3. Ý NGHĨA KHOA HỌC VÀ THỰC TIỄN CỦA ĐỀ TÀI
2.3.1.4.Phương pháp nghiên cứu đánh giá phẩm chất tinh dịch của
đực giống
Khảo sát phẩm chất tinh dịch củaba tổ hợp đực lai PD, PL và DL đối với lợn đực đạt 18 tháng tuổi. Thông qua các chỉ tiêu như: thể tích tinh dịch trong 1 lần xuất tinh (V), nồng độ tinh trùng (C), hoạt lực của tinh trùng (A), tỷ lệ kỳ hình (K),…
Phương pháp kiểm tra các chỉ tiêu đánh giá phẩm chất tinh dịch như sau:
- Thể tích tinh dịch (V, ml): Là lượng tinh dịch của lợn đực trong một lần xuất tinh sau khi đã lọc bỏ keo phèn. Thể tích tinh dịch được xác định bằng cốc đong, có phân định mức ml, trên miệng đặt 3 - 4 lớp vải gạc đã khử trùng để lọc chất keo nhầy trước khi tinh dịch chảy vào cốc trên mặt phẳng nằm ngang. Đọc kết quả ở mặt cong dưới.
- Hoạt lực của tinh trùng (A): Kiểm tra ngay sau khi tinh dịch vừa lấy ra khỏi cơ thể lợn đực giống trong vòng 5 - 10 phút,ở nhiệt độ 38 - 40oC trên kính hiển vi quang học (PZ0-WARSRAWA) có độ phóng đại 500 lần.
Dùng đũa thủy tinh sạch, lấy một giọt tinh nguyên để trên phiến kính sạch và ấm (30 - 35oC). Dùng một lá kính khô sạch, đậy lên giọt tinh dịch sao cho giọt tinh dịch được dàn đều ra 4 cạnh của lá kính, đặt tiêu bản lên kính hiển vi để đếm với độ phóng đại 500 lần. Trong khi kiểm tra, tiêu bản được sưởi ấm ở 38 - 40oC (dùng hòm sưởi ấm hoặc hệ thống sưởi ấn lắp trên mâm kính hiển vi). Tiến hành ước lượng tinh trùng tiến thằng có trong vi trường.
- Nồng độ tinh trùng (C): Được xác định bằng phương pháp trực tiếp đếm tinh trùng hiện diện đã pha loãng trong buồng đếm hồng bạch cầu. Sử dụng phương pháp trực tiếp bằng buồng đếm Newbouer. Cách tiến hành như sau:
Dùng lá kính khô sạch của buồng đếm lắp lên mặt buồng đếm.
Dùng ống hút bạch cầu (khô và sạch) hút tinh dịch đến vạch 0,5 sau đó hút tiếp tinh dịch NaCl 3% (để giết chết tinh trùng) đến vạch 11. Trong quá trình hút tinh dịch hoặc NaCl 3% cần chú ý sao cho không gây hiện tượng sủi bọt trong ống pha loãng bạch cầu (nếu có bọt, phải rửa sạch, sấy khô trước khi tiếp tục) đảo nhẹ 3 - 4 lần trong ống hút. Như vậy tinh dịch được pha loãng 20 lần. Sau đó bỏ vài giọt đi (khoảng 4 - 5 giọt) rồi nhỏ hỗn hợp này vào buồng đếm. Lưu ý: chỉ cần đặt miệng của ống hút bạch cầu vào mép của lam kính ở khu vực buồng đếm, hỗn hợp tinh dịch sẽ được hút vào đầy trong buồng đếm. Đặt buồng đếm lên kính hiển vi có độ phóng đại 125 lần. Đếm tinh trùng có trong 80 ô bé nhất hay 5 ô (4 ô ở 4 góc và 1 ô ở giữa). Mỗi ô bé có diện tích 1/400 mm2 và sâu 1/10 mm.
Nguyên tắc đếm: Đếm tinh trùng theo đầu. Đếm tinh trùng lần lượt theo hàng, hết hàng nọ đến hàng kia theo hình chữ chi. Không đếm lặp lại và không bỏ sót. Những tinh trùng nằm trên cạnh ô nhỡ chỉ đếm hai cạnh (thường là cạnh trên và cạnh phải). Chỉ đếm số tinh trùng có trong 80 ô con.
Kết quả được tính theo công thức: C = n.106 Trong đó: C: là nồng độ tinh trùng (106/ml)
n: là số lượng tinh trùng đếm được
106: là chỉ số quy đổi C về 1ml tinh nguyên
Như vậy, 1 tinh trùng đếm được đại diện cho 1 triệu tinh trùng có trong 1 ml tinh nguyên.
- Chỉ tiêu tổng hợp (V.A.C): Cách xác định tổng số tinh trùng tiến thẳng trong một lần xuất tinh (V.A.C), nó được tính bằng tích của ba chỉ tiêu: thể tích
(V), sức hoạt động của tinh trùng (A) và nồng độ (C), là chỉ tiêu đánh giá tổng hợp nhất để đánh giá phẩm chất của tinh dịch.
- Tỷ lệ tinh trùng kỳ hình (K, %): Tinh trùng kỳ hình là tinh trùng có hình dạng khác thường so với tinh trùng bình thường. Cách xác định tỷ lệ kỳ hình như sau:
Nhỏ 1 giọt tinh nguyên lên phiến kính khô sạch đã tẩy mỡ. Nếu tinh dịch đặc,có thể pha loãng bằng vài ba giọt dung dịch nước sinh lý 0,85 %, dùng đầu đũa thủy tinh sạch trộn đều hỗn hợp này. Dùng cạnh của phiến kính khác (hoặc lam kính) phiết nhẹ giọt tinh dịch để dàn mỏng ra trên phiến kính (đẩy nhẹ 1 lần đều tay, không chà xátđẩy tới kéo lui nhiều lượt).
Để cho lớp tinh dịch tự khô trong không khí, sau khi tinh dịch đã khô, hơ qua ngọn lửa đèn cồn. Sau đó dùng thuốc nhuộm bằng xanh metylen để nhỏ đều lên mặt lớp tinh dịch đã khô, đợi cho thuốc nhuộm ngấm (mùa hè 5 - 7 phút, mùa đông 10 - 15 phút). Dùng nước cất rửa sạch tiêu bản, để tiêu bản tự khô hoặc hơ lên ngọn lửa đèn cồn, rồi đưa lên kính hiển vi quan sát với độ phóng đại 500 lần. Lần lượt quan sát đều khắp tiêu bản, đếm tổng số số tinh trùng kỳ hình và không kỳ hình, rồi xác định số tinh trùng kỳ hình và tính theo công thức: 100 2 1 n n K Trong đó: K (%): Là tỷ lệ tinh trùng kỳ hình n1: Số tinh trùng kỳ hình đếm được n2: Số tinh trùng bình thường đếm được