2.3.5.1. Thiết kế mô hình đánh giá sinh khả dụng
Chuẩn bị động vật thí nghiệm: 6 con chó đực trưởng thành có trọng lượng 14- 16kg. Cho chó nhịn đói 12 giờ trước khi tiến hành thí nghiệm.
Chuẩn bị mẫu thử:
- Viên nén fenofibat 145 mg được bào chế ở quy mô 1000 viên/ lô. - Thuốc đối chứng Lypanthyl 145
Mô hình đánh giá SKD: 6 con chó được chia làm 2 nhóm (mỗi nhóm 3 con). - Nhóm 1: cho uống viên đối chứng Lypanthyl 145 với 100ml nước ấm. - Nhóm 2: cho uống viên nén fenofibrat 145mg với 100ml nước ấm.
Cho chó ăn và uống sau khi uống thuốc 4 và 11 giờ. Chó không được uống nước trong vòng 1 giờ trước và sau khi uống thuốc.
Lấy mẫu và xử lý huyết tương:
- Sau khi cho chó uống thuốc, lấy 2- 3ml máu ở tĩnh mạch cẳng chân sau của chó, cho vào ống nghiệm có sẵn chất chống đông heparin ở các thời điểm 0 giờ, 0,5; 1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4; 5; 6; 7; 8; 10; 12; 24; 36 giờ.
- Li tâm mẫu máu ở tốc độ 5000 rpm, trong vòng 5 phút
- Thu huyết tương, bảo quản ở nhiệt độ - 300C trước khi đi phân tích HPLC.
2.3.5.2. Phương pháp xử lý mẫu huyết tương
Mẫu huyết tương để rã đông ở nhiệt độ phòng. Hút 0,2 mL huyết tương, thêm 20 µL dung dịch chuẩn nội Atorvastatin. Thêm 600 µL acetonitril, lắc xoáy 10 giây. Li tâm 10000 vòng/ phút trong 5 phút. Hút lớp dịch trong phía trên. Tiêm sắc ký.
2.3.5.3. Phương pháp phân tích FB trong huyết tương bằng kĩ thuật HPLC
Điều kiện phân tích: sử dụng cột sắc kí C18; 250 x 4,6 mm; 5 µm và bảo vệ cột C18, 4 x 3 mm. Nhiệt độ cột: 40°C. Tốc độ dòng: 1,25 mL/phút, thể tích tiêm: 50 µL, nhiệt độ autosampler: nhiệt độ phòng. Detector PDA bước sóng 288 nm
Pha động: MeOH : dung dịch H3PO4 0,05 M = 69 : 31
2.3.5.4. Phương pháp phân tích kết quả
Xác định nồng độ FB có trong các mẫu thử dựa vào tỷ lệ diện tích pic FB/IS thu được từ sắc đồ của mẫu thử và đường chuẩn phân tích trong cùng điều kiện (sử dụng hệ số weight là 1/x2).
30