Trong phòng thí nghiệm, VSV được nuôi cấy nhằm để dễ dàng xác định và kiểm tra khả năng sinh trưởng cũng như trao đổi chất của chúng. VSV được
nhiễm hoặc đưa vào trong vài dạng môi trường nuôi cấy giúp giữ cho chúng
sống, hoạt động và để nghiên cứu sự sinh trưởng của chúng. Việc nhiễm VSV phải được thực hiện trong điều kiện không có các VSV không mong muốn khác hoặc không bị tạp nhiễm trong môi trường nuôi cấy. Kỹ thuật vô trùng được sử dụng trong nghiên cứu VSV nhằm loại trừ các sự tạp nhiễm.
Tất cả các môi trường nuôi cấy được khử trùng trước khi sử dụng. Việc khử trùng thường được thực hiện bằng sử dụng nồi hấp áp lực. Các dụng cụ chứa môi trường như ống nghiệm hay đĩa Petri không nên mở ra cho tới khi thực sự làm việc với chúng, và thậm chí sau đó cũng vậy.
Cả hai phương pháp nuôi cấy trên đĩa petri hay trong ống nghiệm cung cấp số lượng lớn VSV trong một diện tích nhỏ và dễ dàng cho việc vận chuyển. Thạch nghiêng là các ống nghiệm chứa môi trường đặc đã được đặt nghiêng trong khi thạch đông lại. Thạch nghiêng giống như đĩa Petri cung cấp một bề
mặt sinh trưởng cho VSV nhưng ống thạch nghiêng thì dễ bảo quản và vận
chuyển hơn. Thạch cho phép làm đông cứng ở tận đáy ống nghiệm tạo ra một
môi trường thạch sâu. Độ sâu thường được sử dụng cho VSV cần ít oxy hơn
lượng đang có trên bề mặt môi trường. Môi trường thạch bán rắn chỉ chứa 0,5- 0,7% thạch thay cho 1,5% thạch có thể thường sử dụng để xác định liệu VSV có di động được hay không. Vi khuẩn di động được sẽ chuyển động từ điểm nuôi cấy tạo ra sự xuất hiện của “cây noen” đảo ngược.
Sự cấy truyền và nhiễm VSV thường được thực hiện với một que cấy vô trùng, được phủ một dây Niken-crom không bị ăn mòn, chịu nhiệt. Trong đó, đoạn cuối của dây được uốn cong thành một cái móc vòng, nó được gọi là một que cấy tròn, nếu đầu dây kim loại thẳng thì gọi là qua cấy thẳng. Đối với những
mục đích đặc biệt, sự nuôi cấy có thể cũng được cấy chuyền với các miếng gạc cotton, pipet, que gạt thuỷ tinh hoặc xilanh vô trùng. Những kỹ thuật này rất thông dụng trong nghiên cứu VSV.
Một que cấy tròn hay thẳng được sử dụng phụ thuộc vào dạng (trạng thái) của môi trường. Người ta có thể quyết định trong khi làm thí nghiệm tuỳ điều kiện và mục đích thí nghiệm.
1. Vật liệu thí nghiệm
- Ống nghiệm chứa môi trường nước thịt - Ống môi trường thạch nghiêng
- Ống môi trường thạch bán rắn
- Que cấy đầu tròn, que cấy đầu thẳng - Giá ống nghiệm, thuốc nhuộm Gram
- Nuôi cấy: dịch vi khuẩn Lactococcus lactic, Pseudomonas
2. Kỹ thuật yêu cầu
Tiến hành thí nghiệm theo thủ tục sau:
a) Thực hiện với chỉ một loại dịch vi khuẩn trong 1 lần, ngăn chặn bất kỳ sự trộn lẫn hoặc nhiễm chéo. Bắt đầu với một loại nước canh thang, nhẹ nhàng khoá đáy và lắc đều lắng cặn.
b) Để cấy vào dung dịch nước thịt, giữ que cấy có giống VSV trong tay thuận, một ống môi trường ở tay kia.
B1- Khử trùng đầu que cấy tròn bằng cách giữ trên ngọn lửa (đèn gas
hoặc đèn cồn) cho đến khi nóng đỏ.
B2- Giữ que cấy giống như một cái bút, uốn cong ngón tay út phối hợp
với lòng bàn tay nhẹ nhàng rút nút ra khỏi ống nghiệm trong khi quay ống. Không được đặt nút lấy ra xuống mặt bàn làm việc.
B3- Giữ ống nghiệm nghiêng một góc, chuyển miệng của ống nghiệm
hướng về ngọn lửa. Luôn giữ ống nuôi cấy và ống môi trường mới ở độ nghiêng để giảm thiểu lượng bụi bẩn có thể rơi vào trong ống. Không để đầu ống nghiệm quá xa hoặc dung dịch sẽ cấy rời khỏi nút.
B4- Nhúng đầu que cấy tròn đã khử trùng, được làm nguội vào dung dịch
nước thịt để lấy một vòng sức căng bề mặt dịch nuôi cấy. Đưa que cấy ra ngoài, trong khi cầm que cấy đốt miệng ống nghiệm và đút nút lại bằng cách quay ống vào nút. Đặt ống nghiệm vào giá.
B5- Lấy đầu nút ra khỏi một ống nghiệm chứa môi trường nước thịt đã
khử trùng, hơ miệng ống trên ngọn lửa. Nhúng đầu que cấy có giống VSV vào môi trường và sau đó vẽ một đường từ đáy ống. Hơ miệng ống môi trường và đậy nút lại trước khi đặt lên giá.
Không nằm ngoài mục đích giữ và cấy chuyền giữa các ống nghiệm nhưng phải thực hiện được kỹ thuật cấy chuyền vô trùng.
c) Đối với môi trường thạch nghiêng, lặp lại bước 1-4 và cấy trên thạch nghiêng bằng cách di chuyển đầu que cấy nhẹ nhàng ngang trên mặt thạch từ đáy ống lên phía đỉnh, phải cẩn thận để không chọc thủng mặt thạch. Hơ miệng ống nghiệm trên ngọn lửa và đút nút lại. Khử trùng đầu que cấy, để nguội, dán nhãn trên ống nuôi cấy.
d) Đối với môi trường thạch bán rắn, sử dụng que cấy thẳng, lặp lại bước 1-4. Cấy sâu vào môi trường bằng cách đâm sâu đầu que cấy thẳng vào giữa, sau đó rút ra. Hơ miệng ống nghiệm trên ngọn lửa và đậy nút lại. Đốt nóng que cấy, để nguội, dán nhãn ống nuôi cấy.
e) Nuôi các ống nuôi cấy ở 35oC với thời gian thích hợp.
g) Ghi nhận hiện tượng xuất hiện ở mỗi ống nuôi cấy, tham khảo các hình mẫu. h) Xem mùi vị xuất hiện của các ống nuôi cấy. Nhuộm Gram và so sánh chúng.