3.4.1.1. Phương pháp xác định độẩm
- Nguyên tắc: Sấy mẫu trong thời gian dài để tách lượng nước tự do và nước liên kết bên trong sản phẩm. Trong quá trình sấy cần theo dõi và cân khối lượng mẫu đến khi khối lượng lần trước và lần sau nó không thay đổi thì dừng sấy. Lượng nước trong nguyên liệu đã bay hết, phần còn lại là chất khô.
- Công thức tính: Độ ẩm (W%) được tính theo công thức sau:
W (%) = 100 0 1 2 1 × − − G G G G
Trong đó: G1: Khối lượng mẫu + chén sứ trước khi sấy (g) G2: Khối lượng mẫu + chén sứ sau khi sấy (g) G0: Khối lượng chén sứ (g)
3.4.1.2. Phương pháp xác định hàm lượng Diterpenoid
Hàm lượng Diterpenoid được xác định bằng phương so mầu dùng thuốc thử là Vanilin 1% trong H2SO4 ở bước sóng 610nm.
* Nguyên tắc
Dựa vào phản ứng tạo mầu của các Diterpenoid với thuốc thử Vanilin/H2SO4
* Xây dựng phương trình đường chuẩn
- Pha vanilin 1% trong H2SO4 Ta có: % mct 100 C mdd = Từ công thức trên ta có: . % . . % 100 100 mdd C D V C mct= =
Trong đó: D = 1,84 mg/ml (khối lượng riêng của dung dịch H2SO4 V là thể tích dung dịch cần pha
C% là nồng độ vanilin cần pha (C% = 1%)
- Lấy 50ml dung dịch mẫu (gốc) dùng MeOH pha loãng dung dịch gốc thành các dung dịch có nồng độ 0,001; 0,005; 0,01; 0,05; 0,1; 0,2; 0,5.
- Lấy 5ml mỗi nồng độ đã pha cho vào 7 ống nghiệm khác nhau. Thêm lần lượt các ống nghiệm 1ml thuốc thử vanilin/H2SO4 1% lắc đều, để trong 5 phút sau đó đưa đi đo OD ở bước sóng 610nm.
* Kết quả xây dựng đường chuẩn
Đường chuẩn Diterpenoid được dựng nhờ chương trình Microsoft Excel được thể hiện ở phụ lục 1. Với trục tung là mật độ quang và trục hoành là nồng độ chất chuẩn. Phương trình thể hiện mối tương quan giữa Diterpenoid và OD610nm là:
y = 5,5459x + 0,0168
Trong đó y là hàm lượng Diterpenoid trong 1ml dịch (mg/ml), x là giá trị OD610nm tương ứng. Hệ số tương quan R2 = 0,9998 chứng tỏ mối liên quan giữa x
và y là chặt chẽ.
Dựa vào đường chuẩn, phương trình đường chuẩn y = 5,5459x + 0,0168 và kết quả đo quang phổ hấp thụ tại bước sóng 610nm của các mẫu phân tích, xác định
được nồng độ của các mẫu phân tích. Hàm lượng Diterpenoid được xác đinh thông qua công thức dưới đây.
* Tính toán xác định hàm lượng Diterpenoid trong nấm Đầu Khỉ
- Từ đường chuẩn xác định được nồng độ mẫu phân tích. - Hàm lượng Diterpenoid được tính theo công thức sau:
Hàm lượng Diterpenoid (mg/g) = X n V. .
m
Trong đó: x: Số gam xác định từ đường chuẩn V: Thể tích dịch trích ly
n: Hệ số pha loãng
m: Khối lượng mẫu ban đầu đem phân tích = 10g