c) Phương pháp 3.
7.2.4.3.Sản xuất vaccine nhược độc (attenuated vaccine).
Là loại vaccine chứa tác nhân gây bệnh còn sống, nhưng đã bị làm giảm độc lực, không còn đủ sức gây bệnh. Để sản xuất loại vaccine nhược độc người ta dùng phương pháp tiếp truyền nuôi cấy trong điều kiện bất lợi để giảm bới độc lực. Trong các vật chủ không thích hợp qua nhiều thế hệ (có thể hàng trăm thế hệ), làm cho vi sinh vật có những biến đổi về gen để thích nghi điều kiện mới. Những biến đổi đó dẫn đến việc mất đi hoàn toàn hay giảm đến mức không còn khả năng gây bệnh, nhưng vẫn còn khả năng kích thích miễn dịch vì chúng vẫn còn sống.
Một trong các loại vaccine nhược độc thì loại vaccine BCG (Bacillus-Calmette- Guérin) có ý nghĩa rất lớn. vaccine này được sản xuất từ một chủng vi sinh vật là
Mycrobacterium tuberculosis v. bovis đã được Calmette, một học trò của Paster và Guérin nuôi qua 230 lần cấy chuyền trên môi trường mật bò để làm mất hoạt tính. Để sản xuất loại vaccine này người ta dùng cả phương pháp bề mặt lẫn phương pháp chìm. Trong hầu hết các trường hợp nuôi cấy chìm hiên nay người ta dùng glycerin (2-10%)làm nguồn carbon, Tween 80 (0,1-2%), L-asparagine và dung dịch allbumin (5%) làm nguồn nitrogen và các muối dinh dưỡng thông thường khác. Sau đó điều chỉnh để đạt nồng độ tế bào 5x 10-7/ml và làm đông khô với một dung dịch chứa 2% Natri glutamte; 8% dextran; 7,5 saccharose và 0,1% hydroxylamine. Khi tiêm phòng sản phẩm sẽ được pha loãng ra.
Loại vaccine này thường có khả năng kích thích cho miễn dịch lâu bền (1-2 năm), hình thành đầy đủ các loại hình miễn dịch và tiện lợi khi sử dụng. Tuy nhiên,
vì là còn sống, nên chúng có khả năng lại độc (pathogenicity inversion), đặc biệt thường gây phản ứng vaccine với cơ thể yếu.