IV. ENZYM TRONG TRAO ĐỔI LƯU HUỲNH
2. Oxy và sự sinh trưởng của vi sinh vật
Sự có mặt hay vắng mặt phân tử oxy (O2) có thể là vô cùng quan trọng đối với sự sinh trưởng của VSV. Một số VSV gọi là VSV hảo khí đòi hỏi có oxy, trong khi các VSV khác gọi là VSV yếm khí lại không sử dụng oxy. Một lý do khiến VSV yếm khí bắt buộc không thể chịu được sự có mặt của oxy là chúng thiếu catalaza và kết quả là sự tích luỹ hydro peroxyt gây chết tế bào. Các loài hảo khí chịu khí có thể không sử dụng oxy nhưng chịu được nó kha tốt, mặc dù sự sinh trưởng của chúng có thể được tăng cường trong điều kiện vi hảo khí hầu
Một số loại vi khuẩn chịu khi một phần sinh trưởng tốt nhất trong khí quyển có nồng độ CO2 tăng (7-10%) và nồng độ O2 thấp hơn. Chúng sẽ sinh trưởng trong môi trường đặc ở độ sâu mà một lượng nhỏ oxy có thể tản mạn vào. Để nuôi cấy các VSV chịu khí một phần trên đĩa petri và môi trường không nghèo đi, một bình cây nến được sử dụng. Các đĩa và ống nghiệm xử lý được đặt trong bình lớn với một cây nến sáng. Sau khi đậy nút, tắt nến đi khi nồng độ oxy giảm. Các VSV có khả năng sống trong điều kiện có hoặc không có oxy gọi là VSV yêm khí không bắt buộc.
4 giống vi khuẩn thiếu catalaza là Streptococcus, Leucconostoc,
Lactobacillus và Clostridium. Trong đó Clostridium là yếm khí bắt buộc, còn 3
giống kia yếm khí chịu khí. 3 loài này không có hệ thống xytocrom để sản sinh ra hydro peroxyt, do đó không cần catalaza. Việc xác định sự có hay không có mặt catalaza là rất hữu ích trong định loại vi khuẩn. Khi một vài giọt hydro peroxyt 3% được cho vào khuẩn lạc và catalaza hiện diện, phân tử oxy được giải phóng ra dưới dạng bọt khí.
Trong phòng thí nghiệm, chúng ta có thể nuôi cấy vi khuẩn yếm khí bắt buộc hoặc không bắt buộc bằng cách loại trừ oxy tự do từ môi trường hoặc sử dụng môi trường biến đổi. Nhiều phương pháp nuôi cấy VSV yếm khí giải quyết được cả 2 quá trình này. Tất cả các phương pháp nuôi cấy VSV yếm khí chỉ hiệu quả nếu như mẫu hay các VSV nuôi cấy được thu thập và chuyển đi theo cách làm giảm thiểu sự biểu lộ của oxy.
2.1. Vật liệu
Đĩa petri chứa môi trường dinh dưỡng
ống nghiệm chứa môi trường Thioglycolat có chỉ thị
Bình ủ yếm khí Hydro peroxyt 3% 2.2. Dịch nuôi cấy Alcaligenes Clostridium Enterococus Escherichia coli 2.3. Thủ tục tiến hành - Không lắc ống Thioglycolat.
- Dán nhãn 4 ống canh thang và nhiễm mỗi ống một vòng que cấy một
loại vi khuẩn trong điều kiện vô trùng. - Nuôi ở 35oC
- Ghi lại sự xuất hiện sinh trưởng ở mỗi ống.
- Dùng bút đánh dấu dưới đáy chia mỗi đĩa thạch thành 4 phần. Dán nhãn 1 đĩa hào khí và 1 đĩa yếm khí.
- Ria cấy 1 đường đơn các vi khuẩn trên mỗi phần đĩa.
- Đặt ngược đĩa hảo khí nuôi ở 35oC. Đĩa yếm khí được đặt ngược trong bình ủ.
- Người hướng dẫn sẽ chứng minh làm thế nào để bình trở thành yếm khí.
10 ml nước được thêm vào túi điều chỉnh khí Gas-Pak (xúc tác hydro kết hợp oxy tạo thành nước, phản ứng sẽ dừng lại khi thêm nước vào) đặt trong bình với chỉ thị xanh methylen. Khi có mặt của oxy chỉ thị có màu xanh, chuyển thành trắng khi oxy giảm đi.
- Nuôi bình ở 35oC
- Sau khi nuôi cấy, ghi lại sự sinh trưởng của vi khuẩn trên mỗi đĩa.
- Thực hiện kiểm tra thử catalaza bằng cách cho thêm vài giọt H2O2 3% vào các khuẩn lạc khác nhau trên đĩa thạch. Test catalaza dương tính sẽ sinh ra bọt bong bóng trắng. Có thể dùng kính hiển vi để xác định rõ hơn các bọt bóng. Test thử catalaza cũng có thể được thực hiện trên lam kính. Vi khuẩn sinh trưởng trên môi trường thạch máu có thể sử dụng phương pháp này.