NGHIÊN CỨU KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA, KHÁNG KHUẨN VÀ ỨC CHẾ NẢY MẦM CỦA DỊCH CHIẾT TỪ CÂY BÌM EBERHARDT

NGHIÊN CỨU KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HÓA, KHÁNG KHUẨN VÀ ỨC CHẾ NẢY MẦM CỦA DỊCH CHIẾT TỪ CÂY BÌM EBERHARDT (MERREMIA EBERHARDTII).Cây Bìm eberhardt thuộc họ Bìm bìm, là loài cây dây leo điển hình được tìm thấy ở nhiều nước nhiệt đới và cận nhiệt đới của Châu Á.

ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA Độc lập - Tự - Hạnh phúc KHOA HĨA BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC NHIỆM VỤ ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Họ tên sinh viên : Đậu Thị Ngọc Ngà Lớp : 10SH Khóa : 2010 - 2015 Ngành : Cơng nghệ sinh học Tên đề tài Nghiên cứu khảo sát hoạt tính chống oxy hóa, kháng khuẩn ức chế nảy mầm dịch chiết từ Bìm eberhardt (Merremia Eberhardtii) Nội dung phần Lời cảm ơn Mục lục Danh mục bảng Danh mục hình vẽ Tóm tắt Lời mở đầu Chương 1: Tổng quan tài liệu Chương 2: Vật liệu phương pháp Chương 3: Kết thảo luận Chương 4: Kết luận kiến nghị Tài liệu tham khảo Phụ lục Giáo viên hướng dẫn: Ngày giao nhiệm vụ: ThS Tạ Ngọc Ly 10/10/2013 Ngày hoàn thành nhiệm vụ: 31/05/2015 Thông qua môn: Ngày …… tháng …… năm 2015 TỔ TRƯỞNG BỘ MÔN GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) TS Lê Lý Thùy Trâm ThS Tạ Ngọc Ly GIÁO VIÊN DUYỆT SINH VIÊN THỰC HIỆN (Ký ghi rõ họ tên) (Ký ghi rõ họ tên) TS Lê Lý Thùy Trâm Đậu Thị Ngọc Ngà KẾT QUẢ ĐIỂM ĐÁNH GIÁ: ………………… Ngày … tháng … năm 2015 ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA HĨA BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP Đề tài: NGHIÊN CỨU KHẢO SÁT HOẠT TÍNH CHỐNG OXY HĨA, KHÁNG KHUẨN VÀ ỨC CHẾ NẢY MẦM CỦA DỊCH CHIẾT TỪ CÂY BÌM EBERHARDT (MERREMIA EBERHARDTII) Sinh viên thực : Đậu Thị Ngọc Ngà Lớp : 10SH Giáo viên hướng dẫn : ThS Tạ Ngọc Ly Giáo viên duyệt : TS Lê Lý Thùy Trâm - Đà Nẵng, năm 2015 - Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, xin gởi lời cảm ơn chân thành sâu sắc đến thầy ThS Tạ Ngọc Ly, người tận tình hướng dẫn, dìu dắt giúp đỡ suốt thời gian thực nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn thầy TS Đặng Đức Long người cho nhiều lời khuyên q trình làm nghiên cứu Tơi xin chân thành cảm ơn ban lãnh đạo trường Đại học Bách Khoa Đà Nẵng tạo điều kiện thuận lợi để tơi hồn thành tốt đồ án tốt nghiệp Xin cảm ơn quý thầy cô môn Công Nghệ Sinh Học truyền dạy cho kiến thức q giá bổ ích năm tháng tơi ngồi ghế nhà trường Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy Võ Công Tuấn cô Phạm Thị Kim Thảo, kỹ thuật viên phịng thí nghiệm Công nghệ Sinh học, người giúp đỡ nhiều suốt thời gian nghiên cứu phịng thí nghiệm Bên cạnh đó, Tơi xin cảm ơn người thân gia đình bạn bè ln bên động viên, giúp đở để tơi hồn thành nghiên cứu Với lòng biết ơn sâu sắc, xin chân thành cảm ơn tất giúp đỡ quý báu đó! Đà nẵng, ngày 18 tháng năm 2015 Sinh viên thực Đậu Thị Ngọc Ngà Trang i Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH iv DANH MỤC BẢNG vi TÓM TẮT LỜI MỞ ĐẦU .2 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3 1.1 Giới thiệu Bìm eberhardt 1.1.1 Đặc điểm thực vật học 1.1.2 Đặc điểm hình thái Bìm eberhart 1.1.3 Nguồn gốc phân bố .4 1.1.4 Tình hình nghiên cứu giới nước .5 1.2 Đại cương số hợp chất có thực vật 1.2.1 Các hợp chất phenol 1.2.2 Hợp chất flavonoid .9 1.2.3 Alcaloid 11 1.2.4 Hợp chất glycosid .12 1.3 Hoạt tính chống oxy hóa 13 1.4 Tìm hiểu vi khuẩn Bacillus Subtilis 15 1.4.1 Đặc điểm phân loại phân bố vi khuẩn Bacillus subtilis .15 1.4.2 Đặc điểm hình thái 16 1.4.3 Đặc điểm nuôi cấy 16 1.5 Hiệu ứng allelopathy .17 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 19 2.1 Vật liệu 19 2.2 Phương pháp 19 2.2.1 Phương pháp chiết .19 2.2.2 Thí nghiệm khảo sát ức chế nảy mầm 22 2.2.3 Phương pháp thử hoạt tính ức chế gốc tự DPPH 23 2.2.4 Khảo sát tính kháng khuẩn với vi khuẩn Bacillus subtilis 25 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 27 3.1 Kết tách chiết 27 3.2 Kết khảo sát khả ức chế nảy mầm cao chiết dịch chiết Bìm eberhardt 28 3.2.1 Đối với cao chiết 28 Trang ii Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly 3.2.2 Đối với dịch chiết 30 3.3 Kết khảo sát tính kháng oxy hóa mẫu cao chiết 33 3.4 Kết xác định tính kháng khuẩn cao chiết với vi khuẩn Bacillus subtilis .36 3.4.1 Kết kháng khuẩn 36 3.4.2 So sánh hoạt tính kháng sinh .38 3.5 Thảo luận 38 3.5.1 Cây Bìm eberhart có hiệu ứng allelopathy 38 3.5.2 Cao chiết ethanol 50% có hoạt tính chống oxy hóa tốt .39 3.5.3 Cao chiết ethanol 50% cho kết kháng khuẩn cao 39 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 41 4.1 Kết luận 41 4.2 Kiến nghị .41 TÀI LIỆU THAM KHẢO 42 PHỤ LỤC 44 Trang iii Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly DANH MỤC HÌNH STT Số hình vẽ Tên hình vẽ 1.1 Cây Bìm eberhardt (Merremia eberhardtii) 1.2 Sự phân bố Bìm eberhardt Đà Nẵng 1.3 Một số hình ảnh Bìm eberhardt Đà nẵng 1.4 Cấu trúc vùng chống oxy hóa polyphenol 1.5 Một số cấu trúc flavol 10 1.6 Một số cấu trúc alcaloid 12 1.7 Cấu trúc saponin 13 1.8 Gốc tự phá hủy 13 1.9 10 1.10 Vi khuẩn Bacillus subtilis 16 11 2.1 Quy trình chiết thu cao 20 12 2.2 13 2.3 Quy trình chiết thu dịch sử dụng nhiệt 21 14 3.1 Các loại cao chiết 27 15 3.2 Đồ thị tỷ lệ nảy mầm hạt cải 29 16 3.3 17 3.4 18 3.5 19 3.6 Cấu trúc DPPH trước sau phản ứng với chất chống oxy hóa Quy trình chiết thu dich sử dụng phương pháp siêu âm Hình ảnh thí nghiệm hại cải cao chiết nồng độ 20mg/ml Đồ thị tỷ lệ nảy mầm hạt cải sử dụng dịch chiết dùng nhiệt Đồ thị tỷ lệ nảy mầm hạt cải sử dụng dịch chiết siêu âm Tỷ lệ nảy mầm hạt cải Trang 15 21 30 31 32 33 Trang iv Đồ án tốt nghiệp 20 3.7 21 3.8 22 3.9 23 3.10 24 3.11 GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly Khảo sát khả bẫy gốc tự nồng độ khác mẫu M1, M2 vitamin C Khảo sát khả bẫy gốc tự nồng độ khác mẫu M3, M4 vitamin C Đường kính vịng kháng khuẩn mẫu nồng độ 200mg/ml Đường kính vịng kháng khuẩn cao chiết nồng độ 100mg/ml Hình ảnh kháng khuẩn 35 35 36 37 38 Trang v Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly DANH MỤC BẢNG STT Số hiệu bảng Tên bảng 3.1 3.2 3.3 Kết khảo sát nồng độ mg/ml 28 3.4 Kết khảo sát nồng độ 10mg/ml 29 3.5 Kết khảo sát nồng độ 20mg/ml 29 3.6 Kết khảo sát dịch chiết dùng nhiệt 31 3.7 Kết khảo sát dịch chiết siêu âm 32 3.8 3.9 10 3.10 11 3.11 Khối lượng cao chiết thu từ quy trình chiết thu cao Thể tích dịch chiết thu từ quy trình chiết thu dịch Kết % ức chế DPPH mẫu 1, mẫu vitamin C Kết % ức chế DPPH mẫu 3, mẫu vitamin C Đường kính vịng kháng B subtilis dịch chiết (200 mg/ml) Đường kính vịng kháng khuẩn B Subtilis cao chiết (100 mg/ml) Trang 27 28 33 34 36 37 Trang vi Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly TĨM TẮT Cây Bìm eberhardt thuộc họ Bìm bìm, lồi dây leo điển hình tìm thấy nhiều nước nhiệt đới cận nhiệt đới Châu Á Loại có chứa chất có hoạt tính sinh học Mục đích nghiên cứu xác định phương pháp tốt để chiết hợp chất khảo sát số hoạt tính sinh học Bìm eberhardt Lá chiết với bốn loại dung môi khác là: nước cất, ethanol (50%, 80%, 90%) Kết cho thấy cao chiết ethanol 50% tốt Nghiên cứu khả ức chế nảy mầm dịch chiết xuất từ ethanol 50% ức chế 41% hạt cải nảy mầm so với mẫu đối chứng Ngoài ra, khả chống oxy hóa gần 50% so với vitamin C có thành phần kháng sinh cao, ổn định Kết làm tảng cho nghiên cứu sau ABSTRACT M eberhardtii belonging to the family Convolvulaceae is a typical liana plant found in many tropical and subtropical Asian countries This plant contains biologically active substances The aim of the current research was to determine best method for extraction compounds and surveying some biological activity of Merremia eberhardtii Its leaf were extracted with four different solvents: water, ethanol (50%, 80%, 90%) Results showed that ethanol 50% extracts is the best Studying on ability inhibit germination indicated that solution is extracted from 50% Ethanol have able inhibit 41% canola germination when compared with control sample Moreover, the antioxidant capabilities nearly 50% compared with vitamin C, has high antimicrobial composition and stability The results are the basics for future studies SVTH: Đậu Thị Ngọc Ngà_10SH Trang Đồ án tốt nghiệp GVHD: ThS Tạ Ngọc Ly Giá trị số hạt nảy mầm = giá trị trung bình số hạt nảy mầm ± sai số, từ thí nghiệm độc lập (20 hạt phương pháp điều trị) Tỷ lệ nảy mầm hạt giống = (số hạt nảy mầm / 20) × 100% Sử dụng hàm Ttest để phân tích xác xuất thu p