trùng, nồng độ tinh trùng, yếu tố đực giống, chất l−ợng trứng, thời gian tiến hành thụ tinh, môi tr−ờng thụ tinh đến khả năng phân chia của phôi ở giai đoạn 2-4 tế bào.
Trong phần nghiên cứu này, chúng tôi đã sử dụng 6420 trứng bò thu từ 1056 buồng trứng phục vụ các thí nghiệm.
3.3.1 ảnh h−ởng của tinh trùng dùng trong thụ tinh ống nghiệm
trứng bò vàng
3.3.1.1 Chọn lọc tinh trùng bằng ph−ơng pháp lọc qua phân lớp percoll và bơi ng−ợc (swim-up) percoll và bơi ng−ợc (swim-up)
Tinh trùng đông lạnh trong cọng rạ loại 0,25 ml của các đực giống Holstein Friesian đ−ợc giải đông ở 37oC trong vòng 1 phút. Các cọng tinh đông lạnh nói trên đ−ợc bảo quản tốt trong nitơ lỏng, mỗi lần dùng 1 cọng rạ có số l−ợng tinh trùng sống từ 12 đến 14 triệu sau giải đông trong đó hơn 30% là tinh trùng có chất l−ợng tốt, vận động tiến thẳng.
Sau những khoảng thời gian khác nhau, lấy 1ml dung dịch bên d−ới (đối với ph−ơng pháp lọc percoll) hoặc dung dịch bên trên (đối với ph−ơng pháp bơi ng−ợc) và đếm tổng số tinh trùng khoẻ, tiến thẳng trên buồng đếm Thoma. Kết quả đ−ợc trình bày ở bảng 3.12 và 3.13.
Kết quả trong bảng 3.12 cho thấy sau thời gian từ 5 đến 10 phút lọc qua phân lớp percoll, tổng số tinh trùng loại khỏe, vận động cấp 1 vẫn ch−a đáp ứng yêu cầu về số l−ợng để đ−a vào môi tr−ờng thụ tinh.
Kể từ 15-25 phút, số l−ợng tinh trùng khỏe là đạt yêu cầu về số l−ợng để có thể đ−a vào môi tr−ờng thụ tinh.
Bảng 3.12: Kết quả chọn lọc tinh trùng bằng ph−ơng pháp lọc qua phân lớp percoll.
Thời gian xử lý (phút)
Nồng độ tinh trùng khỏe (triệu/ml) M + SD Min-Max 05 0,39 + 0,13a 0,24 – 0,55 10 0,86 + 0,11b 0,74 – 1,00 15 1,70 + 0,09c 1,60 – 1,80 20 2,80 + 0,24d 2,45 – 3,00 25 3,16 + 0,25d 2,95 – 3,50 a, b, c, d (P < 0,05)
Bảng 3.13: Kết quả chọn lọc tinh trùng bằng ph−ơng pháp bơi ng−ợc. Thời gian xử lý
(phút)
Nồng độ tinh trùng khỏe (triệu/ml) M + SD Min-Max 20 0,14 + 0,07a 0,10 – 0,25 30 0,30 + 0,07b 0,25 – 0,40 40 1,49 + 0,22c 1,20 – 1,70 50 2,83 + 0,33d 2,45 – 3,25
60 3,11 + 0,28d 2,80 – 3,45