Phương pháp thử nghiệm được tiến hành theo Dược điển Việt Nam IV (Bộ Y tế, 2009) có phối hợp với Actinomycin D giúp giảm liều lượng của chất thử nghiệm với động vật thí nghiệm để giảm liều tiêm trên động vật (Rose, Bradley, 1971). Thử nghiệm tiến hành ở ba mức liều tương đương 1xLD50(2,5 µg/g: tiêm 2,5 µg SEB trên 1 g trọng lượng cơ thể chuột); 3xLD50 (7,5 µg/g) và 10xLD50 (25 µg/g) (Chen et al.,
1994).
Động vật thí nghiệm gồm 70 chuột nhắt cái trắng khỏe mạnh, không dị tật, có trọng lượng từ 20±2 gram/con, khoảng 6 – 8 tuần tuổi được nuôi 3 ngày ổn định trước
K16 – Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật 39
thử nghiệm tại phòng nuôi động vật của Học viện Quân Y. Sau đó chuột được chia đều làm 7 nhóm nghiên cứu, mỗi nhóm 10 con.
Chuẩn bị hóa chất tiêm cho chuột:
Các hóa chất được pha trong dung dịch nước muối sinh lý nồng độ: 0,9% trước khi đem tiêm cho chuột thí nghiệm.
Actinomycin D nồng độ 20 µg/ ml, tổng thể tích = 50 ml
Dung dịch mẫu wtSEB nồng độ 100 µg/ ml (kí hiệu: M1), tổng thể tích là 20 ml Dung dịch mẫu wtSEB nồng độ 500 µg/ ml (kí hiệu: M2), tổng thể tích là 10 ml Dung dịch mẫu mtSEB nồng độ 100 µg/ ml (kí hiệu: M3), tổng thể tích là 20 ml Dung dịch mẫu mtSEB nồng độ 500 µg/ ml (kí hiệu: M4), tổng thể tích là 10 ml Nước muối sinh lý 0,9 % x 01 chai
Tiến hành:
Tất cả các chất thử nghiệm được tiêm vào cơ thể chuột bằng đường tiêm vào ổ bụng của 7 lô chuột nghiên cứu
Bắt đầu
Tất cả các chuột từ lô 1 đến lô 7: tiêm Actinomycin D số lượng: 0,5 ml/ 1 con tương đương với nồng độ 0,5 µg/g cân nặng của chuột thí nghiệm
Sau 30 phút
+ Lô 1: tiêm dung dịch NaCl 0,9% số lượng 1,5 ml/1 con
+ Lô 2: tiêm dung dịch M1số lượng: 0,5 ml/1 con + 1 ml dung dịch NaCl 0,9% (tương đương 1 x LD50)
+ Lô 3: tiêm dung dịch M1số lượng: 1,5 ml/1 con (tương đương 3 x LD50)
+ Lô 4: tiêm dung dịch M2 số lượng 1 ml/1 con + 0,5 ml dung dịch NaCl 0,9% (tương đương 10 x LD50)
+ Lô 5: tiêm dung dịch M3số lượng: 0,5 ml/1 con + 1 ml dung dịch NaCl 0,9% (tương đương 1 x LD50)
K16 – Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật 40
+ Lô 7: tiêm dung dịch M4 số lượng 1 ml/1 con + 0,5 ml dung dịch NaCl 0,9% (tương đương 10 x LD50)
Theo dõi số chuột sống chết của mỗi nhóm trong 7 ngày sau tiêm thuốc