điện ly công nghệ dna

... phân tử, nhập môn công nghệ sinh học, công nghệ tế bào, công nghệ chuyển gen… giáo trình công nghệ DNA tái tổ hợp sẽ giúp sinh viên tiếp cận thêm một lĩnh vực khác của công nghệ sinh học thông ... truyền hay kỹ thuật gen) là một bộ phận quan trọng và là công nghệ chìa khóa (key technology) của lĩnh vực công nghệ sinh học. Công nghệ DNA tái tổ hợp được ra đời trên cơ sở các thành tựu của ... được DNA bằng các phương pháp nhân tạo như: hóa biến nạp, điện biến nạp Biến nạp bằng điện (electroporation). Kỹ thuật dùng xung điện tạo ra các lỗ thủng tạm thời trên màng sinh chất để đưa DNA...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... thực vật (công nghệ sinh học truyền thống). Theo nghĩa phổ biến hiện nay đó là những quá trình sản xuất sử dụng các giống sinh vật mới, được tạo ra bởi công nghệ DNA tái tổ hợp (công nghệ sinh ... con người. Công nghệ này có ứng dụng rộng rãi trong y học, dược học, nông nghiệp và nhiều ngành công nghiệp khác. Công nghệ sinh học (biotechnology). Theo nghĩa rộng là các quá trình công nghiệp ... của bacteriophage λ. Công nghệ DNA tái tổ hợp (DNA recombinant technology). Hệ thống các phương pháp phòng thí nghiệm cho phép cắt đoạn DNA từ một sinh vật để ghép nối vào DNA của một sinh vật...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... hạn chế cho phép nối cDNA sợi đôi với các plasmid vector hoặc bacteriophage  vector. cDNA sợi đôi trước đó được xử lý với DNA polymerase của bacteriophage T4 hoặc DNA polymerase I của E. coli ... chính. 1) Tách chiết DNA từ những sinh vật khác nhau; 2) Cắt và nối DNA ở những điểm đặc hiệu để tạo ra DNA tái tổ hợp (DNA mang các gen có nguồn gốc khác nhau), ví dụ: DNA plasmid có mang gen ... đoạn cDNA nhờ DNA ligase sẽ được cắt hạn chế để tạo ra đầu so le tương đồng với hai đầu của vector. Phản ứng gắn giữa đoạn cDNA có mang linker ở hai đầu với vector cũng được xúc tác nhờ DNA ligase....

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... dụng các polyacrylamide gel để phân ly các phân tử DNA có độ dài khác nhau, các kỹ thuật mới liên quan đến phát hiện huỳnh quang của các nucleotide được đánh dấu, phân tích trình tự DNA bằng ... Nấm men Saccharomyces cerevisiae. Là một vi sinh vật nhân thật được sử dụng nhiều trong công nghệ DNA tái tổ hợp. Genome của nấm men S. cerevisiae khoảng 1,35×10 7 base-pair nhiều hơn E. ... đoạn trình tự của phage. Phản ứng chuỗi polymerase (polymerase chain reaction, PCR). Phương pháp dùng trong phòng thí nghiệm để khuếch đại các đoạn DNA đặc biệt lên hàng triệu lần trong vòng...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... kiểu nửa bảo toàn của DNA mà thông tin di truyền được truyền chính xác từ thế hệ nọ sang thế hệ kia hầu như không thay đổi. Thư viện cDNA (cDNA library). Tập hợp các dòng DNA được tạo ra từ mRNA ... của khuôn mẫu DNA sợi đơn với primer (mồi) để tổng hợp nên một sợi DNA bổ sung bằng cách sử dụng các dNTP có trong môi trường để kéo dài primer nhờ sự xúc tác của enzyme Taq DNA polymerase (trong ... các exon. Sàng lọc (screening). Kỹ thuật nhận dạng một dòng DNA trong một thư viện hệ gen (genomic library) hoặc thư viện cDNA (cDNA library) bằng một phương pháp lai mẫu dò có đánh dấu [- 32 P]dCTP...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... đó DNA không bị cắt, những DNA của phage không có gắn gốc methyl sẽ bị cắt bởi RE. Trong kỹ thuật gen, enzyme methyl hóa được gọi là methylase enzyme. Methylase được dùng để bảo vệ đoạn DNA ... enzyme này cắt DNA ở các vị trí nhận biết riêng biệt bao gồm từ 4-6 cặp nucleotide có trình tự đối xứng đảo ngược nhau, các đoạn ngắn này gọi là palindrome (đoạn đối xứng: là đoạn DNA có hai sợi ... như EcoRI, nhiều enzyme hạn chế đã tạo ra các đoạn DNA với đầu lồi (protruding) 5’. Một số enzyme hạn chế khác (ví dụ: PstI) tạo ra các đoạn DNA có đầu lồi 5’. Trong khi đó, một số enzyme hạn...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... Các enzyme trùng hợp 1. DNA polymerase (DNA- dependent DNA polymerase) DNA polymerase được dùng để tổng hợp DNA trong cơ thể hoặc trong điều kiện in vitro. 1.1. DNA polymerase I của E. coli ... dideoxynucleotide. 1.2. Đoạn Klenow của DNA polymerase I của E. coli Enzyme này có tác dụng lấp đầy các đầu khuyết 3’ của DNA sợi đôi. Do DNA polymerase I có ba hoạt tính, nhưng hoạt tính ... DNA, nick là điểm đứt trên một sợi của DNA sợi đôi. Chức năng chính của enzyme là sửa sai dọc theo phân tử DNA. Nếu gặp chỗ sai sót, nó sẽ đi ngược lại để cắt bỏ sau đó mới tổng hợp DNA. DNA...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... của DNA khuôn mẫu và ion Mg 2+ , thì Tth pol lại xúc tác phản ứng khuếch đại DNA. Enzyme này cho phép khuếch đại khuôn mẫu là RNA thông qua sự hình thành cDNA. 2. RNA polymerase (DNA- dependent ... làm mẫu dò. 3. Bacteriophage T4 polynucleotide kinase (Bacteriophage T4-infected E. coli) sửa, vì thế cho tỷ lệ sao chép lỗi thấp. Hoặc Tth DNA polymerase (Tth pol), được tách chiết từ ... một phân tử DNA được tạo dòng để nghiên cứu về cấu trúc, điều hòa và các mối tương tác của phiên bản RNA. 3. Enzyme phiên mã ngược (reverse transcriptase, RNA-dependent DNA polymerase) Đây...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... Phân tích phức hợp protein :DNA (DNase footprinting). + Loại bỏ DNA trong các phân đoạn RNA hay protein. 2. Nuclease S1 (Aspergillus oryzae) Enzyme nuclease S1 cắt DNA sợi đơn hoặc RNA để tạo ... phân tử DNA dùng làm cơ chất cho đoạn Klenow của DNA polymerase I (để sản xuất mẫu dò đặc trưng cho từng sợi). + Tạo ra các đột biến khuyết đoạn (deletion) tại các trình tự tận cùng của DNA sợi ... mononucleotide từ đầu 3’ OH của DNA sợi đôi (DNA mạch thẳng hoặc mạch vòng chứa các điểm đứt hoặc lỗ hổng). Hoạt tính enzyme cho kết quả tạo thành các vùng sợi đơn dài trong DNA sợi đôi. Enzyme này...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... sợi đôi cDNA. V. Các protein liên kết DNA sợi đơn Các protein liên kết DNA sợi đơn (single stranded DNA- binding proteins, SSB) kết hợp với DNA sợi đơn nhưng không kết hợp với DNA sợi đôi. ... agarose polymer. Có khoảng 400 monomer trên một chuỗi polymer. Các phân tử nucleic acid có khối lượng và điện tích khác nhau được tách ra khi di chuyển từ cực âm sang cực dương của hệ điện ... điện di trong một điện trường có điện thế và cường độ thích hợp. Kỹ thuật này đơn giản và thực hiện nhanh. Hơn nữa, vị trí của DNA trong gel được xác định trực tiếp: các băng DNA trong gel được...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... và rửa cột vài lần bằng cách ly tâm nhanh. Thay tube vi ly tâm mới, cho đệm hòa tan DNA vào cột và ly tâm để dung ly (elution) DNA ra khỏi màng vào tube. Dung dịch DNA thu được có thể được tinh ... bằng glycerol và gel được điện di nhanh trở lại để chuyển DNA từ gel vào trong dung dịch glycerol (quá trình điện di có thể được kiểm soát bằng UV). Dung dịch glycerol -DNA sau đó được chiết bằng ... pháp ly tâm để cải thiện hiệu suất thu hồi DNA. 2.4.3. Điện di vào bẫy Một cái rãnh nhỏ được cắt trong agarose gel ngay phía trước của băng DNA quan tâm. Rãnh này được làm đầy bằng glycerol...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... chuỗi polyacrylamide được xác định bằng nồng độ acrylamide trong phản ứng polymer hóa (giữa 3,5% và 20%). Ngoài protein, polyacrylamide gel cũng được dùng để điện di DNA (kể cả RNA và DNA/ RNA). ... thước của đoạn DNA quan tâm. Hai loại polyacrylamide gel thường được sử dụng là: - Polyacrylamide gel không biến tính dùng để phân tách và tinh sạch các đoạn DNA sợi đôi. - Polyacrylamide gel ... 2.3), kích thước và điện tích của DNA. Bảng 2.3. Hiệu quả của sự phân tách DNA trong polyacrylamide gel không biến tính Hình 2.5. Sơ đồ minh họa các bước trong quá trình điện di agarose...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... DNA marker chuẩn đã biết số lượng. Các đoạn DNA phân lập sẽ cùng dịch chuyển với DNA marker trong quá trình điện di. 2. Điện di protein 2.1. Điện di SDS-PAGE bàn. Tháo tấm kính nhỏ ở mặt ... với ethanol 70% và hòa tan trở lại DNA trong đệm TE (pH 7,6) tới thể tích cuối cùng là 10 L. - Kiểm tra số lượng và chất lượng của đoạn DNA bằng điện di polyacrylamide gel. Lấy một thể tích ... lượng khoảng 50 ng DNA) trộn với 10 L TE (pH 7,6), bổ sung thêm 2 L gel-loading dye. Nạp mẫu và chạy điện di polyacrylamide gel ở nồng độ thích hợp bằng cách dùng các DNA marker chuẩn đã...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... 2.2. Điện di 2D-PAGE Ngoài điện di SDS, có thể điện di các protein tùy theo điểm đẳng điện (isoelectric point, IEP) của chúng. Phương pháp này được gọi là điện di tập trung đẳng điện (isoelectric ... hiện 2D-PAGE. Hai phương pháp điện di theo khối lượng phân tử và điểm đẳng điện có thể kết hợp với nhau tạo nên kỹ thuật điện di 2 chiều. Điện di protein trên polyacrylamide gel cho phép phân ... thiên liên tục (gradient pH), các protein sẽ phân ly đến vị trí tương thích với điểm đẳng điện của mình. 2.1.1. Phương thức Điện di trên polyacrylamide gel với sự có mặt của SDS (sodium dodecyl...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

... Chương 3 Khuếch đại in vitro DNA bằng phản ứng chuỗi polymerase (PCR) PCR (polymerase chain reaction) là một kỹ thuật được sử dụng phổ biến trong công nghệ sinh học hiện đại và đã đóng ... tắc của PCR Taq polymerase (xem chương 1) là một loại enzyme DNA polymerase chịu nhiệt (có ở vi khuẩn chịu nhiệt độ cao Thermus aquaticus) được dùng để tổng hợp các đoạn DNA mới trong môi trường ... được DNA. Hình 3.2. Sơ đồ phản ứng chuỗi polymerase PCR đảo ngược (inverse PCR), được dùng để khuếch đại các đoạn phân tử kế cận với đoạn có trình tự DNA đã biết trước, phân tử DNA...

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20

Ngày tải lên: 08/07/2014, 14:20