4/ Thời gian và địa điểm nghiên cứu đề tài
2.4.5.7 Phương pháp xác định lượng acid chrysophanic
Đo mật độ quang ở bước sĩng 515nm, cốc đo dày 1cm với mẫu trắng là dung dịch NaOH 5% cĩ 2% NH4OH.
Thành lập đường chuẩn và phương trình hồi quy tuyến tính
Pha dung dịch mẫu chuẩn
Nguyên tắc
Cân chính xác 0,0100g acid chrysophanic hịa tan hồn tồn trong 10ml cloroform. Dung dịch này được làm phản ứng màu Borntraeger theo phương pháp của Auterhoff.
Cho từ từ 15ml NaOH 40%, rồi 25ml dung dịch NaOH 5% cĩ 2% NH4OH vào dung dịch trên, lắc, gạn lớp nước màu đỏ vào một bình định mức cĩ dung tích 100ml, rồi lại lắc tiếp với dung dịch NaOH 5% cĩ 2% NH4OH đến khi khơng màu. Gạn dung dịch màu vào bình định mức trên, thêm dung dịch NaOH 5% cĩ 2% NH4OH cho đủ 100ml. Dung dịch này là dung dịch mẹ (nồng độ 0,1% = 10.10-3%) dùng pha các mẫu cĩ nồng độ khác nhau để đo mật độ quang học.
Từ dung dịch mẫu chuẩn 10.10-3% pha một thang nồng độ từ 0,5.10-3 đến 2,5.10- 3%.Từ dung dịch mẫu chuẩn 10.10-3% pha một thang nồng độ từ 0,5.10-3 đến 2,5.10-3%. Từ dung dịch mẫu chuẩn 10.10-3% pha một thang nồng độ từ 0,5.10-3 đến 2,5.10-3%.Từ dung dịch mẫu chuẩn 10.10-3% pha một thang nồng độ từ 0,5.10-3 đến 2,5.10-3%.
Lấy 5ml dung dịch 10.10-3% pha thành 100ml, được dung dịch cĩ nồng độ 0,5.10- 3%. Tương tự lấy 10ml, 15ml, 20ml và 25ml dung dịch 10.10-3% pha thành 100ml, được dung dịch cĩ nồng độ tương ứng là 1,0.10-3%; 1,5.10-3%; 2,0.10-3% và 2,5.10-3%.
Đo mật độ quang học của thang dung dịch acid Chrysophanic chuẩn ở bước sĩng 515nm.
Nồng độ 0,5.10-3 1,0.10-3 1,5.10-3 2,0.10-3 2,5.10-3
Độ hấp thụ A 0,125 0,232 0,353 0,465 0,578
Đường chuẩn biểu diễn mối tương quan giữa mật độ quang học với nồng độ
Đồ thị 2.1 Đường chuẩn định lượng acid Chrysophanic trong dược liệu
Từ mối tương quan giữa mật độ quang học với nồng độ là tuyến tính, xây dựng được phương trình hồi quy tuyến tính y = 227,8x + 0,0098 với r2 = 0,999872 hay r2=1 trong đĩ y là mật độ quang học (A) và x là nồng độ.