... NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BƢỚCĐẦUXÂYDỰNGQUYTRÌNHNHUỘMNHIỄMSẮCTHỂTRÊNTẾBÀOMÁUTHỎ Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực THS HỒ THỊ NGA MAI MINH MẪN ... cầu thực tế, đƣợc phân công Bộ môn Công Nghệ Sinh Học Trƣờng Đại Học Nông Lâm với giúp đỡ Khoa Chăn Nuôi Thú Y, thực đề tài Bƣớcđầuxâydựngquytrìnhnhuộmnhiễmsắcthểtếbàomáuthỏ , để ... sở cho việc xâydựng kiểu nhân hoàn chỉnh thỏ, góp phần ứng dụng cho nghiên cứu sau 2 1.2 Mục tiêu yêu cầu 1.2.1 Mục tiêu Xâydựngquytrìnhnhuộmnhiễmsắcthểtếbào bạch cầu máuthỏ 1.2.2 Yêu...
... NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BƢỚCĐẦUXÂYDỰNGQUYTRÌNHNHUỘMNHIỄMSẮCTHỂTRÊNTẾBÀOMÁUTHỎ Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực THS HỒ THỊ NGA MAI MINH MẪN ... cầu thực tế, đƣợc phân công Bộ môn Công Nghệ Sinh Học Trƣờng Đại Học Nông Lâm với giúp đỡ Khoa Chăn Nuôi Thú Y, thực đề tài Bƣớcđầuxâydựngquytrìnhnhuộmnhiễmsắcthểtếbàomáuthỏ , để ... sở cho việc xâydựng kiểu nhân hoàn chỉnh thỏ, góp phần ứng dụng cho nghiên cứu sau 2 1.2 Mục tiêu yêu cầu 1.2.1 Mục tiêu Xâydựngquytrìnhnhuộmnhiễmsắcthểtếbào bạch cầu máuthỏ 1.2.2 Yêu...
... nghiên cứu 3.3.1 Quytrình biến nạp plasmid vào tếbào vi khuẩn Nhiễmsắcthể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tếbào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tếbào Màng tếbào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... hợp thu nhận sinh khối tếbào Quá trình tách chiết plasmid từ tếbào chủ công đoạn cuối nhằm thu nhận plasmid dƣới dạng tinh Các quytrình tách chiết có bƣớc phá vỡ màng tế bào, biến tính DNA, tủa ... cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tếbào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tếbào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tếbào khả nạp Tếbào E.coly tếbào chủ đƣợc sử dụng rộng rãi cấu trúc...
... nghiên cứu 3.3.1 Quytrình biến nạp plasmid vào tếbào vi khuẩn Nhiễmsắcthể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tếbào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tếbào Màng tếbào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... hợp thu nhận sinh khối tếbào Quá trình tách chiết plasmid từ tếbào chủ công đoạn cuối nhằm thu nhận plasmid dƣới dạng tinh Các quytrình tách chiết có bƣớc phá vỡ màng tế bào, biến tính DNA, tủa ... cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tếbào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tếbào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tếbào khả nạp Tếbào E.coly tếbào chủ đƣợc sử dụng rộng rãi cấu trúc...
... nghiên cứu 3.3.1 Quytrình biến nạp plasmid vào tếbào vi khuẩn Nhiễmsắcthể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tếbào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tếbào Màng tếbào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... hợp thu nhận sinh khối tếbào Quá trình tách chiết plasmid từ tếbào chủ công đoạn cuối nhằm thu nhận plasmid dƣới dạng tinh Các quytrình tách chiết có bƣớc phá vỡ màng tế bào, biến tính DNA, tủa ... cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tếbào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tếbào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tếbào khả nạp Tếbào E.coly tếbào chủ đƣợc sử dụng rộng rãi cấu trúc...
... nghiệm 25 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu .26 3.3.1 Quytrình biến nạp plasmid vào tếbào vi khuẩn 26 3.3.2 Quytrình biến nạp đoạn DNA vào vi khuẩn E.coly DH5α kiểm tra .27 3.3.3 ... ITS5) .38 PHẦN 4: KẾT QUẢ THẢO LUẬN .39 4.1 Xâydựng đƣờng tƣơng quan tuyến tính 39 4.2 Các quytrình biến nạp plasmid vào tếbào vi khuẩn 43 4.2.1 Chọn lọc vi khuẩn biến nạp ... 28 3.3.3.2 Cách tiến hành 28 3.3.4 Chuẩn bị tếbào khả nạp .29 3.3.5 Biến nạp plasmid pBluescript vào tếbào vi khuẩn E.coly DH5α phƣơng pháp sốc nhiệt 30...
... Chúng xâydựng đƣợc quytrình chuyển đoạn DNA vào tếbào chủ DH5α Quytrình sử dụng cho thí nghiệm tạo dòng áp dụng trực tiếp phòng thí nghiêm Các bƣớcquytrình Chuẩn bị khả nạp Dịch tếbào chuẩn ... làm khả nạp phải có mật độ tếbào từ x 107 đến 108 tiến hành theo quytrình sau : Bƣớc 1: Chuyển bình tam giác chứa dịch nuôi cấy vào thùng nƣớc đá giữ lạnh 10 phút Bƣớc 2: Hút 1.5ml dịch nuôi ... đoạn DNA từ sản phẩm cắt vào tế bào, chuyển gen hoàn chỉnh vào tếbào chủ kiểm soát biểu của gen 59 Nếu trƣờng hợp không đủ hoá chất để tách chiết plasmid theo quytrình sử dụng SDS - Kiềm nên...
... vào phải ly tâm không DNA gen phục hồi cấu trúc sản phẩm plasmid chiết tách có lẫn DNA gen Ở bƣớcquytrình tách chiết, sau ly tâm xong phải lấy nhẹ nhàng cẩn thận hút phần dịch bên không đƣợc ... gel agarose 0.8% (EcoRV) sản phẩm cắt enzym EcoRV plasmid tách chiết từ tỉ lệ biến nạp theo thể tích tếbào khả nạp plasmid :0.5 (lần 1), (DC1) plasmid gốc (chưa biến nạp), (DC2, DC3) plasmid đối ... bp môi trƣờng LB/amp(100μg/ml)/ X-gal/IPTG (a) Biến nạp với tỉ lệ tếbào khả nạp plasmid tái tổ hợp với đoạn DNA 629bp theo thể tích (μl) 10 :10 phục hồi 200μl môi trường LB lỏng, cấy 150μl dịch...
... nuôi cấy dễ bị nhiễm vi sinh vật từ bên ngoài, phải cẩn thận thao tác Mật độ tếbào vi khuẩn phụ thuộc vào yếu tố sau Thể tích môi trƣờng nuôi cấy Lƣợng tếbào vi khuẩn cho vào ban đầu Nhiệt độ ... Dựa vào đƣờng tƣơng quan tuyến tính giá trị OD mật số tếbào ta thấy để đạt đƣợc mật số tếbào từ x 107 – 108 tế bào/ ml ta nên chọn dịch nuôi cấy có giá trị OD từ 0.6 – 1, kết khác ... Kết biến nạp thể tích 3µl khả nạp 0.5µl plasmid thu đƣợc toàn khuẩn lac màu xanh, kết tốt quytrình biến nạp mà đƣa Theo tỉ lệ khả nạp plasmid quytrình phù hợp dựa vào tỉ lệ để làm bƣớc thí nghiệm...
... Chuyển sản phẩm nối vào tếbào vi khuẩn E.coly DH5α khả nạp (theo quytrình Sambrook cộng sự, 1989 có chỉnh sửa) Thực biến nạp theo quytrình sau Hút 10µl dịch huyền phù tếbào competen cell đƣơc ... dừng lại không theo dõi thực tế cần biết điều kiện làm thí nghiệm này, để đạt đƣợc mật số tếbào 108 tế bào/ ml giá trị OD tƣơng ứng Bảng 4.1 Gía trị đo OD số tế bào/ ml theo thời gian nuôi cấy ... Chiết tách theo quytrình 3.3.7.1, thực phản ứng cắt theo quytrình 3.3.7.2 Phản ứng PCR plasmid: Primer T3 primer T7 đƣợc thiết kế dựa trình tự T3, T7 RNA polymerase promoter có trình tự T7 primer...
... nghiên cứu 3.3.1 Quytrình biến nạp plasmid vào tếbào vi khuẩn Nhiễmsắcthể + CaCl2 + DNA plasmid Màng tếbào trở nên khả nạp sốc nhiệt ổn định tếbào Màng tếbào hồi phục plasmid bắt đầu chép Nhân ... Lật ngƣợc đĩa, ủ qua đêm 370C 30 Lặp lại quytrình nhƣng không cho DNA plasmid vào tếbào khả nạp để làm đối chứng Quytrình Hút 3µl dịch huyền phù tếbào khả nạp đƣợc chuẩn bị cho vào eppendorf ... tếbào độ đục Do định lƣợng mật độ tếbào cách gián tiếp thông qua việc đo OD bƣớc sóng từ 550 – 610 nm Trong trƣờng hợp này, phải thiết lập đƣờng tƣơng quan tuyến tính giá trị OD mật độ tế bào...
... chuẩn bị tếbào khả nạp nâng cao hệ số biến nạp plasmid sử dụng chủng E.coly khác Kết nghiên cứu ông cho thấy sử dụngtếbàođầu phage log ảnh hƣởng lớn đến thành công việc chuẩn bị tếbào khả ... số pha loãng 21 OV: thể tích ban đầu phục hồi (µl) OP: thể tích dịch vi khuẩn đƣợc trải đĩa (µl) Inoue cộng sự(1990), đƣa công thức dung dịch TB sử dụngtrình chuẩn bị tếbào khả nạp nhƣ sau: ... plasmid tái tổ hợp vào tếbào vi khuẩn E.coly phƣơng pháp Calcium chloride Sambrook cộng (1989), đƣa phƣơng pháp chuẩn bị tếbào E.coly khả nạp, biến nạp plasmid vào tếbào theo phƣơng pháp hóa...
... cƣờng khả biến nạp, ngƣời ta thƣờng xử lý tếbào chủ phƣơng pháp hóa học hay vật lý Tếbào chủ sau đƣợc xử lý phƣơng pháp gọi tếbào khả nạp Tếbào E.coly tếbào chủ đƣợc sử dụng rộng rãi cấu trúc ... plasmid tái tổ hợp vào tếbào ký chủ Ecoly DH5α 1.3 Nội dung thực 1.3.1 Phần Xâydựng đƣờng tƣơng quan tuyến tính giá trị OD600nm mật số tếbào vi khuẩn dựa tƣơng quan số tếbào theo thời gian nuôi ... đề tài “ Xâydựngquytrình biến nạp đoạn DNA vào tếbào vi khuẩn E.coly DH5α” khoá luận tốt nghiệp 1.2 Mục tiêu đề tài Thiết lập quytrình chèn đoạn DNA vào plasmid pBluescipt...
... Việt Nam cho phép trồng rộng rãi năm 2011 Xuất phát từ thực tế thời gian thực tập tốt nghiệp, tiến hành thực đề tài “Bước đầuxâydựngquytrình chuyển gen gus vào giống đậu tương ĐT26 thông qua ... ĐT26 thông qua vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens” ♦ Mục đích yêu cầu đề tài: - Mục đích: Xâydựngquytrình công nghệ chuyển gen gus có hiệu để từ áp dụng chuyển gen khác gen kháng hạn, gen kháng ... Trong khuôn khổ đồ án tốt nghiệp, tập trung nghiên cứu cụ thể nội dung sau: * Nghiên cứu tạo vật liệu vô trùng ban đầu * Nghiên cứu quytrình biến nạp hiệu nhất, có: • Xác định chủng vi khuẩn có...
... thâm nhiễm có di Một tăng sinh bất bình thường tếbào dẫn đến u lành, gồm tếbào giống hệt nhau, tính chất tràn lấn u ác tính gồm tếbào tăng sinh vô tổ chức, tếbào phát triển tếbào kia, gạt tế ... cuống bào tử đính mọc thẳng đứng, có vách sần sùi, hình thành đầu mang bào tử đính có dạng gần hình cầu đến thuôn dài Các thể chai đính trực tiếp vào đầu mang bào tử đính (thể bình lớp) qua lớp thể ... Aflatoxin gây bệnh chủ yếu tếbào gan nhiều có phân hóa, có sinh di có ung thư túi mật, có di Trong số trường hợp di lan tới phổi Có thể thấy khối u đủ loại tế bào, từ tếbào nhu mô phân hóa rõ rệt...