4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.2.Nghiên cứu xác ñị nh nồng ñộ ch ất kháng sinh(Cefotaxim, Timentin) thích h ợp ñể loại bỏ vi khuẩn A tumefaciens sau biến nạp
Sau khi ñồng nuôi cấy 3 ngày, bèo tấm nhiễm khuẩn khá nhiều nên trước khi ñưa vào chọn lọc bằng kháng sinh thực vật cần phải loại bỏ sạch vi khuẩn. Chính vì vậy, chúng tôi ñã tiến hành thí nghiệm nghiên cứu tìm loại chất kháng sinh và nồng ñộ thích hợp ñể diệt khuẩn sau thời gian ñồng nuôi cấy. Trong thí nghiệm này, chúng tôi sử dụng 2 loại kháng sinh ñể diệt khuẩn là Cefotaxim và Timentin với các nồng ñộ khác nhau: 0 (ðối chứng), 100, 150, 200, 250, 300mg/l và tiến hành theo dõi trong 5 ngày. Kết quả thí nghiệm ñược chúng tôi quan sát và lưu lại bằng cách chụp ảnh.
- ðối với Cefotaxim, chúng tôi quan sát thấy so với các công thức khác
thì ở công thức ñối chứng vi khuẩn phát triển khá mạnh. Sau 3–4 ngày, ở
nồng ñộ 200mg/l vi khuẩn vẫn còn phát triển nhưng với tốc ñộ rất chậm. Khi tăng nồng ñộ Cefotaxim lên 250 và 300mg/l chúng tôi quan sát thấy không có sự phát triển của vi khuẩn. Và khi chuyển bèo từ môi trường SH có bổ sung 250 và 300mg/l Cefotaxim sang môi trường SH thường thì không còn hiện tượng tái nhiễm. Tuy nhiên, ở nồng ñộ 300mg/l cánh bèo có hiện tượng giảm sức sống, tốc ñộ phục hồi và nhân sinh khối chậm hơn. Chính vì vậy, chúng tôi chọn ñã chọn Cefotaxim với nồng ñộ 250mg/l ñể diệt khuẩn sau khi biến nạp và ñồng nuôi cấy.
- ðối với Timentin, chúng tôi cũng quan sát thấy ở các công thức bổ
sung từ 0–150mg/l vẫn còn sự phát triển của vi khuẩn. Nhưng nồng ñộ
Timentin càng tăng thì tốc ñộ phát triển của vi khuẩn càng chậm lai. Và ở các công thức bổ sung từ 200–300mg/l, không còn quan sát thấy sự phát triển của vi khuẩn. Nhưng cũng giống như với Cefotaxim, khi chuyển bèo ở các công thức bổ sung 250 và 300mg/l Timentin sang môi trường SH thường thì tốc ñộ
phát triển của cánh bèo chậm hơn so với ở công thức bổ sung 200mg/l Timentin. Do ñó, chúng tôi quyết ñịnh sử dụng Timentin với nồng ñộ 200mg/l
ñể diệt khuẩn sau biến nạp và ñồng nuôi cấy.
Như vậy, có thể sử dụng cả 2 loại kháng sinh Cefotaxim với nồng ñộ
250mg/l và Timentin với nồng ñộ 200mg/l ñể loại bỏ sạch vi khuẩn trước khi
ñưa bèo tấm Wolffia globosa chuyển gen sang môi trường SH có bổ sung kháng sinh chọn lọc thực vật.