Hợp chất UGLW1 được tách ra dưới dạng dầu khơng màu, 2 0
[]D -35,0 (c
0,6, MeOH). Phổ ESI-MS cho píc ion giả phân tử tại m/z 263,4 [M+H]+ và píc cơ sở tại m/z 297,3 [M-H+2H2O]-. Cùng với phổ 13C-NMR và DEPT, CTPT của hợp chất UGLW1 được đề nghị là C12H22O6 (M = 262).
Phổ 1H-NMR của hợp chất UGLW1 chỉ ra các tín hiệu đặc trưng sau: 2
proton olefin tại δH 5,41 và 5,47, 1 proton anomer tại δH 4,29 (d, J = 7,5 Hz), 2 nhĩm methylene tại δH 2,10 và 2,40, 1 nhĩm methyl tại δH 0,99 (t, J = 7,5). Hằng số tương tác của proton anomer (J = 7,5 Hz) gợi ý sự hiện diện của đường β trong phân tử. Phổ 13C-NMR và DEPT chỉ ra tín hiệu của 12 carbon gồm 6
82
carbon của 1 đơn vị hexose (δC 62,7, 77,9, 71,6, 78,1, 75,1 và 104,3) và 6 carbon của phần aglycone [2 carbon olefin (δC 125,8, 134,5), 3 carbon của 3 nhĩm methylene (δC 21,5, 28,8 và 70,4) và 1 carbon của nhĩm methyl (δC 14,6)]. Phân tích chi tiết hằng số tương tác và các dữ kiện phổ HSQC, HMBC, COSY đồng thời so sánh với tài liệu tham khảo [141] cho phép đề nghị phần hexose của hợp chất UGLW1 là β-glucopyranose.
Các tương tác COSY khác giữa H-1 (δH 3,56 và 3,90)/H-2 (δH 2,46)/H-3 (δH 5,41)/H-4 (δH 5,47)/H-5 (δH 2,10)/H-6 (δH 0,99) cho phép thiết lập trật tự liên kết C-1/C-2/C-3/C-4/C-5/C-6. Các tương tác HMBC giữa H-3 (δH 5,41) và C-1 (δC 70,4)/C-2 (δC 28,8)/C-5 (δC 21,5), giữa H-4 (δH 5,47) và C-2 (δC 28,8)/C-5 (δC 21,5)/C-6 (δC 14,6) cho biết nối đơi tại C-3/C-4. Tương tác HMBC giữa H-1′ (δH 4,29)/C-1 (δC 70,4) đề nghị phần đường tại C-1 (Hình 4.33).
Hình 4.32. Cấu trúc hĩa học của hợp chất UGLW1
Hình 4.33. Tương tác HMBC và COSY chính của hợp chất UGLW1 Bảng 4.15. Số liệu phổ NMR của hợp chất UGLW1 và hợp chất tham khảo
C δC#, a δCa, b DEPT δHa, c (J, Hz) HMBC (H→C) 1 70,6 70,4 CH2 3,56 td (9,5, 7,5) 2, 3, 1′ 3,90* 2, 3, 1′ 2 28,7 28,8 CH2 2,40 dt (7,5, 7,5) 1, 3, 4 3 125,7 125,8 CH 5,41 m 1, 2, 5 4 134,6 134,5 CH 5,47 m 2, 5, 6 5 21,5 21,5 CH2 2,10 dq (7,5, 7,5) 3, 4, 6 6 14,6 14,6 CH3 0,99 t (7,5) 4, 5 1′ 104,2 104,3 CH 4,29 d (7,5) 1 2′ 75,0 75,1 CH 3,19 dd (8,0, 7,5) − 3′ 78,0 78,1 CH 3,38 t (8,0) − 4′ 71,6 71,6 CH 3,32* − 5′ 77,8 77,9 CH 3,30* − 6′ 62,6 62,7 CH2 3,69 dd (12,0, 5,5) − 3,87* − #
C của (Z)-3-hexenyl-1-O-β-D-glucopyranoside [165], ađo trong CD3OD, b125 MHz, c500 MHz, *
83
Kết hợp các dữ kiện phổ cùng với việc so sánh với số liệu phổ của hợp chất tham khảo [165], hợp chất UGLW1 được xác định là (Z)-3-hexenyl-1-O-β- D-glucopyranoside. Hợp chất này được lần đầu tiên từ chi Uvaria.
4.2.1.10. Hợp chất UGLW3 (chất mới): Grandionoside A
Hình 4.34. Cấu trúc hĩa học của hợp chất UGLW3 và hợp chất tham khảo
Hợp chất UGLW3 được tách ra dưới dạng chất bột màu trắng, 20
[ ] D -20,8 (c 0,1, MeOH). Trên phổ HR-ESI-MS (Hình 4.35), píc ion giả phân tử được ghi nhận tại m/z 411,1989 [M+Na]+ (tính tốn lý thuyết cho cơng thức C19H32O8Na là 411,1995). Do vậy, cơng thức phân tử của hợp chất UGLW3 được xác định là C19H32O8.
Phổ 1H-NMR (Hình 4.36) của UGLW3 chỉ ra các tín hiệu đặc trưng sau: 4 nhĩm methyl tại δH 0,83 (3H, s), 1,13 (3H, s), 2,29 (3H, s) và 0,99 (3H, d, J = 6,5 Hz); 1 proton anomer tại δH 4,39 (1H, d, J = 8,0 Hz); 2 proton trans-olefin tại
δH 6,07 (1H, d, J = 16,0 Hz) và 6,71 (1H, dd, J = 16,0, 10,0 Hz). Phổ 13C-NMR (Hình 4.39) và DEPT (Hình 4.40) chỉ ra tín hiệu của 19 carbon trong đĩ 13 carbon được gán cho aglycone và 6 carbon được gán cho hexose. Phần aglycone của hợp chất UGLW3 gồm 4 nhĩm methyl (δC 17,1, 24,0, 26,9 và 32,2), 1 nhĩm methylene (δC 45,2), 2 nhĩm methine (δC 32,5 và 58,4), 2 nhĩm oxymethine (δC
70,1 và 88,1), 1 nối đơi (δC 134,3 và 151,1), 1 carbon bậc bốn (δC 34,3) và 1 nhĩm carbonyl (δC 201,0). Các tín hiệu carbon khác tại δC 105,8, 75,3, 78,0, 71,3, 77,7 và 62,4 đề nghị sự cĩ mặt của 1 đơn vị β-D-glucopyranosyl [141]. Việc xác định đường tiếp tục được thực hiện như sau: Hợp chất UGLW3 (1,0
mg) được hịa tan bằng hỗn hợp H2SO4 5%/1,4-dioxane (1:1, v/v, 1,0 mL). Dung dịch được đun nĩng ở 90 oC trong 3 giờ. Sau khi chiết với EtOAc, lớp nước được trung hịa bằng Amberlite IRA-400 và được cơ đặc dưới áp suất thấp. Phần cắn được hịa tan trong pyridine (0,1 mL) bổ sung L-cysteine methyl ester
84
hydrochloride (0,5 mg) rồi đun nĩng ở 60 oC trong 1 giờ. Thêm dung dịch của o- tolylisothiocyanate (0,5 mg) trong pyridine (0,1 mL) vào dung dịch trên và tiếp tục đun nĩng ở 60 oC trong 1 giờ. Hỗn hợp phản ứng được phân tích bằng HPLC [cột: COSMOSIL 5C18-AR-II (Nacalai Teque), 250×4,6 mm; pha động: MeCN−H2O trong 0,1% TFA (80:20, v/v); detector: UV 250 nm; tốc độ dịng: 0,8 mL/phút; nhiệt độ cột: 35 oC] [159]. Tiến hành phân tích tương tự cho các mẫu D-glucose và L-glucose chuẩn. Bằng cách so sánh thời gian lưu của dẫn xuất tolylthiocarbamoyl thiazolidine của mẫu phân tích (tR = 32,8 phút) với mẫu chuẩn [tR = 32,8 phút (D-glucose), 29,5 phút (L-glucose)], phần đường của hợp chất UGLW3 được xác định là D-glucose (Hình 4.49). Nhìn chung, các dữ kiện phổ 1D-NMR đề nghị hợp chất UGLW3 là một megastigmane glucopyranoside.
Tương tác COSY giữa H-2 (δH 1,54 và 1,79)/H-3 (δH 4,23)/H-4 (δH
3,25)/H-5 (δH 2,13)/H-6 (δH 1,79)/H-7 (δH 6,71)/H-8 (δH 6,07) cho phép thiết lập trật tự liên kết C-2/C-3/C-4/C-5/C-6/C-7/C-8. Các tương tác HMBC giữa H-7 (δH 6,71)/H-8 (δH 6,07)/H-10 (δH 2,29) và C-9 (δC 201,0), giữa H-6 (δH 1,79)/C-8 (δC 134,3) và tương tác COSY giữa H-6 (δH 1,79)/H-7 (δH 6,71) xác nhận nhánh but-3-one-1-enyl tại C-6. Tương tác HMBC giữa H-11 (δH 1,13)/H-12 (δH 0,83) và C-1 (δC 34,3)/C-2 (δC 45,2)/C-6 (δC 58,4) chứng tỏ 2 nhĩm methyl (C-11, C- 12) định vị tại C-1. Tương tác HMBC giữa H-13 (δH 0,99) và C-4 (δC 88,1)/C-5 (δC 32,5)/C-6 (δC 58,4) và tương tác COSY giữa H-13 (δH 0,99)/H-5 (δH 2,13) chứng tỏ nhĩm methyl cịn lại (C-13) định vị tại C-5. Đặc biệt, tương tác HMBC giữa H-1′ (δH 4,39)/C-4 (δC 88,1) đề nghị phần β-D-glucopyranosyl tại C-4 của aglycone (Hình 4.50).
85
Hình 4.36. Phổ 1H-NMR của hợp chất UGLW3
86
Hình 4.38. Phổ 1H-NMR giãn (b) của hợp chất UGLW3
87
Hình 4.40. Phổ DEPT của hợp chất UGLW3
88
Hình 4.42. Phổ HSQC giãn (a) của hợp chất UGLW3
89
Hình 4.44. Phổ HMBC của hợp chất UGLW3
90
Hình 4.46. Phổ COSY của hợp chất UGLW3
91
Hình 4.48. Phổ NOESY giãn của hợp chất UGLW3
Hình 4.49. Sắc ký đồ HPLC của các dẫn xuất tolylthiocarbamoyl thiazolidine của D-glucose, L-glucose và phần đường trong hợp chất UGLW3
Hĩa lập thể của hợp chất UGLW3 được xác định dựa vào việc phân tích
phổ NOESY và hằng số tương tác J. Các dữ kiện phổ 1H-NMR và NOESY (Hình 4.47) xác nhận hợp chất này tồn tại ở cấu dạng ghế (Hình 4.50). Giá trị hằng số tương tác nhỏ giữa H-2 (δH 1,54 và 1,79) và H-3 (δH 4,23) (J2a,3 = 3,5 Hz, J2e,3 = 3,0 Hz), giữa H-3 (δH 4,23) và H-4 (δH 3,25) (J3,4 = 3,5 Hz) và sự vắng mặt tương tác NOESY giữa H-3 (δH 4,23) và H-11 (δH 1,13)/H-12 (δH 0,83) chứng tỏ H-3
92
định hướng equatorial. Trên phổ NOESY, H-5 (δH 2,13) cĩ tương tác mạnh với H- 11 (δH 1,13) nhưng khơng tương tác với H-12 (δH 0,83) chứng tỏ H-5 và C-11 định hướng axial. Tương tác NOESY mạnh giữa H-7 (δH 6,71) và H-11 (δH 1,13) khẳng định C-7 định hướng equatorial. Đặc biệt, các tương tác NOESY giữa H-4 (δH
3,25) với H-3e (δH 4,23), H-6a (δH 1,79), H-13 (δH 0,99) và các hằng số tương tác (J3e,4 = 3,5 Hz, J4,5a = 11,0 Hz) xác nhận định hướng axial của H-4.
Bảng 4.16. Số liệu phổ NMR của hợp chất UGLW3 và hợp chất tham khảo
C δC#, a δCa, b DEPT δHa, c (J, Hz) HMBC (HC) 1 34,5 34,3 C 2 41,8 45,2 CH2 1,54 dd (15,0, 3,5) (H-2a) 1, 4, 11 1,79* (H-2e) 1, 3, 4, 6, 11, 12 3 68,5 70,1 CH 4,23 ddd (3,5, 3,5, 3,0) 1, 5 4 80,7 88,1 CH 3,25 dd (11,0, 3,5) 5, 13, 1′ 5 30,7 32,5 CH 2,13 m 4 6 52,6 58,4 CH 1,79* 1, 2, 5, 7, 8, 11, 12 7 152,8 151,1 CH 6,71 dd (16,0, 10,0) 5, 6, 9 8 134,2 134,3 CH 6,07 d (16,0) 6, 9, 10 9 201,1 201,0 C 10 26,8 26,9 CH3 2,29 s 7, 8, 9 11 24,0 24,0 CH3 1,13 s (H-11a) 1, 2, 6, 12 12 32,3 32,2 CH3 0,83 s (H-12e) 1, 2, 6, 11 13 17,5 17,1 CH3 0,99 d (6,5) 4, 5, 6 1′ 102,8 105,8 CH 4,39 d (8,0) 4 2′ 75,0 75,3 CH 3,29* 3′ 78,3 78,0 CH 3,38* 4′ 71,9 71,3 CH 3,38* 5′ 78,0 77,7 CH 3,29* 6′ 63,0 62,4 CH2 3,71 dd (12,0, 5,0) 3,84 dd (12,0, 2,5)
#C của lasianthionoside C [155], ađo trong CD3OD, b125 MHz, c500 MHz, *tín hiệu chập.
93
Các dữ kiện phổ (NMR, MS) của hợp chất UGLW3 nhìn chung tương tự phổ đã cơng bố của hợp chất lasianthionoside C [(3S,4S,5S,6S,7E)-3,4- dihydroxymegastigman-7-en-9-one-4-O-β-D-glucopyranoside] [155]. Tuy nhiên, cấu hình tuyệt đối của C-4 được xác định là R do độ dịch chuyển hĩa học của C- 4 (δC 88,1) và hằng số tương tác của H-4 (J = 3,5, 11,0 Hz) của hợp chất
UGLW3 khác biệt rõ rệt so với các giá trị tương ứng của hợp chất
lasianthionoside C [C-4 (C 80,7), H-4 (br.s)]. Ngồi ra, sự thay đổi mạnh độ dịch chuyển hĩa học của C-6 (δC 58,4), C-1 (δC 105,8) của hợp chất UGLW3 so với các giá trị tương ứng của lasianthionoside C [C-6 (δC 52,6), C-1 (δC 102,8)] cũng gĩp phần giải thích sự khác biệt cấu hình tại C-4. Do vậy, hợp chất
UGLW3 được kết luận là (3S,4R,5S,6S,7E)-3,4-dihydroxymegastigman-7-en-9- one-4-O-β-D-glucopyranoside. Đây là một hợp chất mới và được đặt tên là grandionoside A.
4.2.2. Các hợp chất được phân lập từ lồi Bù dẻ lá lớn 4.2.2.1. Hợp chất UCC5 (chất mới): Cordauvarin A