4. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
4.1.5.Nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng Acetosyringone (AS) ñế n tỷ lệ
biểu hiện của gen gus ở bèo Wolffia globosa chuyển gen
Acetosyringone (AS) là một hợp chất phenol ñược tiết ra tại vùng mô bị tổn thương của thực vật. AS ñóng vai trò cảm ứng, kích hoạt các gen vùng VIR trên Ti-plasmid của vi khuẩn Agrobacterium hoạt ñộng và tăng cường biểu hiện (Vijayachandra et al., 1995). Vì vậy, ñây là một chất quan trọng không thể thiếu trong các thí nghiệm chuyển gen bằng vi khuẩn
Agrobacterium tumefaciens. Tuy nhiên, với mỗi ñối tượng thực vật khác nhau thì lượng AS bổ sung cũng khác nhau. Chính vì vậy, chúng tôi ñã tiến hành thì nghiệm nghiên cứu ảnh hưởng của hàm lượng Acetosyringone ñến hiệu quả chuyển gen vào bèo tấm Wolffia globosa.
Cánh bèo tấm Wolffia globosa ñược lây nhiễm và ñồng nuôi cấy trên môi trường SH có bổ sung Acetosyringone ở các nồng ñộ 0, 100, 200, 300 và 400µM. Chủng vi khuẩn A. tumefaciens AGL-1 sử dụng ñể lây nhiễm ñược nuôi trong dung dịch YEB có mật ñộ OD600=0.5–1,0 và tiến hành ly tâm hỗn hợp dung dịch bèo tấm với vi khuẩn ở ñiều kiện hút chân không trong 20 phút. Kết quả thí nghiệm ñược trình bày ở bảng 5.
Bảng 5: Ảnh hưởng của Acetosyringone ñến biểu hiện của gen gus ở bèo tấm Wolffia globosa chuyển gen
CTTN Nồng ñộ AS (µM) Số cánh có ñốm xanh/Tổng số cánh nhuộm X-gluc Tỷ lệ biểu hiện gen gus (%) Mức ñộ biểu hiện gen gus
1 ðC (0) 7/324 2,16 -
2 100 35/279 12,54 ++
3 200 65/390 16,67 +++
4 300 29/189 15,34 +++
5 400 45/331 13,60 ++
Kết quả thí nghiệm cho thấy AS có ảnh hưởng rõ rệt tới biểu hiện của gen gus ở bèo tấm Wolffia globosa. Giữa công thức ñối chứng (không bổ sung AS) so với các công thức khác có sự khác biệt lớn về tỷ lệ biểu hiện của gen
gus. Ở công thức ñối chứng không bổ sung AS, tỷ biểu hiện của gen gus rất thấp chỉñạt 2,16%. Trong khi ñó, tỷ lệ biểu hiện của gen gus trong các công thức có bổ sung AS thấp nhất cũng ñạt tới 12,54%. Tỷ lệ biểu hiện tăng mạnh nhất ở bèo tấm sau khi lây nhiễm và ñồng nuôi cấy trong môi trường có bổ
sung AS 200µM và giảm dần khi tiếp tục tăng nồng ñộ AS (>200µM). Tương tự, mức ñộ biểu hiện gen gus ñã quan sát ñược tốt nhất ở công thức thí nghiệm 200µM, màu xanh chàm xuất hiện ñều trên toàn bộ cánh bèo, ít thấy hiện tượng khảm so với các công thức thí nghiệm khác. Như vậy, việc bổ
sung 200µM AS vào môi trường lây nhiễm và ñồng nuôi cấy ñã cho hiệu quả
Hình 4.5: Ảnh hưởng của Acetosyringone (AS) ñến biểu hiện của gen gus
ở bèo tấm W. globosa chuyển gen