2.4.2.2.I. Thực hiện thỉ nghiệm theo SG K
* Chuẩn bi thí nghiêm ( mỗi nhóm 7-10 HS)
+ Lưới lọc: 1 cái * Tiến hành thí nghiêm:
- Bước 1: Nghiền mẫu vật
+ X ử lí gan ban đ ầu: Dùng dao cắt bở lớp màng bao bọc gan, thái gan thành những miếng nhở
- M au vật: dứa tươi: 1 quả (khoảng 300g)
không quá xanh, không quá chín, gan gà tươi: 1 bộ (gan lợn: lOOg)
- Dụng cụ và hóa chất: + Ống nghiệm: 1 ống + Pipet: 1 cái
+ Cốc thủy tinh 250 ml: 1 cái + Chày, cối sứ: 1 cái
+ Dao, thớt: 1 cái
4- Ông đong: 1 cái
+ Que tre (0,5x20cm): 1 cái + c ồ n 70-90°: 50 ml
+ Nước cất: 500 ml + Nước rửa bát: 10 ml
Khoá luận tốt nghiệp Trường Đ H SP Hà N ội 2
+ Nghiền ga n ’. Cho gan vào cối nghiền mạnh hoặc máy xay sinh tố, cho 1 lượng nước gấp đôi lượng nước gan rồi khuấy đều để tách rời và phá vỡ các tế bào gan.
+ Lọc dịch nghiền: Lọc qua giấy lọc hoặc vải màn hoặc lưới lọc đế loại bỏ phần sơ lấy dịch lọc.
- Bước 2: Tách Ả D N ra khỏi tế bào và nhân tế bào
+ Cho dịch lọc gan vào ong nghiêm: Lấy lượng dịch lọc cho vào ống nghiệm khoảng 1/2 thế tích ống nghiệm.
+ Cho nước rửa bát vào ống nghiệm: Cho tiếp vào ống nghiệm lượng nước rửa bát bằng 1/6 khối lượng dịch nghiền tế bào, dùng que thủy tinh khuấy nhẹ, để yên 15 phút để phá vỡ màng tế bào, màng nhân.
+ Chuân bị nước cốt dứa: Dứa được gọt vỏ, thái nhỏ, nghiền nát bằng chày cối sứ hoặc máy xay sinh tố, sau đó lọc bằng giấy lọc hoặc lưới lọc thu được dịch dứa.
+ Cho nước cốt dứa vào ổng nghiệm: Cho vào ống nghiệm lượng cốt dứa bằng khoảng 1/6 hồn họp dịch nghiền tế bào + nước rửa bát, khuấy nhẹ , đế ống nghiệm trên giá từ 5-10 phút để tách ADN và protein.
Khoá luận tốt nghiệp Trường ĐH SP Hà N ội 2
- Bước 3: Kết tủa AND trong dịch tế bào bằng cồn
+ Cho cồn vào ổng nghiêm: Nghiêng ống nghiệm và rót cồn 70-90° dọc theo thành ống nghiệm một cách cấn thận sao cho cồn tạo thành một lớp nối trên bề mặt hỗn hợp với một lượng bằng dịch nghiền có trong ống nghiệm, rồi đế ống nghiệm trên giá khoảng
10 phút.
+ Quan sát trong lớp cồn chúng ta thấy các phân tử ADN kết tủa lơ lửng trong đó dưới dạng các sợi trắng đục.
- Bước 4: Tách A D N ra khỏi lớp cồn
Dùng que tre đưa vào trong lớp cồn, khuấy nhẹ cho các phân tử ADN bám vào que tre rồi vớt ra và quan sát.
* Ket quá và nhân xét
- M ột khối trắng đục xuất hiện trong đó có cả dạng sợi, đây là khối có nhiều thành phần ttrong đó có cả AND.
- Với mẫu vật là gan gà thí nghiệm thường khó cho kết quả hơn nhưng lại dễ dàng trong thao tác nghiền.
Kho ủ luận tốt nghiệp Trường Đ H SP Hà N ội 2
- Thời gian tiến hành thí nghiệm khoảng 35-40 phút.
* Các khó khăn găp phải khi thưc hiên thí nghiêm :
- M ột số dụng cụ không cần thiết cho thí nghiệm: pipet, ống đong. - M ột số dụng cụ khác cần trong thí nghiệm nhưng không có trong phần chuẩn bị: giá để ống nghiệm, que thủy tinh.
- Khi rót các chất vào ống nghiệm chỉ nhìn đế định lượng nên độ chính xác không cao, dẫn đến rót quá nhiều hoặc quá ít.
* Đe xuất cách khắc phuc khỏ khăn của thí nghiêm:
- Phương án 1: Bố sung thêm và loại bở một số dụng cụ - Phương án 2: Định lượng các chất rót vào ống nghiệm
2.4.2.2.2. Thực hiện các thí nghiêm theo đề xuất
* Phương án 1:
- Bố sung thêm hai dụng cụ là: ống nghiệm, que thủy tinh. Bỏ hai dụng cụ: pipet, ống đong.
- Các phần khác thực hiện như SGK. * Phương án 2 :
- Bố sung thêm dụng cụ: Ống nghiệm (4 ống như nhau), thước chia vạch (1 cái), bút lông đánh dấu trên ống nghiệm (1 cái).Sử dụng các dụng cụ này để chia vạch 3 ống nghiệm trước khi định lượng từng chất để rót vào 1 ống nghiệm .
- Thí nghiệm tiến hành 1 lần lại như SGK.
- K et quả và nhận xét: Các phần dịch cho thêm vào đã được định lượng cụ thế trong các ống nghiệm nên thao tác và kết quả thí nghiệm sẽ chính xác hơn.