2.3.2.1. Đánh giá kích thước tiểu phân trung bình (KTTP) và phân bố kích thước tiểu phân (PDI)
Nguyên tắc xác định KTTP: KTTP xác định bằng phương pháp tán xạ laser. Chiếu một chùm tia laser vào hỗn dịch chứa các tiểu phân có kích thước khác nhau sẽ thu được mức độ tán xạ ánh sáng khác nhau. Bằng cách đo cường độ tán xạ có thể xác định được KTTP trung bình.
Tiến hành: Mẫu sau khi li tâm 1000 rpm trong 10 phút được pha loãng bằng một lượng nước thích hợp đã lọc qua màng lọc cellulose 0,2 µm để tránh hiện tượng đa tán xạ. Tốc độ đếm tiểu phân (count rate) nằm trong khoảng 200-400 kcps. Tiến hành đo mẫu trên máy quang phổ photon ánh sáng Zetasizer Nano ZS90 ở nhiệt độ 25 ± 2ºC.
Đánh giá kết quả: Zaverage, PDI. Trong đó, chỉ số Zaverage (đơn vị đo “d. nm” là số nanomet đường kính tiểu phân) gần tương đương với KTTP trung bình của mẫu khi giá trị PDI nhỏ (0 - 0,3) và dùng để so sánh về kích thước giữa các mẫu niosome khác nhau. Khi PDI lớn (> 0,5) thì chỉ số Zaverage không có ý nghĩa, dựa vào vị trí của các peak trên đồ thị phân bố KTTP để so sánh kích thước giữa các mẫu [7].
2.3.2.2. Xác định hàm lượng dược chất trong hỗn dịch bào chế sau li tâm
Nguyên tắc: Sử dụng lực li tâm ở tốc độ thấp và thời gian ngắn để loại tinh thể KTTP lớn (micron), giữ lại tinh thể KTTP nhỏ hơn. Từ đó sơ bộ xác định được hàm lượng dược chất ở dạng nano trong hỗn dịch bào chế.
Tiến hành: Mẫu nghiền bi fenofibrat pha loãng bằng một lượng nước cất thích hợp đã lọc qua màng cellulose acetat 0,2 µm. Khuấy đều trong 5 phút để phân tán đều hỗn dịch.
Mẫu dược chất toàn phần: Lấy chính xác 1 ml hỗn dịch trên cho vào bình định mức thích hợp (𝐷𝑡𝑝- Độ pha loãng của mẫu toàn phần). Thêm 5 ml MeOH, đậy kín và siêu âm trong 10 phút. Bổ sung dd NaLS 0,72% vừa đủ đến vạch, lắc đều. Đo quang ở bước sóng 289 nm với mẫu trắng là dd NaLS 0,72%.
23
Mẫu hỗn dịch dược chất sau li tâm: Hút chính xác 10 ml hỗn dịch trên cho vào ống li tâm 14 ml và tiến hành li tâm ở tốc độ 1000 rpm trong 10 phút. Hút 1 ml dịch phía trên sau li tâm vào bình định mức thích hợp (𝐷𝑙𝑡 - Độ pha loãng của mẫu li tâm), bổ sung bằng dd NaLS 0,72% vừa đủ đến vạch, lắc đều để hòa tan. Đo quang ở bước sóng 289 nm.
Hàm lượng dược chất (HLDC) sau li tâm được tính bằng công thức sau: 𝐻𝐿𝐷𝐶 𝑠𝑎𝑢 𝑙𝑦 𝑡â𝑚 𝑥 𝑟𝑝𝑚 = 𝐴𝑙𝑡∗ 𝐷𝑙𝑡
𝐴𝑡𝑝∗ 𝐷𝑡𝑝∗ 100% Trong đó :
𝐷𝑙𝑡, 𝐷𝑡𝑝 là độ pha loãng của mẫu sau li tâm ở 1000 rpm và mẫu toàn phần. 𝐴𝑙𝑡, 𝐴𝑡𝑝 là mật độ quang của mẫu sau li tâm ở 1000 rpm và mẫu toàn phần.