2.3.3.1. Xác định hàm lượng dược chất trong cốm sau khi phân tán và li tâm ở tốc độ 1000rpm.
Nguyên tắc: Tương tự như mục 2.3.2.2.
Tiến hành:
Mẫu trắng: dd NaLS 0,72%.
Mẫu chuẩn: Cân chính xác khoảng 10 mg FB vào bình định mức 100 ml. Hòa tan bằng 10 ml MeOH, siêu âm 10 phút cho tan hoàn toàn rồi bổ sung vừa đủ bằng dung dịch NaLS 0,72%. Pha loãng 10 lần bằng dd NaLS 0,72% và đo quang ở bước sóng 289 nm.
Mẫu thử: Cân chính xác lượng cốm/ bột viên chứng sau khi nghiền có chứa khoảng 10 mg FB vào ống li tâm 14 ml. Thêm chính xác 10 ml nước cất. Lắc trong 10 phút cho cốm phân tán đều rồi tiến hành li tâm ở tốc độ 1000rpm. Sau đó hút 1 ml dịch phía trên pha loãng vào bình định mức thích hợp (𝐷𝑙𝑡- Độ pha loãng của mẫu li tâm), bổ sung bằng dd NaLS 0,72% vừa đủ đến vạch, lắc đều để hòa tan. Đo quang ở bước sóng 289 nm với mẫu trắng là dd NaLS 0,72%.
Hàm lượng dược chất trong cốm sau khi phân tán và li tâm được tính bằng công thức sau:
𝐻𝐿𝐷𝐶 𝑠𝑎𝑢 𝑙𝑖 𝑡â𝑚 1000 𝑟𝑝𝑚 = 𝐴𝑙𝑡∗ 𝐷𝑙𝑡∗ 𝐶𝑐
24 Trong đó :
𝐷𝑙𝑡 là độ pha loãng của mẫu sau li tâm ở x rpm.
𝐴𝑙𝑡, 𝐴𝑐 là mật độ quang của mẫu sau li tâm ở 1000 rpm và mẫu chuẩn. 𝐶𝐶 là nồng độ của mẫu chuẩn (µg/ml).
𝑚𝑐ố𝑚 là khối lượng cân của mẫu cốm (g). HLDCTP là hàm lượng FB trong cốm (%)
Chỉ tiêu định lượng, độ hoà tan cốm Fenofibrat được xây dựng theo chuyên luận viên nén Fenofibrat Dược điển Mĩ 43 [44].
2.3.3.2. Định lượng
Phương pháp sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC)
Chuẩn bị mẫu:
Nước acid hóa: Điều chỉnh nước cất đến pH 2,5 ± 0,1 bằng acid phosphoric đặc.
Pha động: Acetonitril – nước acid hóa (70 : 30).
Dung dịch chuẩn gốc: Pha dung dịch fenofibrat chuẩn trong pha động có nồng độ chính xác khoảng 0,5 mg/ml.
Dung dịch chuẩn: Pha dung dịch fenofibrat chuẩn trong pha động có nồng độ chính xác khoảng 0,05 mg/ml.
Dung dịch thử gốc: Cân chính xác một lượng cốm tương ứng với 50 mg fenofibrat vào bình định mức 100 ml, thêm 30 ml nước acid hóa, lắc để phân tán đều. Thêm khoảng 50 ml acetonitril, lắc siêu âm 10 phút để hòa tan. Thêm acetonitril vừa đủ đến vạch. Lắc đều, lọc.
Dung dịch thử: Pha loãng 5,0 ml dung dịch thử gốc thành 50,0 ml bằng pha động.
Dung dịch thử độ thích hợp của hệ thống sắc ký: Cân khoảng 5,0 mg mỗi chuẩn fenofibrat tạp A và fenofibrat tạp B vào bình định mức 50,0 ml, hòa tan và pha loãng vừa đủ thể tích bằng acetonitril. Hút 1,0 ml dung dịch thu được vào bình định mức 200 ml, pha loãng vừa đủ bằng pha động để được dung dịch chứa 0,5 µg/ml mỗi chuẩn tạp A và tạp B.
Điều kiện sắc ký: Sử dụng cột sắc kí là Cột RP18, 250 x 4,6 mm, 5µm, duy trì ở 35°C, Detector UV ở bước sóng 286 nm. Tốc độ dòng: 1,2 ml/min. Thể tích tiêm: 10 µl.
25
Tiêm dung dịch thử độ thích hợp của hệ thống: độ phân giải giữa 2 pic tạp chất A và B của fenofibrat không ít hơn 2,0.
Tiêm dung dịch chuẩn: RSD% của diện tích pic fenofibrat từ 06 lần tiêm lặp lại không quá 2,0%.
Tiêm lần lượt dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tính hàm lượng fenofibrat trong cốm dựa vào diện tích pic thu được từ dung dịch chuẩn, dung dịch thử và hàm lượng C20H21ClO4 của fenofibrat chuẩn.
* Công thức tính toán:
𝐻à𝑚 𝑙ượ𝑛𝑔 = 𝑆𝑡 𝑥 𝑀𝑐 𝑥 𝐻𝐿𝑐 𝑥 𝐷𝑡
𝑆𝑐 𝑥 𝐷𝑐 𝑥 𝑀𝑡 𝑥 100% Trong đó
- St, Sc: Diện tích pic từng dung dịch thử & fenofibrat chuẩn; - Mc, Mt: Lượng cân fenofibrat chuẩn& mẫu thử (g);
- HLc: Hàm lượng của chuẩn (%); - Dt, Dc: Độ pha loãng thử& chuẩn;
2.3.3.3. Độ hoà tan
Mẫu thử: Lượng cốm chứa 145 mg fenofibrat
Điều kiện thử hoà tan như sau:
Thiết bị kiểu cánh khuấy, môi trường: 1000 ml dung dịch NaLS 0,05 M, tốc độ cánh khuấy: 50 rpm, thời gian: 30 phút.
Tiến hành: Xác định hàm lượng hoạt chất hòa tan bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao.
Điều kiện sắc ký:
- Cột sắc ký: Cột RP18, 150 x 4,6 mm, 5µm, Detector UV ở bước sóng 286 nm, tốc độ dòng: 1,0 ml/min, thể tích tiêm: 10 µl.
Chuẩn bị mẫu:
Dung dịch đệm pH 2,9: Điều chỉnh pH của dung dịch kali dihydrophosphat 136 mg/l đến pH 2,9 ± 0,05 với dung dịch acid phosphoric 10%.
Pha động: Methanol – dung dịch đệm pH 2,9 (80 : 20).
Dung dịch chuẩn: Pha dung dịch fenofibrat trong pha động có nồng độ chính xác khoảng 0,145 mg/ml.
26
Dung dịch thử: Sau thời gian thử, hút dung dịch thử, lọc qua màng lọc 0,45 µm, bỏ dịch lọc đầu.
Thử độ thích hợp của hệ thống sắc ký: Tiêm lặp lại 06 lần dung dịch chuẩn, RSD% của diện tích pic fenofibrat không quá 2,0%, hệ số đối xứng pic (T) không quá 2,0.
Tiêm lần lượt dung dịch chuẩn và dung dịch thử. Tính hàm lượng fenofibrat trong cốm hòa tan dựa vào diện tích pic thu được từ dung dịch chuẩn, dung dịch thử và hàm lượng C20H21ClO4 của fenofibrat chuẩn.
Công thức tính toán
𝐻à𝑚 𝑙ượ𝑛𝑔 = 𝑆𝑡 𝑥 𝑀𝑐 𝑥 𝐻𝐿𝑐 𝑥 𝐷𝑡
𝑆𝑐 𝑥 𝐷𝑐 𝑥 𝑀𝑡 𝑥 𝐻𝐿𝑓 𝑥 100%
Trong đó:
- St, Sc: Diện tích pic từng dung dịch thử & fenofibrat chuẩn; - Mc, Mt: Lượng cân fenofibrat chuẩn& cốm fenofibrat(g); - HLc, HLf: Hàm lượng của chuẩn và cốm fenofibrat(%); - Dt, Dc: Độ pha loãng thử& chuẩn;
2.3.3.4. Đánh giá hiệu suất tạo hạt:
Hiệu suất tạo hạt được tính theo công thức sau: 𝐻𝑝 =𝑚𝑡𝑡
𝑚𝑙𝑡𝑥100 (%)
Trong đó: mtt là khối lượng chất rắn tăng lên sau khi bao (g) mlt là khối lượng chất rắn sử dụng để bao (g)
2.3.3.5. Đánh giá kích thước cốm:
Phương pháp rây thủ công: Sử dụng rây có kích thước 250 µm để xác định kích thước cốm.
Cân khối lượng khoảng 20g bột cốm, cho qua rây có kích thước 250 µm, gõ rây cho cốm đi qua rây trong 5 phút.
Cân khối lượng cốm đi qua rây.
2.3.3.6. Xác định khối lượng riêng biểu kiến, chỉ số Carr và độ trơn chảy:
27
Nguyên tắc: Cân một lượng cốm có khối lượng xác định cho vào ống đong, đọc thể tích cốm, sau đó đặt lên máy và gõ với tần số xác định đến thể tích không đổi. Khối lượng riêng biểu kiến là tỷ lệ giữa khối lượng và thể tích sau khi gõ.
Tiến hành: Cân lượng cốm m (g) tương ứng khoảng 20 ml cho vào ống đong 50 ml, đọc thể tích thô (𝑉𝑡ℎô). Gõ liên tục trong 3 phút theo chương trình đã định bằng máy đo tỉ trọng Erweka SVM thu được thể tích thực (𝑉𝑡ℎự𝑐).
Khối lượng riêng biểu kiến được tính: 𝐷𝑏𝑘 = 𝑚
𝑉𝑡ℎự𝑐 (g/cm3)
Xác định độ trơn chảy:
Tiến hành đo độ trơn chảy của cốm trên máy đo độ trơn chảy Erweka, GTL với đường kính phễu 10 mm. Cân lượng cốm khoảng 20 g, 40 g, 60 g, 80 g cho lên buồng chứa bột của máy. Xác định thời gian cốm chảy qua phễu.
Độ trơn chảy của cốm được tính bằng công thức:
Độ 𝑡𝑟ơ𝑛 𝑐ℎả𝑦 (𝑔/𝑠) = 𝑠ố 𝑔𝑎𝑚 𝑝𝑒𝑙𝑙𝑒𝑡 𝑡ℎờ𝑖 𝑔𝑖𝑎𝑛 𝑝𝑒𝑙𝑙𝑒𝑡 𝑐ℎả𝑦