Hợp chất UFE5B được tách ra dưới dạng bột khơng màu. Cơng thức phân tử C28H40O12 được xác định bằng phổ HR-ESI-MS (Hình 4.83) tại m/z 591,2437 [M+Na]+ (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C28H40O12Na là 591,2417). Phổ IR (Hình 4.84) chỉ ra các dải hấp thụ tại νmax 3356 (OH), 2947 (CH), 1659, 1435 (vịng thơm) và 1033 cm-1. Phổ UV (MeOH) (Hình 4.85) cho đỉnh hấp thụ tại max 207 nm, gợi ý sự cĩ mặt của nhân thơm trong phân tử.
Phổ 1H-NMR (Hình 4.86) của hợp chất UFE5B chỉ ra tín hiệu đặc trưng của 4 proton thơm tại δH 6,32 (2H, s, H-2′/H-6′), 6,30 (2H, s, H-2/H-6), 4 nhĩm methoxy tại δH 3,77 (6H, s), 3,76 (6H, s), 1 proton anomer tại δH 4,69 (1H, d, J = 1,0 Hz, H-1″) và 1 nhĩm methyl tại δH 1,28 (3H, d, J = 6,0 Hz, H-6″). Phổ 13C- NMR (Hình 4.89) và DEPT (Hình 4.90) chỉ ra tín hiệu của 28 carbon gồm 4 nhĩm methoxy [δC 56,6 (x2), 56,7 (x2)], 2 nhĩm methylene (δC 36,5, 36,8), 2 nhĩm oxymethylene (δC 62,9, 69,5), 4 nhĩm methine thơm [δC 107,1 (x2), 107,2 (x2)], 2 nhĩm methine no (δC 40,9, 44,2), 8 carbon bậc bốn [δC 132,8, 133,0, 134,4, 134,5, 149,0 (x4)] và 6 carbon của phần đường.
Tín hiệu carbon của phần đường tại δC 102,3 (C-1″), 72,4 (C-2″), 72,6 (C- 3″), 73,9 (C-4″), 70,2 (C-5″) và 18,0 (C-6″) cùng với các hằng số tương tác của proton (J1″,2″ = 1,5 Hz, J2″,3″ = 3,5 Hz, J3″,4″ = 10,0 Hz, J4″,5″ = 9,0 Hz) cho biết sự cĩ mặt của một đơn vị α-L-rhamnopyranosyl trong phân tử. Việc xác định đường tiếp tục được thực hiện bằng cách thủy phân hợp chất UFE5B trong dung dịch HCl 10% để đạt đến L-rhamnose sau đĩ kiểm tra TLC với mẫu chuẩn [Rf = 0,75
123
(CHCl3−MeOH−H2O, 3:1:0,1, v/v/v)]. Nhìn chung, các dữ kiện phổ 1D-NMR gợi ý hợp chất UFE5B là một lignan glycoside.
Hình 4.83. Phổ HR-ESI-MS của hợp chất UFE5B
Hình 4.84. Phổ IR của hợp chất UFE5B
124
Hình 4.86. Phổ 1H-NMR của hợp chất UFE5B
125
Hình 4.88. Phổ 1H-NMR giãn (b) của hợp chất UFE5B
126
Hình 4.90. Phổ DEPT của hợp chất UFE5B
Tương tác COSY giữa H-7 (δH 2,60 và 2,66)/H-8 (δH 2,11)/H-9 (δH 3,39 và 3,84), giữa H-7′ (δH 2,54 và 2,75)/H-8′ (δH 1,95)/H-9′ (δH 3,52 và 3,77), giữa H-8 (δH 2,11)/H-8′ (δH 1,95) cho phép thiết lập trật tự liên kết C-7/C-8/C-9, C- 7′/C-8′/C-9′, C-8/C-8′. Cấu trúc này của UFE5B được khẳng định lại bằng các
tương tác HMBC giữa H-7 (δH 2,60 và 2,66)/H-7′ (δH 2,54 và 2,75)/H-9 (δH 3,39 và 3,84)/H-9′ (δH 3,52 và 3,77) và C-8 (δC 40,9)/C-8′ (δC 44,2), giữa H-7 (δH 2,60 và 2,66) và C-9 (δC 69,5), giữa H-7′ (δH 2,54 và 2,75) và C-9′ (δC 62,9).
Tương tác HMBC giữa H-2/H-6 (δH 6,30) và C-7 (δC 36,8), giữa H-2′/H-6′ (δH 6,32) và C-7′ (δC 36,5), giữa H-8 (δH 2,11) và C-1 (δC 132,8), giữa H-8′ (δH
1,95) và C-1′ (δC 133,0) chứng tỏ hai nhân thơm thế 1,3,4,5 lần lượt gắn với C-7, C-7′. Tương tác HMBC giữa 3-OMe (δH 3,76) và C-3 (δC 149,0), giữa 5-OMe (δH 3,76) và C-5 (δC 149,0), giữa 3′-OMe (δH 3,77) và C-3′ (δC 149,0), giữa 5′- OMe (δH 3,77) và C-5′ (δC 149,0) đề nghị các nhĩm methoxy tại C-3, C-5, C-3′ và C-5′. Phân tích chi tiết các dữ kiện phổ 2D-NMR cho phép thiết lập cấu trúc của aglycone là 8,8-bisdihydrosiringenin [39]. Hơn nữa, các tương tác HMBC giữa H-1″ (δH 4,69) và C-9 (δC 69,5), giữa H-9 (δH 3,39 và 3,84) và C-1″ (δC
102,3) xác nhận hợp phần α-L-rhamnopyranosyl liên kết với aglycone tại C-9 (Hình 4.98).
127
Hình 4.91. Phổ HSQC của hợp chất UFE5B
128
Hình 4.93. Phổ HMBC của hợp chất UFE5B
129
Hình 4.95. Phổ HMBC giãn (b) của hợp chất UFE5B
130
Bảng 4.30. Số liệu phổ NMR của hợp chất UFE5B và hợp chất tham khảo
C δC#, a δCa,b DEPT δHa,c (J, Hz) HMBC (H→C)
1 132,3 132,8 C − − 2 106,6 107,1 CH 6,30 s 3, 4, 6, 7 3 148,2 149,0 C − − 4 132,5 134,4 C − − 5 148,2 149,0 C − − 6 106,6 107,1 CH 6,30 s 2, 4, 5, 7 7 35,6 36,8 CH2 2,60 dd (13,5, 8,5) 2,66 dd (13,5, 6,5) 1, 2, 6, 8, 9 1, 2, 6, 8, 9, 8′ 8 40,7 40,9 CH 2,11 m 1, 7, 9, 7′, 8′, 9′ 9 70,1 69,5 CH2 3,39 dd (10,0, 6,5) 3,84 dd (10,0, 6,0) 7, 8, 8′, 1′′ 7, 8, 8′ 1′ 132,3 133,0 C − − 2′ 106,7 107,2 CH 6,32 s 3′, 4′, 6′, 7′ 3′ 148,2 149,0 C − − 4′ 132,5 134,5 C − − 5′ 148,2 149,0 C − − 6′ 106,7 107,2 CH 6,32 s 2′, 4′, 5′, 7′ 7′ 35,4 36,5 CH2 2,54 dd (13,5, 9,0) 2,75 dd (13,5, 6,0) 1′, 2′, 6′, 8′, 9′ 1′, 2′, 6′, 8′, 9′, 8 8′ 43,3 44,2 CH 1,95 m 7, 8, 9, 7′, 9′ 9′ 62,0 62,9 CH2 3,52 dd (11,0, 7,5) 3,77* 8, 7′, 8′ 1″ 104,5 102,3 CH 4,69 br.s 9, 2′′, 3′′, 5′′ 2″ 74,3 72,4 CH 3,86 dd (3,5, 1,5) 3′′, 4′′ 3″ 77,3 72,6 CH 3,72 dd (10,0, 3,5) 2′′, 4′′ 4″ 70,6 73,9 CH 3,41 dd (10,0, 9,0) 3′′, 5′′, 6′′ 5″ 66,2 70,2 CH 3,67 m 3′′, 4′′ 6″ 18,0 CH3 1,28 d (6,0) 4′′, 5′′ OMe 55,8 (x2) 55,9 (x2) 56,6 (x 2) 56,7 (x 2) CH3 CH3 3,76 s 3,77 s 3/5 3′/5′
#C của ssioriside [181], ađo trong CD3OD, b125 MHz, c500 MHz, *tín hiệu chập.
131
Hình 4.98. Tương tác HMBC và COSY chính của hợp chất UFE5B
Các dữ liệu phổ cho thấy hợp chất UFE5B cĩ cấu trúc tương tự với
ssioriside [(8S,8′S)-4,4′-dihydroxy-3,5,3′,5′-tetramethoxy-8,8′-butyrolignan 9-O-β- D-xylopyranoside] [181] nhưng cĩ sự khác biệt rõ ràng ở phần đường. Mặc dù dữ kiện phổ NMR và các hằng số vật lý của phần aglycone [8,8- bisdihydrosiringenin] với các dạng cấu hình khác nhau [(8R,8R) [187], (8S,8S) [39]] đã được cơng bố nhưng do lượng mẫu UFE5B thu được ít nên khơng thể đạt đến phần aglycone từ dịch thủy phân của hợp chất này. Mặt khác, những cố gắng so sánh dữ kiện phổ 13C-NMR của hợp chất UFE5B với các hợp chất tương tự
(hợp chất 1 và 3 [40], hợp chất 7 và 8 [148], hợp chất 9 [181]) đều khơng khả quan vì sự chênh lệch độ dịch chuyển hĩa học (δC) giữa các dạng cấu hình khác nhau là tương đối nhỏ. Do vậy, hĩa lập thể của hợp chất này chưa giải quyết được. Với tất cả dữ kiện phổ đã cĩ, hợp chất UFE5B được xác định là 4,4′-dihydroxy-3,5,3′,5′- tetramethoxy-8,8′-butyrolignan 9-O-α-L-rhamnopyranoside. Đây là một hợp chất mới, được đặt tên là ufaside.