100 ml dung dịch fucoidan (1 mg/ml) được cho qua cột trao đổi ion (dạng H+; CG-120, 200–400 mesh, Serva, Germany). Rửa giải cột với 200 ml nước cất. Dung dịch sau rửa giải được cơ tới gần khơ bằng máy cơ quay chân khơng, mẫu sau đĩ được hịa tan lại trong 20ml dung dịch hỗn hợp dimethylsulfoxide (DMSO) và methanol (MeOH) cĩ tỉ lệ [DMSO (19ml) : MeOH (1ml)] thêm vào 0,5ml Pyridin, tồn bộ dung dịch được chuyển sang một ống thủy tinh cĩ nút vặn kín và cho phản ứng ở 100 oC trong thời gian 6h. Hỗn hợp sau phản ứng được thẩm tách trong nước cất bằng màng thẩm tách 10 kDa trong thời gian 48h, hỗn hợp sau thẩm tách được đơng khơ ta thu được mẫu fucoidan khử sulfate ở dạng bột.
2.3.6. Phương pháp phân tích liên kết bằng methyl hĩa [36]
1mg mẫu fucoidan đã khử sulfate (dSF) được hịa tan trong 1ml Me2SO (Dimethyl sulfoxide-DMSO) trong một lọ vial cĩ nút vặn ở nhiệt độ 40oC trong thời gian 10 phút, thêm tiếp vào 100 mg bột NaOH và 0,2ml methyl iodua (MeI). Hỗn hợp phản ứng được lắc liên tục trong thời gian 20 phút ở 40 oC. Sau đĩ một lượng tương tự NaOH và MeI được thêm vào. Hỗn hợp tiếp tục được lắc trong thời gian 1h, sau đĩ làm lạnh và thêm vào 1ml nước. Lượng methyl iodua dư được loại bỏ
bằng cơ quay chân khơng, phần dung dịch cịn lại được đưa qua cột C18, đầu tiên rửa giải bằng nước cất, tiếp theo được rửa giải với 50% methanol (MeOH). Phần dung dịch được rửa giải với MeOH được cho bay hơi trên máy cơ quay chân khơng tới gần khơ. Mẫu sau khi cho bay hơi được hịa tan lại trong 1ml TFA 4N và cho thủy phân ở nhiệt độ 100 oC trong thời gian 6h, mẫu sau thủy phân được khử với NaBH4 và Methyl hĩa với Ac2O/pyridin. Các methylate alditol acetate riêng phần được phân tích bằng GLC-MS.