4/ Thời gian và địa điểm nghiên cứu đề tài
2.4.2.2 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm hình thái – sinh lý – sinh hĩa
Hình thái khuẩn lạc
Mục đích: mơ tả các đặc điểm khuẩn lạc như kích thước, hình dạng (trịn, oval,
trứng, elip...), màu sắc (trắng, vàng, kem...), tính chất bề mặt (trơn, ướt, bĩng, xù xì, khơ...), mép (trơn, nhẵn, cĩ răng cưa...)
Tiến hành: nuơi cấy Nấm men trên đĩa thạch mơi trường 2 ở nhiệt độ 28 -300
C sau 3 ngày cho các khuẩn lạc xuất hiện đồng nhất, riêng lẻ và quan sát trên kính hiển vi soi nổi
Hình thái tế bào:
Xác định hình dạng tế bào
Mục đích: quan sát hình dạng tế bào (cầu, trứng, bầu dục...); cĩ nảy chồi hay khơng;
nảy chồi đơn cực hay đa cực; các tế bào riêng lẻ hay dính với nhau, cách sắp xếp tế bào.
Tiến hành: cho 1ml giống đã hoạt hĩa vào ống nghiệm chứa 9ml mơi trường Hansen
lỏng, nuơi trong 2 – 3 ngày ở 28 – 300C. Làm tiêu bản giọt ép với dung dịch Fucshin và quan sát trên kính hiển vi với vật kính x100
Xác định kích thước tế bào
Mục đích: đo kích thước (chiều dài, rộng) của nhiều tế bào bằng thước đo vật kính,
sau đĩ lấy giá trị trung bình.
Cách sử dụng thước đo vật kính: Lắp thước đo vật kính (cĩ độ dài xác định) lên bàn kính sao cho các vạch chia của thị kính và vật kính song song và trùng nhau, xác định hệ số đo (tức là 1 vạch thị kính ứng với bao nhiêu vạch của vật kính đã biết độ dài). Lấy vật kính ra, đo các tiêu bản với thị kính, căn cứ vào hệ số đo để xác để xác định kích thước tế bào theo thước đo vật kính.
Tiến hành: giống như thí nghiệm xác định hình dạng tế bào trên
Xác định số lượng tế bào
Mục đích: Sử dụng khung đếm Goriaep (Buồng đếm hồng cầu) đếm sơ lượng tế bào cĩ
trong dịch nhân giống, xác định số tế bào, tỉ lệ % số tế bào nảy chồi, tỉ lệ % số tế bào chết trong 1ml. Từ đĩ, xác định dịch nhân giống này cĩ đủ tiêu chuẩn để đưa vào dịch lên men hay khơng
Số lượng tế bào đạt 12 – 14 triệu/1ml dịch men giống
Số lượng tế bào nảy chồi 10 – 15%
Số lượng tế bào chết khơng quá 2 – 4%
Tiến hành: Sau khi hoạt hĩa và nhân giống, lấy một ít dịch nhân giống, pha lỗng
dịch nhân giống với nước cất theo phương pháp Koch đến nồng độ thích hợp. Nhỏ một giọt dịch vào khung đếm, đậy lamelle lại. Để yên 3–5 phút để các tế bào lắng xuống và cùng nằm trên một mặt phẳng. Tiến hành đếm 4 ơ lớn ở gĩc và 1 ơ lớn ở chính giữa, xác định số lượng tế bào trung bình trong 1 ơ lớn rồi tính số lượng tế bào theo cơng thức
N = a x 25 x 104 x n Trong đĩ:
N: số lượng tế bào trong 1ml dịch nhân giống a: số tế bào trung bình trong 1 ơ lớn
n: độ pha lỗng huyền phù