Phổ huỳnh quang là hàm phõn bố năng lượng bức xạ của chất huỳnh quang theo tần số hay bước súng. Phổ huỳnh quang phụ thuộc vào thành phần và cấu trỳc của cỏc tõm bức xạ và cỏc tỏc nhõn bờn ngoài.
Nếu cường độ ỏnh sỏng kớch thớch Iex được biết như là mật độ kớch thớch (số photon tới trong 1 đơn vị diện tớch trong 1 đơn vị thời gian - cm-2s-1), thỡ vận tốc hấp thụ của một phõn tử được xỏc định bằng cụng thức sau (Mathieu và Stryer, 1986):
AR(photon/s) = Iexερ (2.17)
Trong đú ρ = (3,8x10-21molL-1cm3), là một hệ số mà khi nhõn với ε thỡ sẽ được thiết diện hấp thụ của đơn phõn tử σ = ερ.
Như vậy số photon được bức xạ từ một phõn tử trong khoảng thời gian t sẽ bằng vận tốc hấp thụ nhõn với hiệu suất lượng tử Q nhõn với thời gian t. Và như vậy, cường độ huỳnh quang I của một mẫu cú một tập hợp phõn tử sẽ là:
R R a
I = A .Q.t.N = A .Q.t V.C.N (2.18) Trong đú: V là thể tớch của mẫu đo, C là nồng độ phõn tử và Na là số Avogadro. Phối hợp hai cụng thức (2.17) và (2.18), ta cú:
ex. a
I = (I σ).Q.t.V.C.N = B.C (2.19) Đặt: B = (Iexσ). Q.t.V. Na
Thay giỏ trị thiết diện hấp thụ bằng giỏ trị thiết diện hấp thụ hiệu dụng đo được trong cụng thức (2.15) khi đú ta cú:
ex
I = I .t.Q.K (2.20)
Cụng thức (2.19) cho ta thấy cường độ huỳnh quang của mẫu đo tỉ lệ thuận với nồng độ phõn tử cú trong mẫu. Nếu ta cú đồ thị I = ax (a là hệ số, x hoành số), biết a ta cú thể suy ra nồng độ tõm màu ứng với cỏc giỏ trị cường độ huỳnh quang.
Dựa vào cụng thức (2.19), ta cú thể xõy dựng đường cường độ huỳnh quang ứng với từng nồng độ vi khuẩn cho trước (được đỏnh dấu bằng một loại tõm màu và đo trờn một thiết bị với điều kiện đo khụng đổi) làm đường chuẩn. Ta cú thể suy ra nồng độ vi khuẩn cú trong mẫu thớ nghiệm bằng cỏch so sỏnh cường độ huỳnh quang của mẫu (được đỏnh dấu cựng một loại chất và đo trờn cựng một thiết bị đo trong cựng một điều kiện đo) với đường chuẩn.
Phổ huỳnh quang của cỏc mẫu được đo trờn phổ kế huỳnh quang Carry Eclipse tại Viện Vật lý, Viện Hàn lõm Khoa học và Cụng nghệ Việt Nam.