* Nguyên tắc: Đờng khử khi đun nóng với dung dịch kiềm cùng với ferixyanua sẽ khử ferixyanua thành feroxyanua và đờng khử chuyển thành axít đ- ờng. Dùng metylen xanh làm chất chỉ thị sẽ mất màu xanh khi phản ứng kết thúc. Phản ứng chính nh sau:
2K3Fe(CN)6 + 2KOH + CH2OH(CHOH)4CHO →t0
→
t0 2K4Fe(CN)6 + 2H2O + COOH(CHOH)4COOH * Cách tiến hành:
- Muốn xác định đợc đờng tổng số ta phải thuỷ phân lợng đờng có trong dịch quả thành đờng khử.
- Cách thuỷ phân: Lấy chính xác 25 ml dịch quả cho vào cốc có mỏ 250 ml. Cho thêm 10 ml dung dịch HCl (tỷ lệ HCl đậm đặc/nớc cất = 1/1). Đặt bình vào nồi cách thuỷ ở nhiệt độ 70 - 800C trong 5 phút, sau đó làm nguội nhanh đến 200C. Dùng NaOH 30% để trung hoà đến pH = 7 với sự trợ giúp của pH met. Dịch thu đợc cho vào bình định mức 50 ml, thêm nớc cất cho tới ngấn bình.
- Xác định hàm lợng đờng khử theo phơng pháp Graxyanop: Dùng pipet lấy đúng 20 ml dung dịch ferixyanua kali cho vào bình tam giác 250 ml, thêm vào đó 5 ml dung dịch KOH 2,5N và 3 - 4 giọt xanh metylen (nếu nồng độ dịch đờng thấp hơn 0,25% thì lấy 10 ml dung dịch ferixyanua kali và 2,5 ml dung dịch KOH 2,5N). Lắc nhẹ và đặt lên bếp điện đun sao cho sau 1 - 2 phút thì sơi. Tiếp đó, dùng dịch đờng đã thuỷ phân để chuẩn tới mất màu xanh của xanh metylen. Màu của hỗn hợp phản ứng sẽ thay đổi từ xanh sang phớt hồng và cuối cùng là vàng da cam thì kết thúc.
* Kết quả: Hàm lợng đờng đợc tính theo cơng thức: Đ = ì100
x
a (g/100ml) Trong đó:
x: Số ml dịch đờng tiêu hao khi chuẩn hết 20 ml dung dịch ferixyanua 1%. a : Lợng glucoza tơng ứng 20 ml ferixyanua 1%.
Để xác định a: Cân 0,5 g glucoza tinh khiết đã sấy tới khối lợng khơng đổi, hồ tan bằng nớc cất rồi cho vào bình định mức 100ml, thêm nớc cất đến ngấn bình, ta đợc dung dịch glucoza chuẩn chứa 5mg/ml.
Dùng dung dịch này để chuẩn 20 ml dung dịch ferixyanua 1%. Giả sử số ml dịch glucoza dùng để chuẩn là a0 thì hệ số a (mg) = a0 ì 5 .