Tình hình nghiên cứu và mục tiêu của đề tài trình bày về: Gen p53 là gen ức chế khối u có 11 exon, trong đó exon 2-11 mã hóa protein dài 393 acid amin. Các nghiên cứu trước đây cho rằng ña số đột biến gen p53 thường gặp trong vùng exon 5-8 từ acid amin thứ 126 đến 306 và có liên quan với tiên lượng xấu của bệnh ung thư hại - trực tràng ở giai đoạn sau. Nghiên cứu này được thực hiện nhằm xác định tỉ lệ và các kiểu đột biến gen p53 trong carcinôm tuyến đại trực tràng trên bệnh nhân Việt Nam.
Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 XÁC ĐỊNH ĐỘT BIẾN GEN P53 TRONG CARCINÔM TUYẾN ĐẠI TRỰC TRÀNG BẰNG KỸ THUẬT GIẢI TRÌNH TỰ CHUỖI DNA Hoàng Anh Vũ*, Phùng Ngọc Thùy Linh**, Đỗ Thị Thanh Thủy*, Hứa Thị Ngọc Hà* TÓM TẮT Mục tiêu: Gen p53 gen ức chế khối u có 11 exon, exon 2-11 mã hóa protein dài 393 acid amin Các nghiên cứu trước ñây cho ña số ñột biến gen p53 thường gặp vùng exon 5-8 từ acid amin thứ 126 đến 306 có liên quan với tiên lượng xấu bệnh ung thư ñại - trực tràng giai ñoạn sau Nghiên cứu ñược thực nhằm xác ñịnh tỉ lệ kiểu đột biến gen p53 carcinơm tuyến đại trực tràng bệnh nhân Việt Nam Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Genomic DNA ñược tách chiết từ 100 mẫu mơ vùi nến carcinơm đại trực tràng Exon – gen p53 ñược khuếch ñại PCR giải trình tự trực tiếp Kết quả: Đột biến gen p53 ung thư ñại trực tràng 50% Đột biến xảy cao exon (48%) exon (28%), hotspots R273 (14%), R175 (10%), R282 (8%), R158 (6%) G245 (6%) 82% ñột biến nhầm nghĩa, 12% ñột biến dịch khung 4% đột biến vơ nghĩa Đột biến xảy chủ yếu nucleotid loại G (48%) C (34%); ñột biến chuyển vị chiếm 70%, chủ yếu chuyển vị G → A (36%); ñột biến chuyển dạng chiếm 30%, chủ yếu chuyển dạng G → T (10%); 70% ñột biến xảy vùng trình tự bảo tồn gen Từ khóa: Đột biến gen p53, giải trình tự trực tiếp, ung thư đại trực tràng ABSTRACT DETERMINE P53 MUTATIONS IN CARCINOMA COLORECTAL CANCER BY USING DIRECTED SEQUENCING METHOD Hoang Anh Vu, Phung Ngoc Thuy Linh, Hua Thi Ngoc Ha * Y Hoc TP Ho Chi Minh – Vol.14 - Supplement of No – 2010: 689 - 696 Purpose: p53 gene is one of tumor suppressor genes having 11 exons, in which exon 2-11 encode 393 amino acid protein Previous study showed that most of p53 mutations occurred at 126 - 306 residue in exon 58 region and p53 mutation had been associated with poor prognosis of colorectal cancer in later stage This study was performed to determine frequency and types of p53 mutations in Vietnamese patients with carcinoma colorectal cancer Material and method: Genomic DNA was extracted from 100 paraffin-embedded colorectal carcinoma tissues Exons 5-8 of the p53 gene were amplified with PCR, and were sequenced by using directed sequencing method Results: p53 mutations were detected in 50% of colorectal carcinoma samples Most of the mutations occurred in exon (48%) and exon (28%), at hotspots including R273 (14%), R175 (10%), R282 (8%), R158 (6%) and G245 (6%) There were 82% missense mutations, 12% frameshift mutations and 4% nonsense mutations Mutations mainly occured at guanine (48%) and cytosine (34%), 70% mutations were transitions, in which 36% were G→A transitions; 30% were transversions, in which 10% were C→ T transversions 70% mutations appeared in consensus sequence of gene Key words: p53 mutation, direct sequencing, colorectal cancer ĐẶT VẤN ĐỀ Ung thư bệnh di truyền tế bào hàng loạt biến ñổi vật liệu di truyền tế bào gây ra, chủ yếu ñột biến gen Riêng bệnh ung thư đại - trực tràng, có khoảng 85% khối u đại - trực tràng (ĐTT) hình thành theo ñường ổn ñịnh nhiễm sắc thể (CIN) Theo đó, hàng loạt đột biến tích lũy diễn theo thứ tự, khởi ñầu biến ñổi xảy gen Apc, gen Kras, Dcc, Smad sau đột biến gen p53 biến ñổi nhiều gen khác Đặc biệt, xuất ñột biến Apc hay Kras giai ñoạn ñầu bệnh ung thư ñại - trực tràng, tế bào có biểu vượt mức protein p53(2,7) Nhờ đó, đột biến gen p53 xem dấu hiệu tiên lượng xấu bệnh ung thư ñại - trực tràng giai ñoạn sau(2) Gen p53 có 11 exon, 689 Chun đề Ung Bướu * ** Đại học Y dược TP HCM; Đại học Khoa học tự nhiên TP HCM Địa liên lạc: BS Phùng Ngọc Thùy Linh Email: pntlinh0207@gmail.com Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 exon 2-11 mã hóa protein dài 393 acid amin Các nghiên cứu trước ñây cho ña số ñột biến p53 xuất vùng gen bảo tồn cao qua trình tiến hóa có chức quan trọng, chủ yếu exon 5-8 từ acid amin thứ 126 - 306(8) Vì vậy, đa số nghiên cứu đột biến p53 thường giới hạn phạm vi vùng exon 5-8(3,11).Theo Thierry Soussi (2007), nước phát triển tỉ lệ ñột biến gen p53 ung thư ñại - trực tràng khoảng 45%, nước phát triển tỉ lệ thấp hơn(10), ñột biến exon 5-8 chiếm tỉ lệ ñến 87%(3) Ở Việt Nam, theo nghiên cứu Bệnh viện 108 Hoàng Kim Ngân Trịnh Tuấn Dũng năm 2007 tỉ lệ dương tính với kháng ngun protein p53 ung thư ñại - trực tràng 54,55%(4), số liệu ñột biến gen p53 ung thư ñại - trực tràng chưa ñược xem xét ñánh giá ñầy ñủ Trong nghiên cứu chúng tơi tiến hành phương pháp giải trình tự trực tiếp (direct sequencing) exon 5-8 ñoạn gen p53 với mục tiêu xác ñịnh tỉ lệ kiểu ñột biến gen p53 ung thư ñại - trực tràng ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu 100 mẫu mơ vùi nến carcinơm tuyến đại trực tràng chẩn đốn Bộ mơn Giải phẫu bệnh - Đại học Y Dược TP HCM từ tháng 10/2008 ñến 04/2009 Phương pháp Tách chiết genomic DNA từ mô carcinơm tuyến đại - trực tràng: Chúng tơi dùng kit DNeasy Mini Kit QIAgen theo hướng dẫn nhà sản xuất PCR khuyếch ñại ñoạn gen p53 chứa exon – Dùng cặp mồi p53g5F2 (5’GGTTGCAGGAGGTGCTTACA-3’) p53g.5-6R (5’-CACTGACAACCACCCTTAAC-3’), p53seq7F (5’-GGCCTCCCCTGCTTGCCACA-3’) p53g8R (5’-GTGCTAGGAAAGAGGCAAGG-3’) ñể khuyếch đại đoạn DNA chứa exon 5-6 có kích thước 541 bp ñoạn DNA chứa exon 7-8 có kích thước 754 bp từ DNA tách chiết Thành phần phản ứng gồm có PCR buffer, dNTP (250 µM cho loại), loại mồi xuôi ngược (0,5 µM cho loại), TaKaRa TaqTM HotStart Polymerase (1,25 unit) 20 ng genomic DNA Chu kỳ luân nhiệt ñược thực máy GeneAmp® PCR system 9700 (Applied Biosystems, Hoa Kỳ) bao gồm giai đoạn biến tính ban ñầu 980C phút, theo sau Chuyên ñề Ung Bướu 40 chu kỳ gồm biến tính 980C 10 giây, gắn mồi 600C 15 giây, tổng hợp chuỗi DNA 720C phút kết thúc giai ñoạn kéo dài sản phẩm 720C phút Kiểm tra kích thước sản phẩm PCR: Sản phẩm PCR ñược phát ñiện di thạch agarose 1,2% có nhuộm ethidium bromide quan sát soi gel Pringraph (Atto, Nhật Bản) với thang chuẩn Ready-LoadTM Kb Plus DNA Ladder Tinh sản phẩm PCR: Sử dụng QIAquick Gel Extraction kit theo hướng dẫn nhà sản xuất PCR trước giải trình tự kết tủa DNA ethanol Sản phẩm PCR ñã ñược tinh ñược thực phản ứng cycle sequencing với BigDye V3.1 từ Applied Biosystems, theo chiều xuôi ngược cho exon Sản phẩm sau kết tủa ethanol, hòa tan Hi-Di formamide, biến tính 950C phút trước làm lạnh đột ngột Trình tự DNA đọc máy ABI 3130 Genetic Analyzer, với POP-7 polymer capillary 50 cm (Applied Biosystems, Hoa Kỳ) Kết ñược phân tích phần mềm SeqScape, so với trình tự chuẩn NC_000017.10 GenBank Các liệu ñột biến ñược tra cứu theo liệu IARC, liệu SNP gen p53 ñược tra cứu hệ thống liệu NCBI KẾT QUẢ Các tỉ lệ ñột biến gen p53 Có 33 loại đột biến tổng số 50 ñột biến exon 5-8 gen p53 ñược tìm thấy 50 mẫu tổng số 100 mẫu ung thư ñại trực tràng ñã thu thập ñược, chiếm tỉ lệ 50% Số liệu ñột biến ñược liệt kê theo vị trí exon theo mẫu bệnh phẩm bảng Bảng Thống kê ñột biến exon – gen p53 KIỂU ĐỘT BIẾN MẪU BỆNH PHẨM Exon SỐ TỈ LỆ LƯỢNG % 23/50 46% Y126H 121F 2% L130F 020F 2% F134L 070F 2% C135F 015F 2% P152delC 023F 2% 690 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 R156C 082F 2% P250delC 113F 2% V157F 116F 2% I255F 014F 2% R158L 010F 2% 14/50 28% R158H 053F, 123F 4% A161T 106F, 112F 4% H168R 086F 2% V173G 090F 2% R174delG 011F 2% R175H 038F, 039F, 062F, 088F, 098F 10% C176Y 081F 2% H179Q 049F 2% R181C 118F 2% 3/50 6% Exon R213X 012F, 089F 4% Y220C 076F 2% 10/50 20% Exon G227 ins CTGA 119F 2% Y234H 073F 2% S241F 074F 2% G245S 004F, 066F, 115F 6% 025F 2% R248insC Exon R273C 042F, 056F 4% R273H 051F, 055F, 058F, 063F, 078F 10% C275F 111F 2% R282W 048F, 052F, 108F, 109F 8% E294X 092F 2% P300delC 087F 2% Tỉ lệ ñột biến gen theo vị trí exon: Trong tổng số 50 đột biến, ñột biến gen p53 xuất exon nhiều nhất, gồm 23 trường hợp, chiếm tỉ lệ 46% Tỉ lệ ñột biến gen exon 28% 20%, tương ứng với 14 10 đột biến Cuối cùng, có ñột biến exon 6, chiếm tỉ lệ 6% Tỉ lệ đột biến theo vị trí codon: Có 30 vị trí codon bị đột biến suốt exon đến Trong đó, vị trí acid amin đột biến thường gặp Arg273, Arg175, Arg282 với tỉ lệ 14%, 10% 8% Đột biến Gly245, Arg158 chiếm tỉ lệ 6%, vị trí Arg248 Ala161chỉ xuất với tỉ lệ 4% Ngồi ra, 23 vị trí đột biến khác xuất lần, chiếm tỉ lệ 2% Đáng ý codon Arg248 Arg273, codon đột biến khác Ở codon 248 bị ñột biến chèn thêm nucleotid Cytosine Arg bị ñột biến thành Tryptophan; codon 273 Arg bị đột biến thành Cys His R248W 044F 2% Các kiểu ñột biến gen p53 Bảng Phân loại kiểu đột biến theo vị trí exon gen p53 Các dạng biến ñổi Đột biến thay Số lượng Tỉ lệ % 21 13 44/50 88,0% Nhầm nghĩa 21 12 41/50 82,0% Vô nghĩa 3/50 6,0% 6/50 12,0% Mất 1 4/50 8,0% Thêm 0 2/50 4,0% Đột biến dịch khung Chuyên ñề Ung Bướu Exon Exon Exon Exon 691 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 Đột biến ñiểm 23 14 49/50 98,0% Tại A 1 3/50 6,0% Tại T 5/50 10,0% Tại G 14 24/50 48,0% Tại C 4 17/50 34,0% Khác 0 1/50 2,0% Chuyển vị 15 11 35/50 70,0% A→G 1 0 2/50 4,0% G→A 10 18/50 36,0% C→T 2 13/50 26,0% T→C 1 2/50 4,0% 9/50 18,0% A→T 0 1/50 2,0% T→A 0 1/50 2,0% G→T 0 5/50 10,0% T→G 0 2/50 4,0% 23 10 14 50/50 100,0% 8 27/50 54,0% 12 1 20/50 40,0% 3/50 6,0% 23 10 14 50/50 100,0% Trong 11 11 29/50 58,0% Ngoài 12 21/50 42,0% Vùng trình tự bị đột biến 23 10 14 50/50 100,0% Bảo tồn 14 12 35/50 70,0% II 0 4/50 8,0% III 10 0 10/50 20,0% IV 0 9/50 18,0% V 0 12 12/50 24,0% Không bảo tồn 15/50 30,0% Chuyển dạng Vị trí nucleotid đột biến codon Vùng CpG Chuyên ñề Ung Bướu 692 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 Các loại ñột biến gen p53 chủ yếu dạng ñột biến thay chiếm tỉ lệ 88%, bao gồm ñột biến nhầm nghĩa đột biến vơ nghĩa chiếm tỉ lệ 82% 6% Ngồi ra, đột biến dịch khung chiếm tỉ lệ 12%, đột biến thêm chiếm tỉ lệ 8% 4% Các nucleotid bị đột biến có đến 98% ñột biến ñiểm, ñột biến nucleotid loại G chiếm tỉ lệ 48% cao nhất, đột biến điểm C, T, A lại 34%, 10% 6% Chỉ có đột biến chèn nucleotid CTGA codon 227 khơng xem đột biến ñiểm Trong 44 ñột biến thay thế, có ñến 35 ñột biến ñột biến chuyển vị, chiếm tỉ lệ 70% tổng số ñột biến, ñột biến ñột biến chuyển dạng, chiếm tỉ lệ 18% Trong ñột biến chuyển vị, chủ yếu dạng G A với tỉ lệ 36%, dạng chuyển vị khác C T, T C A G chiếm tỉ lệ 26%, 4% 4% Trong ñột biến chuyển dạng, ñột biến G T chiếm tỉ lệ cao 10%, đột biến lại T G, A T, T A chiếm tỉ lệ 4%, 2% 2% Các đột biến dịch khung khơng xem ñột biến chuyển vị chuyển dạng, chiếm tỉ lệ 12% Vị trí nucleotid bị đột biến: Theo bảng cho thấy tỉ lệ nucleotid bị ñột biến vị trí thứ thứ codon 54% 40%, có 6% đột biến xảy nucleotid thứ Vùng trình tự bị ñột biến: Các ñột biến gen p53 xuất nhiều vùng CpG xuất vùng CpG, với tỉ lệ 58% so với 42% Mặt khác, đa số đột biến nằm vùng trình tự bảo tồn, chiếm tỉ lệ 70%, có 30% đột biến xuất vùng trình tự khơng bảo tồn Các ñột biến xảy nhiều vùng bảo tồn V với tỉ lệ 24%, đột biến vùng trình tự bảo tồn III, IV, II 20%, 18% 8% BÀN LUẬN Sự biến ñổi trình tự gen p53 Tỉ lệ đột biến gen p53: Đột biến gen p53 chiếm tỉ lệ 50% tổng số 100 mẫu giải trình tự gen, bao gồm 33 loại đột biến khác Số liệu khơng khác biệt với nghiên cứu Greenblatt c.s năm 1994, gần giống nghiên cứu khác ñược liệt kê bảng Bảng Tỉ lệ ñột biến gen p53 nghiên cứu khác Năm Tổng mẫu Số lượng ñột biến Tỉ lệ ñột biến Nghiên cứu 2010 100 50 50% Greenblatt c.s(3) 1994 960 480 50% 2005 3474 1449 42% 2009 13193 5708 43,3% Nhóm nghiên cứu Russo c.s (9) IARC Vị trí exon bị ñột biến: Trong nghiên cứu này, tỉ lệ ñột biến gen p53 exon 5, 6, 7, 46%, 6%, 20% 28% Đột biến p53 exon xảy với tỉ lệ cao nhất, cao hẳn so với ñột biến xảy exon exon Ngược lại, tỉ lệ ñột biến exon 20% sau tỉ lệ ñột biến exon 28%, exon lại vị trí xảy nhiều ñột biến theo nghiên cứu Tỉ lệ ñột biến exon nhỏ nhất, phù hợp với nghiên cứu Bảng Tỉ lệ loại đột biến gen p53 theo vị trí exon - Tổng số loại đột Nhóm nghiên cứu Exon Exon Exon Exon biến Nghiên cứu 33 17 51,5% 6% 24,2% 18,2% Rei Kikuchi-Yanosita c,s, 24 37,5% 16,6% 29,2% 16,6% Chuyên ñề Ung Bướu 693 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 Sự khác biệt kết (1) Phương pháp nhận biết ñột biến Trong nghiên cứu Rei Kikuchi-Yanosita C.S cho rằng, phương pháp PRC-SSCP có độ nhạy khơng cao Vì vậy, khơng loại trừ trường hợp đột biến khác xảy exon (và ñột biến exon khác) ñã bị bỏ qua (2) Tác nhân gây ñột biến khác nhau, dẫn ñến tích lũy ñột biến gen p53 nhóm mẫu khác (3) Giai ñoạn ung thư khác mẫu thu thập Vị trí codon bị đột biến: Theo Cho cộng năm 1994, vị trí hotspots Arg248 , Arg273 , Arg175 , Gly245 , Arg249 Arg282 tất dạng ung thư(1) Ở nghiên cứu này, vị trí acid amin ñột biến thường gặp Arg273, Arg175, Arg282, Gly245 Arg158 với tỉ lệ 14%, 10%, 8%, 6% 6%, vị trí Arg248 xuất với tỉ lệ 4%, tỉ lệ ñột biến Ala161, không xuất ñột biến Arg249 Những khác biệt giải thích (1) tác nhân gây đột biến khác (2) mơi trường chọn lọc đột biến khác nhau, (3) độ bền học vị trí Arg248 Arg249 gen p53 khác cộng ñồng nghiên cứu Các ñột biến R249S xuất nhiều vùng Đông Á vùng Hạ Sahara, Châu Mỹ có liên quan với hàm lượng aflatoxin-B1 cao có nguồn thức ăn thường ngày vùng này(5) Bảng So sánh tỉ lệ ñột biến hotspots nghiên cứu khác Hotspots Nghiên cứu Rei Nghiên cứu Levine Nghiên cứu này, 2010 Kikuchi-Yanosita cs c,s,, 1994(1) (6) 1992 Arg175 5,3% 6,1% 10% Gly245 12,5% 6,0% 6% Arg248 14,3% 9,8% 4% Arg249 1,7% 5,6% 0% Arg273 8,9% 8,8% 14% Arg282 8,9% 4,0% 8% Số lượng ñột biến mẫu bệnh phẩm: Mỗi bệnh nhân ung thư ñại - trực tràng nghiên cứu mang ñột biến exon, chiếm tỉ lệ tuyệt ñối 100%, phù hợp với số liệu thống kê nghiên cứu Russo C.S(9) Các kiểu đột biến trình tự gen p53 Các loại ñột biến gen p53 Theo liệu IARC(11) tháng 11 năm 2009, tỉ lệ loại ñột biến nhầm nghĩa, vô nghĩa, dịch khung 73,6%, 7,67% 8,85%, phù hợp với tỉ lệ loại ñột biến nghiên cứu 82%, 6% 12% Tỉ lệ ñột biến nhầm nghĩa lúc cao nhiều so với loại đột biến lại trình tự acid amin sản phẩm protein ñột biến nhầm nghĩa sai biệt acid amin so với protein bình thường, nên hội chọn lọc dương tính cao Các nucleotid bị ñột biến: Tỉ lệ ñột biến ñiểm xảy exon 5-8 gen p53 chiếm ñến 98%, chủ yếu biến ñổi nucleotid loại G C chiếm tỉ lệ 48% 34%, cao hẳn so với biến ñổi A T Tỉ lệ ñột biến xảy G C cao giải thích chế khử amin hóa G C methyl hóa DNA Tỉ lệ đột biến xảy vùng CpG chiếm tỉ lệ 58%, tương ñồng với nghiên cứu trước Vị trí nucleotid bị ñột biến: Tỉ lệ nucleotid bị ñột biến vị trí thứ thứ codon 54% 40%, có 6% đột biến xảy nucleotid thứ codon Khi ñột biến xảy Chuyên ñề Ung Bướu 694 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 vị trí thứ hay thứ mã di truyền, nhiều khả làm thay ñổi acid amin protein Vùng trình tự bị đột biến: Ở nghiên cứu này, tỉ lệ ñột biến xảy vùng trình tự bảo tồn 70%, phù hợp với nghiên cứu trước ñây, nhiên, mối liên hệ tỉ lệ ñột biến vùng bảo tồn tiên lượng sống bệnh nhân bàn luận thêm Sự biến ñổi protein p53 Acid amin bị biến ñổi: Acid amin Arg bị ñột biến nhiều nhất, chiếm tỉ lệ 52% tổng số Có thể Arg loại acid amin mã hóa nucleotide G loại nucleotid dễ đột biến có trình tự CG nằm vị trí CpG Nhóm acid amin bị đột biến: Về cấu trúc hóa học, loại acid amin chia thành nhóm: (1) gốc R không phân cực, kị nước; (2) gốc R phân cực, ưa nước, khơng tích điện, ưa nước; (3) tích ñiện âm; (4) tích ñiện dương Ở nghiên cứu này, thay đổi acid amin nhóm, khác nhóm, acid amin 44%, 38% 18%, phù hợp với thống kê Russo c.s., 2005(9) 40%, 42% 18% Những biến ñổi acid amin nhóm ảnh hưởng đến protein biến ñổi acid amin thay ñổi khác nhóm acid amin Các biến đổi làm acid amin gồm đột biến vơ nghĩa, đột biến dịch khung, làm tồn acid amin từ vị trí đột biến sau, biểu thành protein ngắn không mang trình tự tín hiệu đầu Carbon làm protein chức di chuyển vào nhân Ở khối u trực tràng, gia tăng lượng acid amin bị có liên quan với khả sống sót thấp(9) Chức protein ñột biến 97% loại protein p53 tất dạng ñột biến ñều có biểu làm giảm chức gen khảo sát, loại trừ dạng ñột biến chưa ñược nghiên cứu chức ñột biến R156C Trong đó, có 12,2% loại đột biến protein p53 làm tăng chức gen khảo sát Ở nghiên cứu này, có dạng protein p53 đột biến vừa làm giảm, vừa làm tăng chức tương tác protein với gen Có dạng đột biến V157F, V173G, R175H R248W vừa làm giảm chức số gen ñồng thời lại làm tăng chức với số gen khác Ngồi ra, có dạng đột biến G245S, R273C R273H khơng làm giảm chức protein điều hòa xi dòng mà làm tăng chức protein đột biến điều hòa ngược dòng gen Hơn nữa, có 12 dạng protein đột biến ức chế protein bình thường, chiếm tỉ lệ 40% tổng số 50 ñột biến, C135F, R158L, H168R, C176Y, H179Q, R181C, Y220C, S241F, R248W, R273C, R273H, R282W Cơ chế trình điều hòa trội âm tính giải thích dựa vào hình thành phức hợp tetramer dị hợp hỗn loạn tetramer bình thường tetramer ñột biến Mức ñộ hỗn loạn phức hợp phụ thuộc vào số lượng tetramers có phức hợp (từ – tối ña 16 tetramers) thành phần tetramer (tetramer bình thường hay đột biến) tham gia phức hợp Trong phức hợp tetramer này, lõi tetramer bình thường có khả gắn kết với DNA, nhiên, lượng gắn kết protein – DNA bị giảm ñáng kể xuất vùng protein đột biến khơng liên kết hay liên kết yếu với DNA(5) KẾT LUẬN Tỉ lệ ñột biến: Đột biến gen p53 ung thư ñại trực tràng 50% Đột biến xảy cao exon (48%) exon (28%), hotspots R273 (14%), R175 (10%), R282 (8%), R158 (6%) G245 (6%) Các kiểu ñột biến: 82% ñột biến nhầm nghĩa, 12% ñột biến dịch khung 4% ñột biến vô nghĩa Đột biến xảy chủ yếu nucleotid loại G (48%) C (34%); ñột biến chuyển vị chiếm 70%, chủ yếu chuyển vị G→A (36%) C→T (26%); ñột biến chuyển dạng chiếm 30%, chủ yếu chuyển dạng G T (10%); 70% ñột biến xảy vùng trình tự bảo tồn gen.g Chuyên ñề Ung Bướu 695 Nghiên cứu Y học Y Học TP Hồ Chí Minh * Tập 14 * Phụ Số * 2010 TÀI LIỆU THAM KHẢO Cho Y, Gorina S, Jeffrey PD and Pavletich NP, (1994), “Crystal structure of a p53 tumor suppressor-DNA complex: understanding tumorigenic mutations”, Science 265, pp 346-355 Fearon ER, Vogelstein B (1990), “A genetic model for colorectal tumorigenesis”, Cell 61(5), pp 759-67 Greenblatt MS, Bennett WP, Hollstein M, Harris MM, (1994), "Mutations in the p53 tumor suppressor gene: Clues to cancer etiology and molecular pathogenesis," Cancer Res., 54, pp 4855-78 Hoàng Kim Ngân Trịnh Tuấn Dũng (2007), “Lâm sàng, hình thái, mơ bệnh học kháng ngun biểu gen p53, K1167 HER-2/NEU bệnh nhân ung thư ñại - trực tràng”, Hội nghị Khoa học toàn quốc lần thứ 13 – 2007 Joerger AC and Fersht AR, (2007), “ Structure-function-rescue: the diverse nature of common p53 cancer mutants” , Oncogen 26, pp:2226-2242 Kikuchi-Yanoshita R, Konishi M, Ito S et al., (1992), “Genetic Changes of Both p53 Alleles Associated with the Conversion from Colorectal Adenoma to Early Carcinôm in Familial Adenomatous Polyposis and Non-Familial Adenomatous Polyposis Patients”, Cancer Res 52, pp 3965-3971 Kinzler KW, Nilbert MC, Su LK et al., (1991), “Identification of FAP locus genes from chromosome 5q21”, Science, Vol 253, Issue 5020, pp 661-665 Nigro JM, Baker SJ, Preisinger AC et al., (1989) “Mutations in the p53 gene occur in diverse human tumour types”, Nature 342, 705-708 Russo A, Bazan V, Iacopetta B et al, “The TP53 Colorectal Cancer International Collaborative Study on the prognostic and predictive significance of p53 mutation: influence of tumor site, type of mutation, and adjuvant treatment.”, J Clin Oncol 2005; 23: 7518–7528 10 http://p53.free 11 http://www-p53.iarc.fr/ Chuyên ñề Ung Bướu 696 ... II 20%, 18% 8% BÀN LUẬN Sự biến đổi trình tự gen p53 Tỉ lệ ñột biến gen p53: Đột biến gen p53 chiếm tỉ lệ 50% tổng số 100 mẫu giải trình tự gen, bao gồm 33 loại ñột biến khác Số liệu không khác... gen p53 với mục tiêu xác ñịnh tỉ lệ kiểu ñột biến gen p53 ung thư ñại - trực tràng ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu 100 mẫu mô vùi nến carcinơm tuyến đại trực tràng chẩn đốn Bộ môn Giải. .. ña số ñột biến nằm vùng trình tự bảo tồn, chiếm tỉ lệ 70%, có 30% đột biến xuất vùng trình tự khơng bảo tồn Các đột biến xảy nhiều vùng bảo tồn V với tỉ lệ 24%, đột biến vùng trình tự bảo tồn