* Dụng cụ, thiết bị và hóa chất
Thiết bị chính
Các thiết bị chính phục vụ cho thực nghiệm đánh giá khả năng khử khuẩn
E.coli của các vật liệu bao gồm: nồi hấp tiệt trùng, nồi cách thuỷ, tủ cấy nuôi ủ vi
sinh 50oC, tủ sấy, cân điện tử, máy lắc (vortex).
Dụng cụ
Các dụng cụ sử dụng cho thực nghiệm bao gồm: đĩa peptri, ống nghiệm, pipet, bình tam giác, các loại que cấy, que trang, đèn cồn, bông thấm, không thấm,…
Môi trường
Môi trường nuôi cấy khuẩn E.coli được sử dụng cho thực nghiệm là
72
Vật liệu và sinh phẩm
- Vật liệu thử nghiệm: Các loại Ag/zeolit, Ag/zeolit/MQTB, Ag/Than hoạt tính, Ag/Sứ xốp.
- Chủng khuẩn E.coli ATTC 25922.
* Bố trí thí nghiệm
- Pha chế môi trường
Môi trường sử dụng cho mục đính nghiên cứu là môi trường đông khô chromocult được nhập khẩu trực tiếp từ hãng Merck. Cách pha chế như sau: Cân một lượng chính xác môi trường trên và cho vào bình tam giác vô trùng, bổ sung nước cất vô trùng. Đun tan bằng nồi cách thuỷ ở 100 – 110oC. Duy trì ở nhiệt độ 45oC trước khi đưa vào quá trình phân tích.
- Thu sinh khối E.coli phục vụ cho thí nghiệm
Chủng gốc E.coli ATCC 25922 ở dạng đông khô được hoà tan vào dung
dịch tăng sinh kèm theo. Dùng que trang cấy ria chủng gốc E.coli thành 5 đường lên môi trường Chromocult. Sau 24 giờ nuôi cấy ở 37oC dùng que trang gạt sinh khối trên bề mặt môi trường cho vào bình tam giác đựng sẵn 100 ml nước cất vô trùng. Lượng sinh khối thu được khoảng 106 - 108 cfu/ml.
- Các bước tiến hành thí nghiệm
Cân 0,1 gam vật liệu cho vào ống nghiệm vô trùng có sẵn 10ml nước cất vô trùng. Dùng máy lắc, lắc đều trong 30 giây. Dùng micropipet hút 1ml dịch cho vào 49ml nước cất vô trùng, lắc đều. Dùng micropipet hút 1ml dịch trên cho vào ống nghiệm vô trùng. Bổ sung 0,1 ml dịch canh trường E.coli (ATCC 25922) vào để trong 10 phút. Sau 10 phút bổ sung tiếp vào hỗn hợp trên 5 ml nước muối để trung hoà. Phân tích lượng vi sinh vật còn lại. Thí nghiệm trên mỗi vật liệu được tiến hành 3 lần cùng lúc, kết quả thu được là giá trị trung bình của các số liệu thu được có độ sai khác dưới 5%.