1. Các phương pháp chẩn đoán
- Dựa vào đặc trưng sinh học: triệu chứng và cây chỉ thị - Dựa vào đặc trưng hình thái
+ Kính hiển vi điện tử + Thể vùi
- Dựa vào huyết thanh học (mức protein) + Khuyếch tán trong gel
+ ELISA
- Dựa vào acid nucleic + PCR; RT - PCR + Lai phân tử + dsRNA
Nguyễn Minh Thắng – 13145174 – DH13BVA Page 46
2. Chẩn đoán huyết thanh học: ELISA – Enzyme-linked immunosorbent assay 2.1 Định nghĩa 2.1 Định nghĩa
- Là một kỹ thuật chẩn đoán huyết thanh học phổ biến nhất hiện nay - Gồm 2 nhóm : trực tiếp và gián tiếp (direct và indirect ELISA) - Gồm nhiều kiểu: 2 ví dụ đang sử dụng tại bộ môn Bệnh cây + DAS (double antibody sandwich = kẹp kép kháng thể) + PTA (plate-trapped antigen = bẫy kháng nguyên trước)
2.2 Vật liệu
- Bản ELISA: bằng nhựa (polystyrene), 96 giếng, liên kết không đặc hiệu các loại protein
- Các loại dung dich đệm: Đệm nghiền mẫu, đệm pha kháng thể, đệm rửa, đệm pha chất nền (cơ chất)
- Kháng thể các loại
- Chất nền: nhiều loại, tùy thuộc enzyme, phổ biến nhất là NPP (nytrophenyl phosphate)
- Enzyme: nhiều loại, cần cơ chất tương ứng, phổ biến nhất là alkaline phosphatase (cơ chất tương ứng là NPP)
- Máy đọc ELISA
- Dụng cụ nghiền, chiết mẫu cây: chày, cối sứ…
Máy đọc Elisa
3. Chẩn đoán bằng PCR
- PCR = polymerase chain reaction => DNA - RT-PCR = Reverse transcription – PCR => RNA
Nội dung được lấy từ Bài gi
Nguyễn Minh Thắng – 13145174
3.1 Các bước chẩn đoán PCR ho
- Thiết kế mồi (primer)
- Chiết acid nucleic tổng số (DNA ho (rẻ) hoặc KIT chiết thương mại (đ - Chạy PCR hoặc RT-PCR - Kiểm tra và đánh giá kết quả bằ
3.1.1 Thiết kế mồi chẩn đoán virus
- Mồi (primer): là một chuỗi nucleotide s - Hai loại mồi thường được sử dụ
+ Mồi chung (degenerate, universal primers) + Mồi đặc hiệu (specific primer)
3.1.2 Các bước chẩn đoán PCR1. Đệm PCR 1. Đệm PCR 2. dNTPs 3. Mồi xuôi dòng 4. Mồi ngược dòng 5. Taq polymerase 6. Khuôn DNA
Kiểm tra gel d
Kho (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bài giảng môn Bệnh cây Đại cương của TS. Võ Thị
13145174 – DH13BVA
n đoán PCR hoặc RT-PCR
(DNA hoặc RNA) từ mô cây; dùng các kỹ thuật chi i (đắt)
ằng điện di
n đoán virus
nucleotide sợi đơn, ngắn (~ 20 chữ) ụng
i chung (degenerate, universal primers)
n đoán PCR
PCR
Điện di sản phẩm PCR
ểm tra gel dưới ánh sáng UV
Khoảng 3 – 4 giờ
ị Thu Oanh
Page 47 t chiết thông thường
Nguyễn Minh Thắng – 13145174 – DH13BVA Page 48