2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.4.2. Phương pháp tách chiết mẫu thức ăn chăn nuôi và mẫu thịt
Mẫu thức ăn chăn nuôi và mẫu thịt trong nghiên cứu này ựược tách chiết theo hướng dẫn kèm theo kắt của nhà sản xuất. Riêng mẫu thức ăn do qui ựịnh của Thông tư 57/2012/TT-BNNPTNT yêu cầu phương pháp phải có Giới hạn phát hiện tối thiểu là 0,2 ppb (bằng 1/5 giới hạn phát hiện của Kắt) nên qui trình tách chiết thức ăn trong nghiên cứu này có sự thay ựổi về lượng mẫu cần lấy ựể tách chiết (10 gam mẫu thay vì 2 gam như hướng dẫn kèm theo kắt).
ỚTách chiết Clenbuterol trong thức ăn chăn nuôi
⋅ Cân 10 gam mẫu thức ăn ựã ựồng nhất vào ống nghiệm 50 ml
⋅ Thêm 20 mL HCL 0,1M vortex 15 phút với tốc ựộ cao nhất.
⋅ Ly tâm với tốc ựộ 4000 vòng/phút trong 10 phút ở nhiệt ựộ phòng rồi lấy 1 ml lớp trên vào ống mớị Cho thêm 55ộL NaOH 1M ựể ựiều chỉnh pH về trung tắnh (6-8).
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 28
⋅ Tiếp tục ly tâm với tốc ựộ 4000 vòng/phút trong 10 phút ở nhiệt ựộ phòng rồi lấy 0,5 mL lớp trên vào ống mớị
⋅ Thêm 0,5 mL dung dịch 1 x PBS, trộn ựềụ
⋅ Lấy 50 ộL dung dịch mẫu tách chiết/giếng khi thử
ỚTách chiết Clenbuterol trong thịt lợn
⋅ Loại bỏ sạch mỡ từ mẫu rồi xay và ựồng nhất mẫu
⋅ Cân 3 gam mẫu ựã ựồng nhất vào ống nghiệm 15 ml
⋅ Thêm 8 ml axetonitrile và 1 ml ethyl acetate ựồng nhất 3 phút vortex với tốc ựộ cao nhất.
⋅ Ly tâm với tốc ựộ 4000 vòng/phút trong 5 phút ở nhiệt ựộ phòng rồi lấy 6 ml lớp trên vào ống mớị
⋅ Bay hơi ựến khô bằng thổi Nito ở 63oC.
⋅ Thu hồi mẫu bằng 1 mL Hexane + 1 mL PBS 1X, vortex 1 phút với với tốc ựộ cao nhất.
⋅ Mở nắp ống và ựun ở 85oC trong 3 phút.
⋅ Ly tâm với tốc ựộ 4000 vòng/phút trong 5 phút ở nhiệt ựộ phòng
⋅ Lấy 50 ộL lớp dịch phắa dưới/giếng khi thử
ỚSơ ựồ bố trắ các giếng trong các lần phân tắch
Các lần phân tắch, mỗi nồng ựộ chuẩn và mỗi mẫu ựều ựược lặp lại hai lần, trong ựó hai hàng giếng 1 và 2 luôn sử dụng ựể xây dựng ựường chuẩn và từ giếng H1 và H2 cùng các giếng còn lại bố trắ mẫu phân tắch.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam Ờ Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 29