Phơng pháp đếm số tế bào hay đợc dùng để xác định mật độ tế bào trên 1ml dịch. Dụng cụ dùng để đếm số tế bào là buồng đếm hồng cầu.
Buồng đếm hồng cầu là một phiến kính có kích thớc 75ì32ì4 mm. Mặt phiến kính đợc chia làm 3 khoang, khoang giữa thấp hơn 2 khoang bên 0,1 mm và đợc chia thành 2 khoang nhỏ nhờ một rãnh dọc. Trên mỗi khoang nhỏ này có kẻ một lới gồm nhiều ơ vng lớn (diện tích ơ lớn là 1/25 mm2), mỗi ô vuông lớn lại chia thành các ơ vng nhỏ có diện tích là 1/400 mm2. Buồng đếm có kèm theo lá kính đậy.
- Cách tiến hành:
+ Lắc đều canh trờng, dùng micropipet để pha loãng canh trờng theo tỷ lệ thích hợp.
+ Dùng bơng thấm nớc cất và phết nhẹ lên 2 khoang bên của buồng đếm, đặt lá kính ấn nhẹ để lá kính dính vào phiến kính. Dùng pipet lấy dịchnghiên cứu đã pha loãng cho vài giọt vào khe hở giữa lới đếm và lá kính. Khơng để dịch rơi xuống các rãnh và khơng để tạo bọt khí.
+ Đặt kính đếm lên khay kính và quan sát bằng vật kính 40X.
+ Đếm số tế bào trong 5 ô lớn chéo nhau tức là 80 ô nhỏ, những tế bào nằm trên đờng gạch thì chỉ đếm những tế bào có hơn nửa phần nằm trong ơ đang
đếm. Để đảm bảo độ chính xác của kết quả , phải đếm lặp lại từ 3 đến 4 lần. Nếu số tế bào trong một ơ q thì nên pha lỗng tiếp.
- Cách tính mật độ tế bào:
Số tế bào có trong 1ml canh trờng là : X = v f
a ì ì ì ì 1000 25 1 10 1
Trong đó: a: Số tế bào trung bình có trong 5 ơ lớn. f: Hệ số pha loãng của canh trờng.