* Phương pháp chiết tách [143]:
Dựa trên cơ sở tham khảo tài liệu đã cơng bố về các phương pháp chiết tách fucoidan cho mục đích nghiên cứu cấu trúc [98,103,104,143]. Chúng tơi tiến hành chiết theo phương pháp sử dụng dung dịch axít lỗng (sơ đồ hình 2.1) vì phương pháp này ít ảnh hưởng đến cấu trúc phân tử tự nhiên của fucoidan, đơn giản và dễ thực hiện. Phương pháp này cũng đã được chọn làm phương pháp chính để chiết fucoidan cĩ hoạt tính theo Patent của Nga (Patent WO 2005/014657) [98].
Hình 2.1. Sơ đồ chiết tách và phân đoạn fucoidan từ rong nâu. Rong tươi
Rong đã loại chất béo
Dịch chiết rong
Polysacarit (thơ)
Chiết với (Cồn; Aceton, Chloroform) Polyphenol, chất màu, các hợp
chất trọng lượng phân tử thấp
Chiết với HCl 0,1N, 60oC, t = 2 giờ (3lần) Bã rong
Trung hịa với NaHCO3 8%
Cơ đặc, thẩm tách bằng màng 10kDa Tủa với 4 lần thể tích cồn 98
hoặc đơng khơ
Hịa tan trong HCl 0,04N, ly tâm
Sắc ký trao đổi anion (DEAE-Cellulose) Rửa giải với HCl 0,04N
và gradient nồng độ của NaCl (0 - 2 N) Polyuronic axit (PA)
L F1 F2 F3 F4
* Tách phân đoạn fucoidan [143]
Fucoidan được tiến hành phân đoạn tinh chế bằng sắc ký trao đổi anion trên cột DEAE-cellulose (hình 2.1). Mẫu bột fucoidan thơ (gồm fucoidan, laminaran và polyuronan) được hịa tan trong dung dịch 0,04N HCl, ly tâm tách phần khơng tan (polyuronan), phần dịch trong được cho chạy qua cột sắc ký DEAE-cellulose. Hợp chất laminaran (hợp chất khơng cĩ nhĩm mang điện tích) khơng bị hấp thụ trên cột sẽ được rửa giải đầu tiên bằng dung dịch HCl lỗng (0,04N) hoặc nước cất. Tiếp theo các phân đoạn fucoidan sẽ được rửa giải bằng dung dịch muối NaCl ở các nồng độ khác nhau.