc
ựộ 1200vòng/phút, trong 20 phút.
+ Thời gian ựồng nuôi cấy bèo Ờ vi khuẩn thắch hợp nhất là 3 ngày. + Nồng ựộ Acetosyringone bổ sung thắch hợp là 200ộM.
+ Loại môi trường ựể ựồng nuôi cấy và tái sinh bèo tấm thắch hợp là môi trường SH ựặc có bổ sung 10mg/l saccarose.
2. đã xác ựịnh ựược loại kháng sinh và nồng ựộ kháng sinh thắch hợp cho việc loại bỏ vi khuẩn Agrobacterium sau khi chuyển gen ở bèo tấm
Wolffia globosa là Cefotaxim nồng ựộ 250 mg/l hoặc Timentin nồng ựộ
200mg/l.
3. Trong 2 loại kháng sinh ựể sàng lọc bèo tấm chuyển gen (geneticin
cho hiệu quả chọn lọc tốt nhất ở bèo tấm Woffia globosa.
4. Từ các thắ nghiệm chuyển gen, bước ựầu chúng tôi ựã thu ựược 12 mẫu bèo W. globosa chuyển gen sống sót trên môi trường chọn lọc. Kết quả
phân tắch PCR ựã nhận ựược 3 mẫu bèo tấm W. globosa mang gen Ha1.
5.2. đề nghị
- Cần tiếp tục các nghiên cứu nâng cao hiệu quả chuyển gen ở bèo tấm
Wolffia globosa
- Do thời gian thực hiện luận văn có hạn, vì thế các nghiên cứu phân tắch sự có mặt và biểu hiện cuả gen chuyển Ha1 trong các dòng bèo tấm chuyển gen còn chưa nhiều. Các phân tắch này cần ựược tiếp tục nhằm thu nhận giống bèo tấm W. globosa chuyển gen phục vụ cho việc sản xuất vaccine từ thực vật.