Xác định đột biến gen HBB gây bệnh β thalassemia bằng kỹ thuật giải trình tự gen sanger

•KT 4» HỄ? LỜI CÁM ƠN Với tằl ca tâm lõng trân trọng, em xin bây to lòng biểl ơn sàu sắc tới GS.TS 'l Thành Vản Giám đốc Trung tâm Nghiên cúu Gen- Protein Trường Đại học Y Hà Nội; PGS.TS.BS Trần vân Khánh Phó Giám dốc Trung tâm Nghiên cứu Gen- Protein Trường Dại học Y Hồ Nội Trương Bộ B^nh học phân tử Trường Dai llọc Y llà Nội dà tạo diều kiện cho cm thực khóa luận trung làm dồng thời lả người hướng dần tận tính chi bao giúp dừ em dưa nhùmg lời khuyên hửu ích lời góp ý lâm huyết dê em hồn thành lổt bải khóa ln Em xin bày to lòng biot ơn sâu sác tời TS Phạm Lê Anh Tuấn, TS Nguyên Hoàng Việt, nhùng người thầy tộn tinh chia se kỳ thuật kinh nghiệm hừu ích trinh thực thí nghiệm, cúng anh chị Trung tâm Nghiên cứu Gen - Protein Trưởng Đại học Y Hà NỘI vả ThS Lê Thị Phương Trường Dại học Y Hà NỘI dã tận lính giúp dờ cm dê em hoan chinh khóa luận Em xin chân thành cam ơn Ban Giám Hiệu Phòng Quân lý Dào tạo Dại Học Khoa Kỳ thuật Y học Trường Dại Học Y Hà Nội dà tạo diều kiện cho em làm khóa luân tốt nghiệp Lài cuối em xin gưi lởi cam cm tới gia dính, bạn bé quan tâm dộng viên giúp dỡ em trinh học tạp vả nghiên cứu Hả NỘI 14 tháng nôm 2021 Sinh viên Vương Thị Hái Yen •W.- A Di hợp tư pủ/p(nhự) THAL5 Exon C.79G>A Dị hợp tứ p°/ p (nhe) THALó Exon C.79G>A D| hợp tứ p°' p (nhẹ) THAL7 Exon C.79G>A D| họp lừ p°/ p (nhe) THAL8 Exon C.79G>A D| hợp tử p°/p(nhc) THAL9 Exon C.79G>A Dị hợp tử p°/p(nhẹ) THAL10 Exon c 126-129delTCTT D| hợp từ p°/p(nhọ) THALI1 Exon C.52A>T Dị hợp tử pộ/ p (nhẹ) THAL12 Exon C.52A>T Dị hợp lữ p°/ p (nhẹ) THAL13 -28 -28A>G Dị hợp từ p 4-/ p(nhẹ) c 126-129delTCTT D| hợp tử p°/ p (nhẹ) (promoter) THAL14 Exon pộ/ p (nhẹ) Dị hợp tử Exon C.52A>T THALI5 9 «r r * Kct qua giai trinh tự cho thầy cỏ 15/15 mầu cỏ biến dồi trẽn gcn HBB so với trinh (ự chuãn Genbank (NG_ 000007 vả NM 000518), dó ỡ •W.- -Tí ca: A ( xuất 1» 9/15 màu) vả C.52A>T (xuẩl hiộn 3/15 màu); exon phát duực I đột biền C.I26- l29dclTCTT (xuất 2/15 mầu); vùng promoter không mà hoa phát I đột biên -28A>G (xuất 1/15 mẫu) Tất ca mầu nghiên cứu mang dột biền di hợp tứ Dưới dày bicu dỗ the hiên ti lê xuẩt hiên cua dột biến phát 15 mẩu nghiên cứu: 647*4 j'9G>A jt:6-12MdTCH p2A>T -2S.VG * • aX a » X a a» a • a • X MM • a 9M • /ĩinh 3.5 Riêu dỏ ti Ifxuat dột bỉỉn ì5 màu nghỉèn cửu r.79G>A T (di hựp lu) •W.- G •2SV I Ị •AGGCCTGOGCATARAAQTCAGGGCA AGGGC tGGGCAT AAAAGTCAOGGCA Innh ty tail hifR dột kkn • 28'1*0, dị họ|A 11 lab lự binh Ihmmj Hình 3.9 Két ụ ỊỊÌãi trinh tự man THAL13 Nhận xét; Tín hiệu dinh len rị ráng, khơng bị nhiều Tại vị In' -28 vùng promoter không nằm vũng mi hóa gcn mầu có hai đinh tín hiệu trùng tương ứng với hai nuclcotid A G Như vậy.ơ mầu chứa đột biến -28 A>T (dị hợp tứ) •W.- AAG thay I nucleotide gày biêu Quá trinh cat intron exon xay bính thường, lạo nên chuồi p globin cỏ thay đôi acid amin thứ 26 lã acid glutamic thành lysin hình nên Hemoglobin E Kích hoạt vi trí cãt - nỗi phân lư tiền mRNA làm ngan chuôi - globin gây nên p Thalassemia (hình 14) •W.' -Tí Ca: T Đột biên C.52A>T la dột biền vô nghi'a (nonsense mutations) Sư thay thè nucleotide A thành nucleotide lại vi tri' C.52 exon cua gen HBB sỉ dản đen tạo thành mà két thúc U/\G làm cho việc dịch mâ kết thúc sỡm so với bính thướng tao sàn phẩm p-globin khơng vừng bền bị phá huy tế bào Dột biến gảy the bệnh nặng vả trung gian nhiều hon thê nhẹ Người mang dột biến dị hựp tư có Ilb.Aj giam cịn 94,5% HbF tăng nhẹ, cịn HbA; cỏ ty lẽ trung bính 5.2% Hb lồn phần •W.- G Dột bicn -28AXJ dột biển diem vùng khôi dộng (promoter k Dột biển thay the I nucleotit A thành c vị trí -28 hộp TATA cùa gcn HBB Gen dột biến điều khiển ARN 0-globin hoạt động thấp nhiều lần so VỜI mức bính thường dẫn đèn giam tơng hợp chuồi ịl-globin gày [V-Thalassemia •W.- -Tí ca: