kỹ thuật pcr polymerase chain reaction hay còn gọi là phản ứng chuỗi trùng hợp được karry mullis hoàn thiện vào giữa những năm 80 và đã đưa lại một cuộc cách mạng trong di truyền học phân tử
... phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh họcphântử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vàonăm 1985, phương ... kết hợplại nhờ enzym ADN ligase Như sản phẩm PCR tách dòng vào vectơ T PCRhoànthiện nhanh, nhiều biến dạng PCR đời : - RT – PCR (reverse transcriptase PCR) gọi RNA – PCRhay RT – PCR RT – PCR ... thường với cá thể đồng hợptử đột biến Nếu cá thể dịhợptử hai phảnứngPCRdi n bình thường Để đảm bảo phảnứngPCR thực xác, người ta thường đưavào thí nghiệm mồi đối chứng – mồi nhân vùng gen...
... gây Năm 1992, Italia, O111:H- ñã gây nhi u ca b nh HUS Úc, báo cáo ca b nh HUS ñ u tiên VTEC gây vàonăm 1987 Ki m tra m u phân, bác s ñã phân l p ñư c ch ng E coli O111:H2 Năm 1990, Pryor cs phân ... đ c p t i k thu t Polymerasechainreaction (PCR) S ñ i c a k thu t PCR ñã ñưa l i m t cu c cách m ng vi c nghiên c u, phân tích gen h gen Trư c đây, khó khăn l n nh t vi c phân tích gen n m ... n ng PCR Môi trư ng, hóa ch t dùng ph n ng PCR ñi n di s n ph m PCR hãng Fermentas s n xu t G m: AMP x buffer, dNTP stock, 50 x TAE, Taq-DNA polymerase, Primer, Gel loading buffer, Ethidium bromide...
... Chomczynski [2] Khuếch đại týp gene tổ hợp BCR-ABL b2a2 b3a2 kỹthuật RT -PCR (Reverse Transcription -Polymerase Chain Reaction) sau tiến hành xét nghiệm định lượng Real-Time PCR nhờ 03 nồng độ chuẩn gen ... loại bỏ hồn tồn tác nhân gây bệnh gen tổ hợp BCR-ABL (Joanna Gora-Tybor 2008) [3], điều giải thích chúng tơi sử dụng kỹthuật RT -PCR phát di n gen tổ hợp BCR-ABL 59/60 bệnh nhân CML (98,33%) ... thời có kế hoạch điều trị theo dõi đáp ứng điều trị bệnh CML cách hiệu Kết luận Từ kết thu trình bày nghĩ cần phải nhanh chóng phát triển ứng dụng kỹthuậtPCR lĩnh vực đời sống, đặc biệt ngành...
... KỸTHUẬTPCR (Polymerase Chain Reaction) I MỞ ĐẦU: KỹthuậtPCR (viết tắt từ chữ PolymeraseChain Reaction) , haygọiphảnứng tổng hợp dây chuyền nhờ polymerasephảnứngchuỗi tổng hợp ... rãi kỹthuậtPCR đòi hỏi phải biết rõ trình tự ADN khn mẫu Đây điểm giới hạn kỹthuật này, nghĩa phải dựavào tảng kỹthuật công nghệ ditruyền không thay kỹthuật Do người ta không sử dụng kỹthuật ... chuỗi tổng hợp ADN, Karl Mullis cộng phát minh năm 1985 KỹthuậtPCRđưalạicáchmạngditruyềnphân tử, khuếch đại in vitro có chọn lọc tạo dòng in vitro mà khơng cần di n tế bào, khắc phục nhược...
... cầu trùng [18] 2.10 KỹthuậtPCR 2.10.1 Khái niệm Kĩ thuậtPCR khởi đầu vào thập niên 1 980 (Saiki cộng (1985); Mullis Faloona, (1987)), khơng hợp lí nói tác động PCR lên sinh họcphân tử, khoa học ... phầnphảnứngPCR gồm có: ADN mẫu, mồi xi mồi ngược, dNTPs (dATP, dCTP, dGTP,dTTP), dung dịch đệm cho phảnứng PCR, MgCl2 , Taq polymerase 24 2.10.3 Quy trình phảnứngPCRPhảnứngPCRchuỗi ... nhiễm cầu trùng - Phân lập oocyst cầu trùngtừ mẫu phân gà thu - Tách ADN từ Oocysts cầu trùngphân lập - Sử dụng kỹthuậtPCR (polymerase chain reaction) để phát số lồi cầu trùng có phân gà 3.2...
... phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh họcphântử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR Kary Mullis đề suất vàonăm 1985, phương ... họcphântử chuẩn đoán bệnh ditruyền người, ditruyền quần thể, phân tích pháp y an ninh hình sự,…cho kết cao Do ứng dụng to lớn kỳdi u lĩnh vực, PCR thật làm đại cáchmạng sinh họcphântử ... lãnh vực Vậy nói PCR thực làm đại cáchmạng sinh họcphântử Với mục đích tìm hiểu để có nhìn tổng quan kỷthuật này, em chọn đề tài nghiên cứu là: " KỷthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) " Phần...
... đại phântử ADN, ARN Protein trình tái bản, phiên mã dịch mã Trong số tiến kỹthuật góp phần tạo bùng nổ lĩnh vực sinh họcphântử phải kể tới kỹthuậtPCR (Polymerase Chain Reaction) KỹthuậtPCR ... thực Kỹthuậtứng dụng nhiều lĩnh vực sinh họcphântử tạo dòng phân tử, phát chẩn đoán bệnh ( virus, vi khuẩn, ký sinh trùng ), ditruyền học( sản xuất marker phân tử) , chuẩn đoán bệnh ditruyền ... thường với cá thể đồng hợptử đột biến Nếu cá thể dịhợptử hai phảnứngPCRdi n bình thường Để đảm bảo phảnứngPCR thực xác, người ta thường đưavào thí nghiệm mồi đối chứng – mồi nhân vùng gen...
... CÁC ỨNG DỤNG CỦA KỸTHUẬTPCR Nhân phântử RNA kỹthuậtPCR Cần có đoạn mồi kết hợp với khn RNA, sau tổng hợpphântử DNA nhờ enzyme reverse trancriptase theo kỹthuậtPCR Enzyme Tth DNA -polymerase ... chu kỳPhảnứngPCR tiến hành khoảng 25-40 chu kỳTrongkỹthuậtPCR thông thêng ngêi ta thùc hiƯn bíc biÕn tÝnh ADN tríc bước vào chu kỳ Bước thư ờng thùc hiƯn ë 94-95oC, 2-3 Ph¶n øng PCR ... Phương pháp PCR phương pháp khuếch đại nhanh nhiều đoạn DNA mà không cần phải qua tạo dòng Phương pháp K .Mullis đưanăm 1985 Saiki hoànthiệnnăm 1988 I NGUYÊN TẮC CỦA PHƯƠNG PHÁP PCRphảnứng nhân...
... làm khuôn cho phảnứngPCR - Thực phảnứng PCR: PhảnứngPCR thực với thể tích 25µl eppendorf 0,5ml 0,2ml gồm thành phần Bảng 49 Bảng Thành phần sử dụng phảnứngPCR phát C Perfringens Phảnứng ... sát điều kiện tối ưu phảnứngPCRPhảnứngPCR thường chịu nhiều ảnh hưởng thành phần điều kiện phảnứngTrongphần thực nghiệm này, kiểm chứng số điều kiện tối ưu 39 phảnứngPCR như: nhiệt độ ... Method tế) (hệ thống Nordic đánh giá phương pháp sinh học thay thế) PCR : PolymeraseChainReaction (phản ứngchuỗi tổng hợp polymerase) TAE : Tris acetic acid - Ethylene diamine tetraacetic acid...
... kiểm chứng âm tính Hút µl (7.3.2) vào ống hỗn hợpphảnứngPCR bước (5.4.1) Hoặc hút µl (7.3.3) vào ống hỗn hợpphảnứng PCR- hạt bước (5.5.1) 7.4.4 Mẫu kiểm chứng dương tính Hút µl (7.3.3) vào ống ... mẫu vào ống hỗn hợpphảnứng PCR- hạt bước (5.5.1) 7.4.2 Mẫu kiểm sốt Hút µl (7.3.1) vào ống hỗn hợpphảnứngPCR bước (5.4.1) Hoặc hút µl dịch DNA mẫu vào ống hỗn hợpphảnứng PCR- hạt bước (5.5.1) ... trước cho ống vào máy chu trình nhiệt Mẫu kiểm soát dùng để kiểm tra độ tinh mồi, hỗn hợpphảnứngPCR thuốc thử 7.4.5 Đặt ống vào máy chu trình nhiệt để thực phảnứngchuỗitrùnghợp theo chu...
... dịch chiết DNA cho vào ống chứa hỗn hợpphảnứng khuếch đại PCR (5.4.1 5.4.2) 7.3.2 Mẫu kiểm chứng dương tính µl mẫu kiểm chứng dương tính cho vào chứa hỗn hợpphảnứng khuếch đại PCR (5.4.1 5.4.2) ... Mẫu kiểm chứng âm tính µl mẫu kiểm chứng âm tính cho vào ống chứa hỗn hợpphảnứng khuếch đại PCR (5.4.1 5.4.2) 7.3.4 Khuếch đại phảnứngPCR Sau cho dịch tách chiết mẫu, mẫu kiểm chứng dương ... kiểm chứng âm tính vào ống chứa hỗn hợpphảnứng khuếch đại PCR đánh dấu, đậy nắp ống thật chặt, ly tâm nhẹ để dung dịch tụ hết xuống đáy ống khơng dính thành ống Đặt ống chứa hỗn hợpphảnứng khuếch...
... thử sản phẩm dùng cho phảnứng khuếch đại PCR tổng hợp thành chế phẩm lưu hành thị trường có thành phần phù hợp 5.3 Hỗn hợpphảnứng RT -PCR Có thể sử dụng hỗn hợpphảnứng RT -PCR có bán sẵn pha ... µl dịch RNA mẫu vào ống hỗn hợpphảnứng RT -PCR (5.3) 7.4.2 Mẫu kiểm sốt Hút µl dung dịch nước cất hai lần dung dịch DEPC vào ống hỗn hợpphảnứng RT -PCR (5.3) 7.4.3 Mẫu kiểm chứng âm tính Hút ... trước không bị bệnh vào ống hỗn hợpphảnứng RT -PCR (5.3) 7.4.4 Mẫu kiểm chứng dương tính Hút µl dịch RNA mẫu tôm nhiễm TSV biết trước plasmid TSV vào ống hỗn hợpphảnứng RT -PCR (5.3) CHÚ THÍCH...
... hiệu cao 1.3.2.3 Phương pháp laiphântử (Hybridization) Từnăm 1 980, nhiều nghiên cứu tiến hành nhằm ứng dụng thành tựu kỹthuậtdi truyền, sinh họcphântửvào lĩnh vực thực phẩm [8] Đây phương ... + Kiểm tra di n vi sinh vật [70] + So sánh mức độ biểu gene [65],… 1.4.2 Tình hình ứng dụng kỹthuậtPCR giới Từ đời vàonăm 1985, giới có nhiều ứng dụng kỹthuậtPCRphân tích sinh học ngày sử ... 1l Taq DNA polymerasevào ống Tổng thể tích phảnứngPCR 25l - Ly tâm nhẹ kéo dung dịch xuống đáy ống cho vào máy PCR Hình 2.4 Đưa mẫu vào máy PCR d Bước 4: Thực chương trình PCR sau: Biến...
... nhờ Polymerase, có tài liệu dịch phảnứngchuỗitrùng hợp, hay đơn giản kỹthuậtPCR dùng đơn giản kỹthuậtPCRKỹthuật Kary Mullis cộng phát minh vào thập niên 80kỷ hai mơi đalạicáchmạngdi ... nội, Năm 2004 PCR (Polymerase chain reaction) I Những kiến thức PCRPCRtừ viÕt t¾t cđa cơm tõ PolymeraseChainReaction tiÕng Anh Có nhiều cách dịch cho cụm từ Có sách dịch phảnứng tổng hợp ... ADN PCR 1.073.741.824 IV Cách tiến hành phảnứngPCRPCRkỹthuật phòng thí nghiệm tơng đối dễ làm, kỹthuậtđaứng dụng rộng rãi Vật liệu khởi đầu cho PCR ADN có chứa đoạn cần nhân lên, gọi...
... Xử lí: Khử trùng khu vực thao tác Việc thiết lập phảnứngPCRphân tích sản phẩm tiến hành khu vực khác - Nhân không đặc hiệu: - Các sai sót Taq polymerase Các dạng khác PCR: - RT PCR (reverse ... 2 Phảnứng PCR: Thành phầnphản ứng: - DNA mẫu - Mồi xuôi mồi ngược - dNTP (gồm loại: dATP, dGTP, dTTP, dCTP) - MgCl2 - Enzyme polymerase (Taq polymerase, Pfu…) - Dung ... MgCl2 - Enzyme polymerase (Taq polymerase, Pfu…) - Dung dịch đệm - Nước cất lần (đã khử trùng) Các bước phản ứng: Làchuỗi nhiều chu kỳ, chu kỳ gồm bước: Bước 1: Biến tính (denaturation) DNA biến...