Ứng dụng kỹ thuật giải trình tự gen để phát hiện đột biến vùng promoter gen TERT trên bệnh nhân ung thư biểu mô tế bào gan

BỌ GIÁO Dực VÀ DÀO TẠO BỘ Y TÉ TRƯỜNG DẠI HỌC Y HẢ NỘI _ *■** NGUYÊN TH| ANH ỦNG DỤNG KỶ THUẬT GIẢI TRINH TựGEN ĐÉ PHÁT HIỆN ĐỘT BI ÉN vt NG PROMOTER GEN TERT TRÊN BỆNH NHÂN UNG THƯ BIÊU MÔ TÉ BÀO GAN Ngành đảư tạo: Cứ nhản Xét nghiêm y học Mâ ngành : 52720332 KHĨA LUẬN TƠT NGHIỆP CL NHÂN V KHOA KHĨA 2017 -2021 Ngi hướng dàn khoa học: TS NGUY ẺN THU THÍT Hà Nội-2021 «s> ■> LỜI CÁ M ƠN Lời đàu tiên, em xin bay to lóng bicl ưn sẳu sẳc tời Ban Giam hiệu trường Đụi học V Ha Nội phông Quân lý Vã Dào lao Thầy Cõ cua càc mòn đà dạy dỏ chí bao em suổt nảm học t$p tu dường mái trường Đại học Y Hà Nội Trong SUẲI qua trình học tập vồ thực lùện khóa ln Trung tâm Nghiên cứu Gen - Protein, em dã lạo diài Idộn thuận lọi nhái nhân sụ chi bao tàti tình cua cãc ThÀy Co cung cac anh chi Với trân trọng biết ơn cm xin gứi lôi cam ơn sảu sác tỏi TS Nguyên Thu Thúy lả Iigười tnrc úểp hường dẩn em suốt trinh thưc hiên khóa luận, người tân tmh giúp dờ chia se cho em nhùng lãnh nghiệm hừu rch va gõp y tâm huyct giúp em hoan thành tót khóa luận cua minh Lời cuối củng, em xin gui lời câm ợn tói gia dính, bựn bẽ va người thân dỉì ln dọng viên khích lệ vã tụo chỗ dtra vừng cho cm tTOtig SI q trinh học lộp vã hồn khóa luộn nảy /ỈỜ.Vọí ĩhổngos nắm 202ĩ Smh vicn Ngun Th Anh -w ã* CN ôG CNG HềA X HI CHỦ NGHÍA VlậT NAM Dộc lập - Tự - Hạnl) phúc _**-**•*• _ LỞI CAM ĐOAN Kính gùi: Phịng Qn lý Dào lạn Dili hục - Tnrừng Dại học Y IIÙ Nội Hội dồng châm khóa luận lỗi nghiệp TỎI lủ Nguyên Thi Anil, sinh viên khoa Kỳ thuái y học Truông Đai học Y Hủ Nội xin cam đoan: Đây la khóa luận lôi ỉrục licp thực Inning dẫn cua TS Nguyên Thu Thúy Còng trinh nghiên cứu không irủng lặp với bất ki nghiên cửu nàơ khác đà bổ lai Việt Nam ỉĩừ Nội ngày 20 iháỉig Oỉ nâm 2021 Ngirịí viết khóa luận Ngun ThỊ Anh «“ *4: DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TÁT HCC Hepatocell Carcinoma TERT Telomeĩase reverse Transcriptase HBV Hepatitis B viius HCV Hepatitis c ŨIUS VEGF Vascular endothelial growth factor DXA Dioxyribonucleotide acid mRXA Messenger ribonucleic acid TF Transcription Factor AFB1 Aflatoxin B1 CT Computed Tomography MRI Magnetic Resonance Imaging ALPPS Associating liver partition and portal vàn ligation for staged hepatectomy OD Optical Density PCR Polymerase Chain Reaction dNTP Deoxynbonucleotide triphosphate ddNTP Di deoxy ribonucleotide triphosphate bp Base pair kb Kilo base TWM*M«K> *4: XI VC I.ục nẠT X ÁN DÊ CHƯƠNG TONG QUAN - _ 1.1 Tỏng quan ung thư bleu mo té bào gan • •• 1.1.1 Sơ lược ung thir biêu mố tế bao gan 1.1.2 Nguyên nhãn gãy bỹnh í 1.3 Triệu chứng l«im sáng I.IMMI lioltlll IMIIMI I lt lilMMt.X I.IMI ó • •• 1.1.4 Chán đoản ung thư biêu mó 1C bao gan - •• 1.1.5 Dicu u I ung thư biêu mò te báo gan •••••• / 1.2 Tỏng quan gen TERT 1.2.1 vị tri cấu trúc gen 1.2.2 Chức nàng gcn 10 1.3 Mồi quan hộ giũa gen T1-RT ung thư biêu mỏ té bão gan li 1.4 Kỹ thuật giai trinh tự gen — 13 1.4.1 Nguyên lý 1.4.2 Ưng dụng• nmmit IIIH umHHHfut uônmf !I1 ã ManiMMi 4* ãã oaiiiax ta 41 •••» 13 •••• 14 • •• CHƯƠNG HÓI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHẤP NGIIIÊN cửu 15 2.1 Thi»i giaxi - Địa điẽm nghiên cứu 15 2.2 Đối tượng nghiên cứu 15 2.3 Phương phảp nghiên cứu 15 2.4 Quỵ trinh nghiên cứu 15 2.5 Dung cụ trang thiết bi hoa chất lỗ 2.5.1 Dung cu tiang thiết bĩ •• 16 ■> 17 2.6.2 Kỳ thuật táchDNA tù màu mò bộnh phẩm - 17 2.6.3 Phương pháp đo quang._ !S 2.Ổ.4 Phương pháp điện (tì 19 2.6.5 Kỳ thuật PCR 20 2.6.6 Kỳ thuật Sequencing CHƯƠNG KÉT ỌVÃ NGHÉN cứt' 3.1 Dác điềm chung cua đối tượng nghiên cửu - 3.2 Kot qua tách chiẽt DNA _ 22 3.3 Kct qua khuếch dại đoạn gen vùng promoter gen TERT 25 3.4 Kẽt qua xảc định dột biến vũng promoter gen TERT- 27 CHƯƠNG BÀN LUẬN _ 31 4.1 Kct qua tách chiết DNA 4.2 Kct khuếch dụi đoạn gen vùng promoter gen TERT 4.3 Kct qua xác đinh đột bicn 'ung promoter gen TERT KÉT LUẬN .37 TÀI LIỆU THAM KHÁO TW«s> «> *4: DANH MỤC BÁNG Bang 2.1 Thành phần phan ứng PCR Bang 22 Thành phần phan ưng PCR Sequencing 21 Bang 3.1 Đặc diàn chung cua đói lưựng nghiên CUU— 22 Bang 32 Nồng độ vá độ tinh cua mầu DNA đuọc tach chict 24 Bang 33 Kct qua xrtc định đột biển vung promoter gen TERT 29 Bang 3.4 Tt lộ đột biền vùng promoter gen TERT _ 30 -w ã* CN ôG DA.NH MC Hl\H Hỡnh 1.1 Hĩnh anh vi thê te báo gan mróng hợp ung thu biêu mõ té bào gan Hĩnh 12 Vị ưí cùa gen TERT NST người Hĩnh 13 Vj tri exon intron trẽn trinh tự cDNA cua gen TERT 10 Hình 1.4 Vĩ tri đột biến -124OT -14ỔC>T trài promoter gen TERT 12 Hĩnh 3.1 Kct qua mịt độ quang học trẽn máy Nano Drop 2000c cua màu DNA cùa bênh nhãn sỗ UTG 29 23 Hĩnh 32 Kết điên di DNA tông sổ bẽn gel agarose O.$H 25 Hình 33 Kết qua diện di san phâm PCR khuếch dụi vùng promoter gen Hmh 3.4 Kẽt qua giai trinh tư gen c ua màu bênh lúlãn LTG 27 Hĩnh 3-5 Kct qua giai binh tự gen cua mâu bộnh nhãn ƯTG 23 Hĩnh 3j6 Kct quà giai ninh tựgen cua mẫu bệnh nhàn LTG 21 .28 DẠT VÁN DÊ Ngày nay, ung thu cho lã nguyên nhản gây từ vong hảng đầu toàn the gun sỗ ca tnảc ung thư vả 90 ca tư vong ung thư du kiến SC lủng nhanh dán sỏ tiếp tục lãng lẽn già di vá ap dung cãc hanh vi lối sóng lãm lãng nguy ung Ihư Trong loại ung (hu nay, ung thư biêu mô te bão gan (Hepatocellular carcinoma - HCC) lã bênh ung thư íãt phị biền Theo Glỡbôcan 2020 số ca mÃc ung thư gan lã 905677 ca chiếm 4.7% số ca mác bệnh ung thư vã sổ ca tư vong ung thư gan 830180 ca chiếm 8.3% số ca tư vong ung thư thẻ giới Tý lê tnấc ung thư biêu tnõ tế bào gan thay đôi theo kliu vực địa lý chiêm ty lộ cao ứ khu vực phát tricn Sự hình thảnh khoi u cua ung thư biêu mõ tế bảo gan la mót trinh phức tap liên quan dền nhiồu yếu tồ nguy như: nhiễm virus viêm gan B viêm gan c Aflatoxin Bl dột biển gen bộnh gan nhiêm mờ khống rượu Đen chế gây ung thư biểu mó te bào gan vần chưa duực làm sâng tỏJ chinh vi vice xác đinh nguồn gốc nén pliaĩ cua bênh hét sức quan trụng Chân đoán sởm ung thư bleu mỏ te báo gan côn gãp nhiẻư khó khãn tricu chưng làm sáng thương xuài muộn VI thê việc xác dinh dược yểu tố nguy từ bên thê lã cầp thiết Gen Telomerase reverse transcriptase (TERT) mà hóa cho tiểu đơn vị xúc tác cua enzyme phiên mà ngược telomerase Sự bièu cua gen TERT vá hoạt hóa cua enzym telomerase xay cảc tể bão mẩm vả ung thư4, ó tế bảo ung thư sư bióu hiựn q múc cua TERT lam kích hoạt telomerase xay rẩt manh mè dàn đen sư tảng sinh không giới hạn cua tế bào ung thu tứ đõ tạo điều kiên thuận lợi cho xâm lẩn vã di cán cua khỏi u Dột biến vung promoter gen TERT dược cho có ãnh hường dến tnnh phát sinh ung thư biêu mõ ì té bảo gan cảc loại ung thư khác việc xác đinh đột bỉển vùng promoter gen TERT lả cần ilủci vẳ có ỷ nghía chân đốn phát sớm ung thư đề có phương pháp điều tri hiệu qua cho bộnh nlân Do đè tải nghiên cứu “t ng dụng kỹ thuật giai trinh tự gen di' phát dột biền vung promoter gen ĨEET trêu bệnh nhãn ung thư biêu mô tể bao gan ” thực với mục tiêu: Xác định đột bicn Ming promoter gen TERT nén bệnh nhàn ung ihư biêu mô te bõo gan -w ã* CN ôG 29 nucleotide1 c vả T, vị tri’ -124 chi có dinh tín hiệu lương ứng với nucleotide c (Hình 3.6) Như mâu UTG có dội biến -146C>T vá không cõ đột biền -124C>T Rang s.s Kt-t quu xấc định tiột biến vùng promoter gen TERT Mà bệnh Vị trí đột biến nhân Dạng Mã bệnh đột nhan Vị trí đột biến Dạng đột biền biền Khung phát ỉu én D| hợp ƯTG 16 Không phát D| hựp Dị bợp ƯTG 17 -124OT Dị hợp ƯTG3 Khỏng phát Dị hợp ƯTG 18 Không phảt Dị hợp ƯTG4 Không phát Di hợp UTG 19 Không phái hiộn D| hợp VTG5 Không phát Di hợp UTG20 Không pliãl hiộn Dị hợp Di hợp LTG21 -146OT Di hợp ƯTO7 Khung páiai D| hợp UTO22 Khung phai Di hợp ƯTG8 Không phát hiên Dĩ hợp UTG23 Không phát Di hợp Di hợp UTO24 Không phái Dị hợp Khong phát Di hợp LTG25 Không phái Dihợp Di hợp LTG26 Không phải Dị hợp ưro 12 Khỏng phát Dị hựp ƯTG27 -124OT Dị hợp VTG 13 Không plxát luẽn Di bợp LTG28 Không phải Di hợp LTG 14 Không phát Dị hợp UTG29 Không phát Dị hợp ƯTG 15 Không phát DỊ hợp ƯTG30 Không phát hiộn Dị hụp ƯTO1 VTO2 ƯTG6 ƯTO9 VTG 10 ƯTG 11 -124OT -124OT -124OT -124OT TWM*M«K> ■> *4: 30 Kết qua xác định đột biổn vùng promoter cua 30 mâu nghiên cứu tống hợp bâng 3.3 Dựa tiên kef qua lý lệ đột biến dược xảc định bang 3.4 Báng 3.4 Ti iệ dột biền vùng promoter gen TERT STT Vị trí dột biên Số lượng (máu) Ti lệ đột biến (%) -124 C >T 20 •146 C>T 3.33 -124 C>T V3-146OT 0 Không pỉiãt hiên dôt bi én 23 76,67 Nhận Xfi: Kct qua bang 3.4 cho thầy, ti ]< dột biền vũng promoter gen TERT cùa cic bvnh nhàn HCC lả 23.33% va ti lệ không dột biển La 76.67% Trong số mảu co đột bicn 85.71% la đột biến vị trí -I24OT vá đột biền vị trí 146C>T chi lả 14.29% Nghiên cini khơng tim thầy máu nao có đột biên dồng thịi ca vị tri TWM*M«K> «“ *4: 31 ( III ONG BÀN LUẬN 4.1 K« qua tách chiết DNA Trong nỉm gàn linh vực sinh học phân tư ngày pbãt triển vả dược ứng dụng nhiêu chán doán vả diều tri bênh Trong nghiên cửu náy chủng tói sử dụng kỳ thuật kinh diên cùa sinh học phân tử dỏ lách chici DNA khuếch dại gcn giãi trinh lự gcn bring hộ thống lự dộng dê có thê xác đinh đột biền lai súng promoter gen Tỉ-Rì' mảu ung thư biêu mỏ tẻ bảo gan Tảch chict DNA bước vai trị quan trọng nghiên cửu vi chi mầu DNA lách chiết dưực đạt chất lượng thí có thê thực quy trinh dó PCR vả giai trinh tụ gen Các mâu mò sau dược thu thập sè dược tách DNA hang kil QlAampt DMA cua hàng QL4GEN Kct qua tach chiết cho thầy DNA dụt cbầt luựng tót dơ tinh such dam bao lam khn cho phan úng khuếch dựi gen DNA có thê dược tách chiét tù nhiều loai bệnh phàm nhu: mẳu mâu mill mô, Tại nghiên cữu nãy, chúng lôi tách chiết DNA tứ màu mỏ đúc parafin So với mầu máu ngoại vi thí mầu mị nâv chứa nhiều tạp chất vã yếu lố anh hương dên qua trinh lách chief DNA hem VI có mậi cùa panfin hay chất khác trinh đúc mô bênh Tuy nhiên, mầu mơ hồn lồn dam bao chãi lưựng dê tách DNA Hon the việc báo quan mỉu mỏ có phân đơn gian, dó đảng thời gian bao quan dâi Dê dam bao vice tách chiết DMA khơng bi anh hương bới parìn kit tách chiết có bước khư parafin bảng cách sư dụng xylcn Tuy nhiên, không loại trừ kha nâng xylen cỏ thể anh hương hoic ức chề quâ trình PCR hoảc giái trinh tự gen nên xylcn dược loại bo bang cồn 100® Quy trinh tách chiết dược thực 32 hiội theo khuyến nghị nhả sán XUỈ1 tói tru cua phòng xét nghiệm dè thu sau phẩm DNA dựt liêu chuẩn nồng dụ độ linh Sau thu l>NA tẩn liền hành kiềm tra chái lưụng dô linh cua DNA vừa tách chiết Các phương pháp có the sư dụng dê kiêm tra dó mật độ quang học điện di DNA lông sơ sư dụng mồi nội chuẩn Trong nghiên cứu này, chúng lõi sư dụng phương pháp đo mật độ quang học hãng may Nano Drop 2ÍMM)e lọi bước sóng 260nm vả 280nm đe kiêm tra độ linh sụch nồng độ cua mâu DNA Phương phap có ưu diem lả nhanh gon lien lợi de thực liicn lại cho két qua dinh lượng ĐNA inà không sư dụng hóa chài dộc hại ví nhu ethidium bioniide phương pháp diện di Ngồi ra, chủng tơi cỏn lien hành kiêm tra mỉu DNA tách chiết hẩng phương pháp diện di DNA tơng só Phương pháp mang ƯU diêm đỏ có the bièt kích thước tương dõi cứa DNA, kicm tra DNA có bị dirt gày hay không Tuy nhiên diện di sỗ can nhuộm ethidium bromide chai nảy chát độc gây ung thư trinh chụp bân gcl bâng lia uv gảy hai cho da vá Bơi quang diẻn di mang nhùng ưu nhược diêm bu trữ chơ nên chung tiến hành thực Cíi hai phương pháp dè kiềm tra chat lượng DNA Màu DNA dạt tiêu chuần có độ linh ti lệ A.'k/Ajso phải nằm khoang 1.8 - có nồng độ 50 - lOOngJ1I thích hợp dê thực PCR Ngoài yêu cầu dani bao ve nồng độ dộ tinh DNA thu cân phai ỡ trạng thái nguyên vựn tói da han che dứt gãy nhắt cô thê Theo ket qua dược tông hợp la' bang 3.1 chơ thốy cac inau DNA tách chiết dược đêu có nồng độ trẽn 50 ng-pl vã tương dồi rỉnh Sfeh? với OD khoang 1.8 • 2.0 Như q trinh tách chief DN/\ hốn tồn đáp ímg dược cãc yêu cầu chắt lượng dê tiếp tực ti en hãnh kỹ thuật PCR 4.2 Kci qua khucch dại đoạn gen vừng promoter gen TERT 33 PC R đượe biết tới kỹ thuật chép DNA thí nghiêm cho phép khuếch đai chon lọc chuồi DN A đích tnâ khơng c.ìn sứ dựng cac sinh vật sõng đẽ thực Kỳ thuật gần cõ the khucch đại bill ki gen thê người Chi với thín gian ngan, gen đích dã dược khuếch dai lên tới hang triệu bau Với việc tiết kiệm thơi gian, cộng với xãc độ đặc hiệu, kỳ thuật ngày cáng dược sữ dựng rộng rãi nglũẽn cứu y - sinh hoc phục vụ nhiều mục đích khác nhau, phát bênh di truyền chân đoan bênh nhiẻm trùng, tach dòng gcn vả xác định huyết thóng Các thành phẩn cùa phan ừng PCR gơm có DNA khn, đoạn mồi đặc hiệu, czyme Taq polymerase, dung dịch đém dNTPs nước, chúng lôi sir dụng GoTaq Hot Start Green master mix đà chưa sần dNTPs, enzyme Taq polymerase MgCljCO nồngdộ thích hợp dung dịch đệm có pll phù hợp đè rút ngân bước chuãn hóa tửng thành phần cua phan ứng PCR Một mầu DNA phu hụp dê thain gia phan úng khuếch dai có nồng độ 50- 100 ng/pỉ Một màu DNA cỏ nồng độ cao sí gảy làng phí vã có thê gày ức chế phán ứng ngưực lai đổi VÓI mâu DMA cớ nồng độ thầp thí khơng đu dế khucch đệĩ Vi vậy, nhừng mau cỏ nồng độ cao thí phai liền hành pha lồng nồng dộ thích hợp 50 - 100ạg/pl Thêm vào mâu DNA tách chiết khơng đưục phep lan tạp chắt ức chề trinh PCR, đám bao không lần DNA ngoại lai khác Thành phân tiêp theo lã đoạn mồi đậc hiệu với vũng promoter gen TERT thict kc trinh tự dựa trinh tư gcn TER.T chuẩn Genbank sư dụng chức nâng Primer-BLAST cua trang NCBI Sau nhân mồi lù nhà sàn xuất, tiến hành pha lỗng mồi tổi ưu hóa nơng độ mồi bảng cách I1U.X phan ứng PCR với nông độ mõi khác (2.5 pmoVpl pmot/pl 10 pmol/pl ) thành phần khác ngồi mồi khơng thay dõi nống độ Nẻu nồng độ quã cao sè cỏ thê hình thành nhiêu sán phàm phụ khơng mong muốn, ngược lạt với nồng dộ mồi 34 tháp $ẻ khơng đủ đồ khuếch dại DMA Ngồi chứng tối có bì) sung thêm DMSO đẻ giám nhiél độ bai cặp mồi (úng IkNii tinh enzyme Taq polymerase lảng tính đậc hiệu cùa phan ứng PCR Tắt cà phương pháp PCR có chu trình nhiột với giai đoạn giống là: giai đoạn biến tinh, giai đoạn gắn va giai đoạn kéo dài o giai đoạn biên tính, choỏi xoan kép DNA bị phã vờ liên kct hydro cãc base tách khui lao thành hai DNA mạch don nhò qua trình úng nhiệt dộ lẽn tới 93 - 95°c Tại nghiên cứu chung lựa chọn nhiẻl độ biến tính lã 93°c Khi DNA trạng thai hã Hindi đơn giai đoạn gắn môi bầl đâu Từ 93 95’C nhiệt độ phan ứng giam xuống 50 - 65ec 20 - 40 giây để mồi gán váo SỢI DNA đơn Nhiột độ gâu mồi phai phu họp nhiệt độ thàp mồi sê kbòng gẳn cao mồi cô thê gắn không đặc hiệu Thông thuửng nhiệt độ gần thường thấp - 5®c so vói nhiỹt độ nơng chay cua mói Trong nghiên cưu nảy chúng tỏi lựa chọn nhiệt độ gắn mói 59°c 30 giày Ngay sau gán mồi enzym Taq polymerase sè bàt đầu giai đoạn keo dài Taq polymerase co nhiệt độ l»ạt động tối ưu 75 • 80:C va nhiệt dộ 72%’ thương lựa chọn Tại giai đoan Taq polymerase lõng hợp sợi DNA bị sung vin DNA khn cách thêm dNTP theo nguyên tốc bô sung theo chiêu 5' đen 3* Phan ứng trung ngưng xây giừa nhóm 5' - phosphate cua đNTP với nhóm 3' - hydroxyl phía cũi cua SỢI DNA vừa hình thành Thói gian cua giai doạn kéo dai phụ thuộc vào Taq polymerase vả độ dái cua đoạn DNA cẩn khuếch đ;o Trong nghiên cứu ctizym Taq polymerase sư dụng 72°c 30 giãy Sau klu trai qua ba giai đoạn cua PCR chung tói thục hiộn kiếm tra chãi lượng san phàm PCR bảng phương pháp điện di sư dụng marker 100 bp Trong nghiên cừu nảy kết qua diên dược chúng lỏi the mục 3.2 chơ thấy mịi giêng diện di chi có bâng DNA sang, rờ nét 35 khống có bảng phụ kích thước phù hợp với kích thước lý thuyết cua đoạn gen TERT can khuếch dại lả 3ó3bp so sánh vói thang DNA chuẩn Như chúng lối đà khucch đai thành công đoạn gen vũng promoter gen TERT 4.3 Kct qua xác định đột biến vùng promoter gen TF.RT Qua trinh khuếch đai vùng promoter gcn TERT công bước ehuản bị chữ khâu giai ninh tự vùng gen đích Một kềt quà giãi trinh tự gcn đft riêu chuàn lã tin hiẻu đinh phái rổ ràng, tin hiêu thấp, khống bi nhiêu San phẩm PCR đóng vai trừ DNA khuôn cùa phản ửng PCR giải trinh tư gcn vã lã yểu tố anh hướng lớn lời kểt qua cua trinh giái trinh tụ IX' san phàm PCR phái đặc hiệu vã khơng dược có san phàm phụ đè dam bao kết quà giai trinh tụ chinh xác vả không bị nhiều Các phần phan ứng PCR dư ihừu hay cãc san phàm không đặc hiệu có the gãy nhiêu tín hiệu giãi trinh lự Chinh vi việc tinh san phátn PCR phan quan trụng kỳ ihuựi giai trinh lự Khác với phuong pháp giãi trinh lư kinh diên tón ihời gian, tơn nhiều kinh phí kỳ thuật giai trinh tụ dược thục trẽn hẽ thong mây lư dộng u’u diêm mang lai lã đem gian, dề dàng cộng VỚI độ xảc cao, tiết kiêm rít nhiều thời gian, tiền hạc Nhu két qua giai trinh lự vũng promoter gen TERT đà trinh bày trên, mảu giái trinh lự thu dược với hình anh rị nét tín hiệu tháp, tín hiệu đinh rồ ràng Qua bang 3.3 thầy 30 màu Ixộnh nhãn nghiên cứu thí cổ tới 2333% mau xuầi hiên đột biến -124C>T hoác -146C>T Trong ti lê đội biên đièm -I24OT chiếm 20% -I46OT chiếm 3.33% Trong độc biền phai dưực tý lệ đột biến -L24C>T cao ty lệ đốt bicn -146OT tương ứng 85.71% 1429% Như có thê thầy dột biến vùng promoter gen TERT thi đột biền -I24OT la phô biến ca Trường hợp 3Ổ plút 11 Petruzziello A Epidemiology of Hepatitis B Virus (HBV) and Hepatitis c Virus (HCV) Related Hepatocellulax Carcinoma Open Virol J 2018;12:26-32 doi:10.2174/18743579018!20l0026 12 Tarocchi M, Polvani s Marroncini G et al Molecular mechanism of hepatitis B virus-induced hepatocarcinogenesis World J Gastroenterol Sep 2014;2: 11630-40 doi: 10.3748 wjg.v20.i33.11630 13 Bartosch B Thimine R Blum HE et aL Hepatitis c virus-induced hepatocarcinogenesis J Hepatol Oct 2009:51(4):810-20 doi: 10.1016/j.jhep.2009.05.00S 14 Xie Y Hepatitis B Virus-Associated Hepatocellular Carcinoma Adv Exp Med Biol 2017;1018:11-21 doi: 10.1007/978-981-10-5’65-6_2 15 Eỉ-Serag HB Rudolph KL Hepatocellular carcinoma; epidemiology and molecular carcinogenesis Gastroenterology- Jun 2007; 132(7):2557-76 doi:10.105 3/j.gastro 2007.04.061 16 Ogunwobi oo Harrichanan T Huaman J et al Mechanisms of hepatocellular carcinoma progression World J Gastroenterol May 21 2019;25( 19):2279-2293 doi: io.3748/wjg.v25.i 19.22’9 17 Yang JD Hainaut p Gores GJ Ct al A global view of hepatocellular carcinoma: trends, risk, prevention and management Nat Rev Gastroenterol Hepatol Oct 2019:16(10):589-601 doi: 10.1038'541575019-0186-y 18 Dimitroulis D Damaskos c Valsami s et al From diagnosis to treatment of hepatocellular carcinoma: An epidemic problem for both developed and developing world ff'or/J J GasTrocnrerol Aug 2017^3(29)15282-5294 doi:10.3748Avjg.v23.i29.5282 19 Kirstein MM Wirth TC (Multimodal treatment of hepatocellular carcinoma] Internist 'Berif Feb 2020;61(2);164-I69 Multimodal? Therapie des hepatozellulaxen Karánoms doi:10.1007/s00108-0l9- 007’2-X 20 Dratwa M Wysoczarxska B Lacina p el al TF.RT-Regulation and Roles in Cancer Formation Front Immunol 2020:11:589929 doi:l0.3389/fimmu.2020.589929 21 Hexdenrdch B Kumar R TERT promoter mutations in telomere biology Murat R« Jan-Mar 2017;771:15-31 doi: 10.1016'j mrrev 2016.11.002 22 Yuan X Xu D Telomerase Reverse Transcriptase (TERT) in Action: Cross-Talking with Epigenetics Int J Mol Sci Jul 2019;20(l3)doi:10.3390‘ijms20133338 23 Huang FW, Hodis E Xu MJ et al Highly recurrent TERT promoter mutations in human melanoma Science Feb 22 2013:339(6122):957-9 dor 10.1126/$cience 1229259 24 Hom s Figi A Rachakonda PS et al TERT promoter mutations in familial and sporadic melanoma Science Feb 22 2013:339(6122):95961 doi: 10.1126 'science 1230062 25 Cokbatch A J Dobrovic A Coopci WA TERT gene: its function and deregulation in cancer J Clin Pathol Apr 2019:72(4):281-284 doi: 10.1136/jclinpath-2018-205653 26 Quaas A Oldopp T Tbaron L et al Frequency of TERT promoter mutations in primary tumors of the liver Krrchows Arch Dec 2014;465(6):673-7 doi: 10.1007/S00428-014-1658-7 27 Bell RJ Rube HT Xavier-Magalhfles A et aL Understanding TERT Promoter Mutations: A Common Path to Immortality* Mol Cancer Res Apr 2016:14(4 ):315-23 doi:10.1158/1541-7786.Ma-16-0003 28 Hafezi F Perez BercoffD Pre Solo Play of TERT Promoter Mutations Cells Mar 19 2020,9(3)doi:l0.3390cells9030749 29 Yang X, Guo X Chen Y, et al Telomerase reverse transcriptase promoter mutations in hepatitis B xirus-associated hepatocellular carcinoma May Onco target 20 lổ;7(19):27838-47 10 doi: 10.18632.oncotaxget.8539 30 Huang DS Wang z He XJ et aL Recurrent TERT promoter mutations identified in a large-scale study of multiple tumour types are associated with increased TERT expression and telomerase activation Eur J Cancer May 2015:51(8X969-76 doi: 10.1016-j.ejca.2015.03.010 31 Lombardo D Soina c Giosa D et al Frequency' of somatic mutations in TERT promoter hepatocellular TP53 and CTNNBI genes cardnoma from Southern Italy 2020;19(3):2368-2374 doi: 10.3892/O1.2020.11332 in patients with Oncol Lett Mar PHỤ LỤC DANH SÁCH BỆNH NHÂN Tuổi Giới STT Mi bệnh nhan ƯTG Bùi Vãn õ 55 Nam Hưng Yên 4»ĩ ƯTO2 Hoảng Tuấn Đ 40 Nam Hả Nội ƯTG3 Nguyen Vin T 59 Nam Hòa Biih ƯTG4 Hiứng Cao 1) 60 Nam Thanh Hóa ƯTO5 Nguycn Vàn 67 Nam Hưng Yên UTG6 Nguyen Vân K 54 Nam Sem La ƯTG7 Hoảng Trọng ọ 64 Nam Thanh Hóa s ƯTG8 Nguyen Minh T 66 Nam Son La UTG9 Dụng Khi', D 55 Nam Bắc Giang 10 ƯTG 10 u Vân T 54 Nam Nam Định 11 ƯTG 11 Vù Duy tì 68 Nam Thãi Binh 12 UTG 12 Vù Vin p 60 Nam Thái Nguyên 13 ƯTG 13 Phạm Ngọc N 53 Nam Phủ Thợ 14 UTG 14 Trăn Đức c 48 Nam Hủ NỘI 15 UTG 15 Nguyên Vân Đ 51 Nam Hà Nội lổ ƯTG 16 Nguycn Vản T 53 Nam Thái Binh 17 UTO17 Hoàng Xuan s 67 Nam Hủ Tính 18 UTG 18 Trần Anh D 60 Nam Ninh Binh 19 UTG 19 Nguyền Thị T 60 Nử Hưng Yên Họ ten TWM*M«K> *4: l>ịa chi 20 ƯTG 20 Nguyên Vản T 61 Nam Bấc Giang 21 ƯTG21 Phan Hồng p 63 Nam Phú Thụ 22 UTO 22 Vương Húng s 63 Nam Hả Nội 23 ƯTG23 Vương Vănc 57 Nam Hà Nội Mởi 24 ƯTO 24 Lẽ Huv T 67 Nam Thanh Hóa 25 ƯTG25 Trần Dữc T 51 Nam Tuyên Quang 26 ƯTO26 Phạm Ván II 68 Nam Nam Định 27 UTO 27 Nguyễn Trọng K 51 Nam Nghệ An 28 ƯTG 28 Quàng Vản T 59 Nam Sơn l.a 29 ƯTG 29 Đồ Vân T 47 Nam HỏaBiih 30 ƯTO30 Hoảng Vàn T 53 Nam Hãi Phơng TWM*M«K> *4: ... vùng promoter gen TERT bệnh nhãn ung thu biếu mồ tể bào gan" đà áp dụng kỳ thuật giãi trình tụ gen đe phát đột biến vung promoter gen TERT bộnh nhàn ung thu biêu mô te bảo gan vói tv lộ đột biến. .. dụng kỹ thuật giai trinh tự gen di' phát dột biền vung promoter gen ĨEET trêu bệnh nhãn ung thư biêu mô tể bao gan ” thực với mục tiêu: Xác định đột bicn Ming promoter gen TERT nén bệnh nhàn ung. .. hội đề bênh lý gan ten triền Ung thư biểu mo tế bao gan (HCC) la ung ihu gan nguyên phai phô biên nhaL chiêm 75% - 85% trương hựp ung thư gan Qiã umh hình ung thư biêu mô tế bão gan la mộ! trinh