Chi Annulohypoxylon có hình thái chất nền dạng phẳng dẹt, lỗ miệng có 1 vòng dạng phẳng bao quanh, đỉnh túi bào tử hình đĩa, bào tử đơn bào mầu nâu hoặc nâu nhạt, vỏ bào tử có 1 điểm dày lên ở cạnh. Trước đây, các loài thuộc chi này được xếp vào nhóm Annulata thuộc chi Hypoxylon. Năm 2005, dựa trên kết quả nghiên cứu phân tích trình tự ADN và sự khác biệt về đặc điểm hình thái, Hsieh và cs đã tách các loài có đặc điểm trên thành chi riêng, đặt tên là Annulohypoxylon.
Từ kết quả phân tích trình tự của 11 taxon A. stygium MP712;
Annulohypoxylon sp. MP713; A. bovei var. microsporum MP728;
Annulohypoxylon sp. MP760; Annulohypoxylon sp. CP602; A. moriforme var. microdiscus CP740; A. atroroseum CP781; A. urceolatum CP784; Annulohypoxylon sp. CP836; A. moriforme MP339; A. nitens MP779 thu được tại KVNC, chúng tôi tiến hành xây dựng mối quan hệ di truyền giữa chúng với các taxon gần gũi trong chi Annulohypoxylon và một số taxon thuộc chi Daldinia, Biscogniauxia và Hypoxylon. Kết quả thể hiện tại Hình 3.8 được chia thành 4 nhóm chính.
Hình 3.8: Mối quan hệ di truyền của các taxon trong chi Annulohypoxylon dựa trên trình tự ITS rADN.
I II III IV 63 84 DQ201121 Annulohypoxylon archeri
JQ747513 A. bovei var microsporum
MP728 A. bovei var microsporum
100 MP713 Annulohypoxylon sp 99 DQ322129 Annulohypoxylon moriforme MP339 Annulohypoxylonmoriforme 100 FJ481150 Annulohypoxylonannulatum 100 95 FN252417 Annulohypoxylonpurpureonitens DQ223757 Annulohypoxylonpurpureonitens 100 100
EU714403 Annulohypoxylonnitens
MP779 Annulohypoxylonnitens 100 CP602 Annulohypoxylon sp 80 JQ747510 Annulohypoxylontruncatum JQ303335 Annulohypoxylon truncatum 100 97 MP760 Annulohypoxylon sp
AY951669 A. stygium var. annulatum
87
DQ322103 Annulohypoxylonurceolatum
CP784 Annulohypoxylonurceolatum
100
DQ322097 A.leptascum var macrosporum 75
AM269780 A. thouarsianum var. thouarsianum
84
CP836 Annulohypoxylon sp
99
AJ537403 Annulohypoxylon stygium
MP712 Annulohypoxylon stygium 100 FN252415 Annulohypoxylon atroroseum CP781 Annulohypoxylon atroroseum 100 100 100 FN252443 Hypoxylon monticulosum
AF201710 Hypoxylon papillatum
89
AB284189 Daldinia eschscholzii
KC414256 Daldinia eschscholtzi
99
AM749931 Daldinia clavata
100 55
GQ428318 Biscogniauxia nummula
EF155488 Biscogniauxia nummula
100
EU715651 Biscogniauxia atropunctata
EF026136 B. philippinensis var. microspora
83 100 90
HM192904 Daldinia childiae
AM292045 Daldania concentrica
100 94
CP740 A. moriforme var. microdiscus
98
EF026137 A. moriforme var. microdiscus
100 JN979418 Hypoxylon fendleri JN979417 Hypoxylon fendleri 100 JQ009318 Hypoxylon trugodes JQ009319 Hypoxylon trugodes 100
EU715619 Hypoxylon fragiforme
JN564001 Hypoxylon fragiforme
94
KC771458 Hypoxylon investiens
100
GU322455 Xylaria montagnei
JN225908 Xylaria castorea
100 0,1
Nhóm I là mối quan hệ di truyền của các taxon thuộc chi
Annulohypoxylon trong đó có 6 taxon thu được tại KVNC. A. bovei var.
microsporum MP728 có quan hệ di truyền gần gũi nhất với Annulohypoxylon sp MP713 với tỉ lệ bootstrap 99%. Xét về đặc điểm hình thái thì 2 taxon này cũng có rất nhiều đặc điểm giống nhau như: chất nền dạng ụ, phản ứng với dung dịch KOH10% cho màu xanh lục, rãnh mầm dạng thẳng. Điểm khác biệt chỉ là A. bovei var. microsporum MP728 có kích thước bào tử lớn hơn và đỉnh túi bào tử không bắt màu (phụ lục 1).
A.moriforme MP339 có quan hệ di truyền gần gũi nhất với A.annulatum, tỉ lệ bootstrap lên đến 100%. Đây là 2 taxon có hình thái chất nền dạng ụ mọc nhô cao trên bề mặt cơ chất, vì vậy, khi định loại nếu dựa vào hình thái chất nền ngoài sẽ dễ nhầm lẫn với nhau. Sự khác biệt thể hiện ở phản ứng màu của chất nển với KOH 10%, hình dáng và kích thước bào tử (phụ lục 1).
A. nitens MP779 và Annulohypoxylon sp CP602 có quan hệ di truyền tương đối gần gũi với tỉ lệ bootstrap là 80%. Ngoài ra, cả 2 taxon này có mối quan hệ di truyền gần nhất với A. truncatum, tỉ lệ bootstrap là 97%.
Annulohypoxylon sp. MP760 tách thành nhánh riêng biệt, có quan hệ di truyền gần nhất với A. stygium var. annulatum, tỉ lệ bootstrap là 87%.
Nhóm II là các taxon thuộc chi Annulohypoxylon và 2 taxon thuộc chi
Hypoxylon. A. urceolatum CP784 có quan hệ di truyền gần nhất với A. leptascum var. macrosporum, tỉ lệ bootstrap là 75%. Hai taxon này có đặc điểm hình thái lẫn hiển vi rất gần nhau, nhưng sự khác biệt quan trọng thể hiện ở kiểu rãnh mầm và kích thước bào tử (phụ lục 1).
Annulohypoxylon sp. CP836 tách thành nhánh riêng, về đặc điểm hình thái ngoài cũng có rất nhiều điểm riêng biệt so với các taxon trong nhóm.
A. stygium MP712 và A. atroroseum CP781 có mối quan hệ di truyền rất gần nhau, tỉ lệ bootstrap lên tới 100%. Về đặc điểm hình thái ngoài, 2
taxon này cũng khó phân biệt nhau. Sự khác biệt chỉ là phản ứng màu của chất nền với dung dịch KOH 10% và dạng rãnh mầm (phụ lục 1).
Nhóm III bao gồm các taxon thuộc chi Daldinia, Biscogniauxia. Đây là 2 chi có mối quan hệ di truyền gần gũi với chi Annulohypoxylon và chi
Hypoxylon. Các nghiên cứu trước đây của Hsieh và cs (2005), Peláez và cs (2008) đã xác định rõ mối quan hệ này [48, 104].
Nhóm IV hầu hết các taxon thuộc chi Hypoxylon, chỉ có 2 taxon thuộc chi Annulohypoxylonlà A. archeri và A. moriforme var. microdiscus CP740. Mặc dù A. archeri và A. moriforme var. microdiscus CP740 nằm cùng nhóm nhưng mối quan hệ di truyền của 2 taxon này với các taxon trong chi
Hypoxylon không cao. Xét về đặc điểm hình thái, 2 taxon này có nhiều điểm tương đồng với các taxon thuộc chi Hypoxylon như màu sắc chất nền, thể quả, đĩa lỗ miệng, bào tử và túi bào tử. Tuy nhiên, lỗ miệng có viền dạng phẳng hình đĩa và vỏ bào tử có điểm dày lên của 2 taxon này vẫn là đặc điểm đặc trưng để xác định chúng thuộc chi chi Annulohypoxylon [48, 55, 104]. Từ những bằng chứng phân tử cũng như hình thái, rất có thể nguồn gốc chi
Annulohypoxylon xuất phát từ 2 taxon A. moriforme var. microdiscus và A. archeri, tuy nhiên vẫn cần có nhiều hơn nữa các bằng chứng sinh học phân tử để làm rõ vấn đề này.
3.3.3. Mối quan hệ di truyền của các taxon trong chi Biscogniauxia
Chi Biscogniauxia có những đặc điểm như: chất nền dạng phẳng dẹt thường nằm xen dưới các vỏ cây khô, bào tử màu nâu có 1 đến 2 tế bào, đỉnh túi bào tử hình trụ bắt màu xanh với thuốc nhuộm Melzer’s, vỏ bào tử không bị tách trong dung dịch KOH 10% [59].
Từ kết quả thu được, chúng tôi đã phân tích trình tự của 4 taxon là B. philippinensis var. microspora CP747, B. latirima MP811, Biscogniauxia
phân tích và các taxon có quan hệ gần gũi thể hiện tại Hình 3.9 được chia thành 2 nhóm chính.
Hình 3.9: Mối quan hệ di truyền của các taxon trong chi Biscogniauxia dựa trên trình tự ITS rADN.
Nhóm I là các taxon thuộc chi Biscogniauxia được chia làm 3 nhánh chính: Nhánh 1 gồm 3 taxon trong đó B. philippinensis var. microspora
CP747 có mối quan hệ gần gũi với B. latirima MP811, tỉ lệ bootstrap 100%.
EF026135 Biscogniauxia latirima
MP811 Biscogniauxia latirima
100
CP747 B. philippinensisvar. microspora
EF026136 B. philippinensis var microspora 92
100
EU715651 Biscogniauxia atropunctata
88 DQ631933 Biscogniauxia capnodes CP807 Biscogniauxia capnodes 100 CP724 Biscogniauxiasp 100
EF155488 Biscogniauxia nummularia
GQ428318 Biscogniauxia nummularia
100 98 72
EF026132 Biscogniauxia anceps
EF026133 Biscogniauxia cylindrispora 98
100
AM292038 Daldinia fissa
AF176975 Daldinia petriniae
57
AF176982 Daldinia grandis
88 60
EU715619 Hypoxylon fragiforme
JN564001 Hypoxylon fragiforme
100
AF201710 Hypoxylon papillatum
100
AB524025 Xylaria grammica
AY183369 Xylaria arbuscula
53 FJ205468 Xylaria hypoxylon 100 0,1 I II
Hình thái lỗ miệng của chúng cũng đều ở dạng lõm thấp hơn bề mặt chất nền. Tuy nhiên, bào tử B. philippinensis var. microspora có thêm phần phụ trong suốt còn B. latirima là bào tử đơn (phụ lục 1). Những nghiên cứu của Hsieh và cs (2005) cũng đã xác định mối quan hệ di truyền của các taxon này [48].
Nhánh 2 có 3 taxon, trong đó Biscogniauxia sp.CP724 và B. capnodes
CP807 có mối quan hệ di truyền rất gần gũi với nhau, tỉ lệ bootstrap 100%. Xét về đặc điểm hình thái ngoài và cấu trúc hiển vi thì 2 taxon này hầu như không khác nhau nhiều, điểm duy nhất có thể phân biệt chính là hình dáng bào tử và kích thước bào tử (phụ lục 1). Ngoài ra, 2 taxon trên còn có mối quan hệ gần gũi với B. nummularia, về hình thái và cấu trúc hiển vi B. nummularia cũng có nhiều điểm tương đồng với B. capnodes.
Nhánh 3 gồm 2 taxon là B. anceps và B. cylindrispora nằm tách riêng thành một nhánh và có mối quan hệ di truyền gần gũi nhau với tỉ lệ bootstrap 98%.
Nhóm II gồm các taxon thuộc chi Daldinia, Hypoxylon và Xylaria. Chi
Daldinia và Hypoxylon có quan hệ gần gũi với nhau hơn và chi Xylaria tách biệt khá rõ ràng. Kết quả này cũng trùng khớp với các nghiên cứu của Hsieh và cs (2005), Peláez và cs (2008) [48, 104].
3.3.4. Mối quan hệ di truyền của các taxon thuộc chi Daldinia
Chi Daldiniađược đặc trưng bởi hình thái chất nền có dạng cầu hoặc bán cầu mọc cao hẳn lên bề mặt cơ chất, có cuống hoặc không. Bào tử đơn bào, màu nâu, vỏ bị tách trong dung dịch KOH 10%. Đến nay, các nhà khoa học đã xác định 41 loài được tìm thấy khắp nơi trên toàn thế giới [57].
Trong nghiên cứu này, chúng tôi chỉ phân tích được trình tự của
Daldinia echscholzii MP185, mối quan hệ giữa các taxon thể hiện tại (Hình 3.10) bao gồm 2 nhóm:
Hình 3.10: Mối quan hệ di truyền của các taxon trong chi Daldinia dựa trên trình tự ITS rADN.
Nhóm I là các taxon thuộc chi Daldinia, trong đó D. echscholzii
MP185 có mối quan hệ di truyền gần gũi nhất với D. clavata với tỉ lệ bootstrap 99% và 2 taxon này có mối quan hệ gần gũi với D. caldariorum, tỉ
HM192909 Daldinia decipiens
AM292040 Daldinia decipiens
100
AF176975 Daldinia petriniae
100
HM192904 Daldinia childiae
HM192905 Daldinia childiae
100 70
AM292045 Daldinia concentrica
FN539044 Daldinia concentrica
100
AF176968 Daldinia loculata
AF176982 Daldinia grandis
99 66
AB284189 Daldinia eschscholzii
MP185 Daldinia echscholzii
100
AM749931 Daldinia clavata
99
EF026144 Daldinia caldariorum
99 JQ009319 Hypoxylon trugodes 61 JN979427 Hypoxylon hypomiltum JN979435 Hypoxylon monticulosum 99 74 DQ631933 Biscogniauxia capnodes
EF026132 Biscogniauxia anceps
83
EF155488 Biscogniauxia nummularia
100
AB524025 Xylaria grammica
AY183369 Xylaria arbuscula
100
GU324743 Xylaria allantoidea
100 0,1
I
lệ bootstrap đạt tới 99%. Tuy nhiên, xét về hình thái lẫn cấu trúc hiển vi, D. echscholzii khác nhiều so với D. clavata và D. caldariorum. Ngược lại D. echscholzii có nhiều đặc điểm hình thái rất gần gũi với D. concentrica, điểm khác biệt chỉ ở phản ứng màu của chất nền với dung dịch KOH 10% và kích thước bào tử (phụ lục 1). Mối quan hệ di truyền này của 3 taxon trên cũng phù hợp với các nghiên cứu của Hsieh và cs (2005) [48].
Nhóm II là các taxon thuộc chi Biscogniauxia, Hypoxylon và Xylaria, trong đó, chi Hypoxylon có mối quan hệ gần gũi hơn so với 2 chi còn lại. Mối quan hệ này cũng đã được Hsieh và cs (2005) xác định [48].