MỞ đầu CÁCH THẢO LUẬN đề TÀI về xây DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG nấm LINH CHI

MỞ đầu CÁCH THẢO LUẬN đề TÀI về xây DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG nấm LINH CHI CÓ TÀI LIỆU THAM KHẢO CỤ THỂ MỞ đầu CÁCH THẢO LUẬN đề TÀI về xây DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG nấm LINH CHI MỞ đầu CÁCH THẢO LUẬN đề TÀI về xây DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG nấm LINH CHI

MỞ ĐẦU CÁCH TẢO LUẬN ĐỀ TAI VỀ XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM LINH CHI MỤC LỤC MỞ ĐẦU Tính cấp thiết Ngày xu hướng sử dụng thảo dược thiên nhiên để trị bệnh trở nên phổ biến, việc tìm kiếm khả chữa trị bệnh từ loại nấm dược liệu tiến hành nhiều nơi giới: Nhật Bản, Trung Quốc, Đài Loan, Malaysia, Thái Lan, … Trong số đó, nấm linh chi đối tượng nhiều quốc gia quan tâm nghiên cứu ứng dụng [1] Các chất chống oxy hóa bao gồm polyphenol, carotenoid, vitamin C vitamin E … nấm linh chi có hiệu hữu ích việc phịng chống viêm khớp, viêm phế quản, hen suyễn, viêm loét dày, cải thiện tượng ngủ insomnia [34], [50] Ngoài ra, hợp chất polysaccharides, peptide phức tạp, β-glucans, lectin, germanium hữu cơ, adenosine, triterpenoids nucleotide hợp chất có hoạt tính sinh học với khả hữu ích làm tăng cường chức hệ thống miễn dịch điều trị bệnh suy giảm miễn dịch (nhiễm virus, ung thư), dị ứng, nhiễm vi sinh vật gây bệnh, chống đông máu [27], [39] Thêm vào đó, nấm linh chi cịn có tác dụng làm giảm cholesterol, chữa cao huyết áp, tiểu đường, nâng cao hoạt động gan, chống HIV, HIV-1 chống HIV-1 protease [4], [36], [44] Hiện nay, có nhiều loại nấm linh chi khai thác sử dụng Nhưng thực tế vẫn cịn nhiều loại nấm có giá trị kinh tế cao, giá trị dược liệu tự nhiên chưa nghiên cứu nuôi trồng [51] Một số khơng thể bỏ qua nấm linh chi Cổ cị (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst), loại nấm xem thảo dược y học cổ truyền thuộc nhóm thuốc bổ thượng phẩm, sử dụng nhiều loại thực phẩm chức thuốc phòng bệnh nước Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc Dịch chiết nấm linh chi Cổ cò xem nguyên liệu quý dùng chống khối u [37] Một số báo cáo dịch chiết nấm linh chi Cổ cò có khả ức chế sự phát triển khối u tuyến tiền liệt người dòng tế bào ung thư bàng quang, ức chế sự tăng sinh tế bào cảm ứng apoptosis thể người [38] Bên cạnh đó, dịch chiết nấm cịn có tác dụng lên ung thư biểu mô ruột dòng tế bào ung thư vú [38] Một số triterpenes có nấm linh chi Cổ cị chứng minh ức chế sự tăng trưởng tế bào gan bất thường cách thay đổi đường phosphoryl hóa nội bào [32], [41] Gần đây, nấm linh chi Cổ cị cho có khả ức chế sự gia tăng dòng tế bào máu khác K562, HL1-60, U937, Blin-1, Nalm-6 [26] Không dừng lại việc có giá trị dược liệu quý mà nấm linh chi Cổ cị cịn có nhiều nghiên cứu cho thấy nấm có thành phần dinh dưỡng phong phú bao gồm nhóm acid amin, protein, chất béo, đường khử, hợp chất phenol, nguyên tố khác Ag, Fe, Na, Cu, nguồn thực phẩm tốt cho sức khỏe người [6] Chính nay, nấm linh chi Cổ cị khai thác nhiều trở thành nguồn kinh tế người dân vùng đệm vườn quốc gia nước ta Nhưng việc khai thác người dân phần làm tác động tiêu cực đến hệ sinh thái vườn quốc gia nói chung nấm linh chi Cổ cị nói riêng, làm cho số lượng nấm linh chi Cổ cò giảm mạnh qua năm nguy cạn kiệt tự nhiên việc khai thác q mức Vì lí nêu chọn đề tài “Xây dựng quy trình nhân giống nấm linh chi Cổ cị (Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst) thu hái vườn quốc gia KonKaKinh tỉnh Gia Lai” CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 KẾT QUẢ ĐÁNH GIÁ GIÁ TÍNH DƯỢC LIỆU CỦA NẤM LINH CHI CỔ CO 3.1.1 Định lượng hợp chất polysacchride nấm Cổ co Polysaccharides linh chi Cổ cò chiết nước ấm 60 0C dùng sóng siêu âm hỗ trợ chiết 30 phút, sau lọc lấy dịch Tiếp theo quay thành cặn, cuối dùng phương pháp so màu để xác định hàm lượng polysaccharides chiết Kết định lượng polysaccharides thô thể bảng 3.1 Ghi chú: Những số hàng có chữ theo sau giống khơng có ý nghĩa thống kê với nhau, chữ khác có khác biệt với mặt thống kê với độ tin cậy α =0,05 Qua kết quả ở bảng 3.1 cho thấy polysaccharides phân tán toàn bộ quả thể nấm linh chi Cổ Cò với hàm lượng chiếm 10,1%, chúng tỏ nấm linh chi Cổ cò là loại nấm co hoạt tính sinh học cao Kết quả phù hợp với nghiên cứu Poh-Guat Cheng và cộng sự (2013) dịch chiết nước nong từ nấm linh chi Cổ cò co hàm lượng polysaccharides là 12,6% gop phần mạnh mẽ thúc đẩy quá trình chữa lành vết thương ở chuột gây bởi streptozotocin [29] Cũng nghiên cứu hợp chất polysaccharides nấm linh chi Phạm Bảo Trương (2015) cho thấy nhiệt độ 1300C thời gian trích ly 30 phút cho hàm lượng polysaccharides nước linh chi cao (684,1 ± 14,5 mg/l) nghiên cứu Sheng-quan Huang cộng sự (2010) sử dụng UMAE chiết polysaccharides cho suất cao Đặc biệt với hàm lượng polysaccharides cao, nấm linh chi Cổ cị nói loại nấm có tiềm lớn khả sử dụng làm dược liệu ức chế khối u ngăn ngừa ung thư Điều thể vào năm 2011 nghiên cứu Xu.Z cộng sự xem xét vai trò tiềm polysaccharides Ganoderma lucidum điều trị khối u chế có liên quan Nghiên cứu cho thấy hoạt động chống khối u polysaccharides trung gian hiệu ứng miễn dịch, chống angiogenic, cytotoxic, ức chế sự phát triển khối u ức chế sự phát triển khối u [49] Hay nghiên cứu Mau JL (2002) chiết xuất polysaccharides thủy phân có hợp chất phenolic dạng tự có khả chống oxy hóa, ức chế peroxidation lipid cao [31] 3.1.2 Định lượng hàm lượng protein có nấm Cổ co Dựa vào sở tạo phức chất đồng với protein khử với hỗn hợp phophomolipden – phophovonphramat tạo phức màu xanh có độ hấp thụ bước sóng 660nm Kết định tính protein hình 3.2 cho thấy Hình 3.2 Dãy nồng độ đường chuẩn protein và mẫu thử nghiệm (a) Hình 3.3 Phương trình đường chuẩn BSA Mẫu thử nghiệm(OD=0,534, 12,1%) Mẫu kiểm chứng (OD=0,488, 11%) Từ đường chuẩn hình 3.3 hình 3.2 ta tính hàm lượng protein nấm linh chi Cổ cò đạt 12,1%, chứng tỏ nấm linh chi Cổ cị có hàm lượng protein cao so với nấm dược liệu khác, protein ngồi vai trị cung cấp dinh dưỡng cịn có tác dụng điều trị bệnh cho người Kết phù hợp với số nghiên cứu giới như: vào năm 2006, Wang H phân lập từ nấm Ganoderma lucidum loại protein kháng nấm 15 kDa, có tên Ganodermin phương pháp sử dụng sắc ký DEAE-cellulose, Ganodermin ức chế sự phát triển nấm Botrytis cinerea, Fusarium oxysporum Physalo;spora piricola với giá trị IC50 15,2 microM, 12,4 microM 18,1 microM [33] Một nghiên cứu khác Du.M cộng sự (2008) nói nấm linh chi biến đổi từ 20-30% Selen vô từ chất thành dạng hữu cách ưu tiên kết hợp selen với protein Hợp chất liên kết lại có khả chống oxi hóa tốt Thêm vào thành phần axit amin protein từ nấm linh chi đóng vai trị quan trọng trực tiếp việc tăng cường hoạt động chống oxi hóa [30] Tiếp sau vào năm 2014 Hao-Jan Lin cộng sự điều tra hiệu protein điều hòa miễn dịch (Ling Zhi-8, LZ-8) việc làm lành vết thương mô gan chuột sau phẫu thuật điện cực đơn cực chứng minh LZ-8 làm tăng tốc trình lành vết thương mô gan chuột, số biểu NF-B, apoptosis, hoạt tính caspase-3 mô gan giảm 3,7 28 ngày sau phẫu thuật [40] Điều đó, chứng tỏ protein nấm Ganoderma lucidum có hoạt tính sinh học cao 3.1.3 Định tính alkaloid nấm Cổ co Kết định tính alkaloid nấm hai loại thuốc thử dương tính thể hình 3.4 Mẫu dịch chiết cho thuốc thử Mayer vào có kết tủa màu vàng nhạt kết tủa lắng xuống ống nghiệm, sử dụng thuốc thử Dragendorff cho kết tủa màu cam-nấu với lượng lớn Chứng tỏ nấm linh chi Cổ cò chứa hợp chất alkaloid có tác dụng giúp tăng lượng giúp đẩy nhanh q trình hàn gắn vết thương, điều hịa huyết áp hỗ trợ điều trị bệnh ung thư Như vậy, nhiều loại nấm chi với nấm linh chi Cổ cò sử dụng tài sản thuốc nhiều nước có hàm lượng alkaloid cao Hình 3.4 Kết quả định tính alkaloid nấm linh chi Cổ cò (a)-Mẫu đối chứng, (b)-Mẫu thử với thuốc thử Mayer, (c)-Mẫu đối chứng với thuốc thử Dragendorff, (d)-Mẫu thử với thuốc thử Dragendorff 3.1.4 Định tính hợp chất saponin nấm Cổ co a Định tính saponin nấm - Thử nghiệm tạo bọt định tính saponin Kết định tính cho thấy ống đối chứng khơng có bọt cịn ống nghiệm chứa dịch chiết nấm sau lần quan sát (sau 15, 30, 60 phút tiến hành quan sát độ bền bọt) cho thấy dịch chiết tạo bọt bền 60 phút cột bọt cao cm sau giảm dần xuống 1,5 cm sau 60 phút Như dịch chiết từ thể nấm linh chi Cổ cị có chứa hợp chất saponin 10 a b Hình 3.5 Kết quả định tính saponin nấm sau 60 phút thử hoạt tính: ống (a) đối chứng (nước cất), ống (b) chứa dịch chiết nấm linh chi Cổ co b Định tính trierpenoid (phản ứng Liebermann-Burchard) Sau định tính nấm linh chi Cổ cị có saponin chúng tơi định tính hợp chất trierpenoid có hoạt tính sinh học cao a b c lớp vàng nhạt Hình 3.6 Kết quả định tính trierpenoid nấm linh chi Cổ co: (a)-Mẫu nước, (b)-Mẫu đối chứng chứa H2SO4 và chloroform khơng có mẫu thử, (c)-Mẫu đối chứng chứa H2SO4 và chloroform và có mẫu thử 22 a b b c a c Hình 3.16 Hệ sợi nấm các môi trường nghiên cứu sau 12 ngày (1) và 20 ngày (2) ba nguyên liệu hạt thóc (a), lõi ngơ (b), que sắn (c) Bảng 3.5 Ảnh hưởng nguồn chất đến trình nhân giống cấp II Bảng 3.5 cho thấy hệ sợi nấm Cổ Cị phát triển tốt mơi trường nghiên cứu Trong đó, mơi trường chất que sắn hệ sợi nấm phát triển mạnh với thời gian lan kín 20 ngày đạt tốc độ lan tơ 0,54 cm/ ngày, riêng môi trường nhân hạt thóc lõi ngơ sau 20 ngày lan 8,75 cm 8,67 cm Hai mơi trường có chất hạt thóc lõi ngơ cần đến 24 ngày sợi tơ lan kín bịch Vì mơi trường que sắn có diện tích tiếp xúc lớn giúp hệ sợi nấm thích nghi nhanh phát triển mạnh, mặt khác que sắn có khả hấp thụ nước nên có độ thống lớn khơng bị úng nước làm cho sợi nấm không bị ảnh độ ẩm lớn loại bỏ khả sợi nấm bị ức chế môi trường chứa nhiều nước Theo nghiên cứu kỹ sư Võ Văn Ninh cho thấy việc sử dụng que sắn, phế phụ phẩm nông nghiệp giúp thời gian sinh trưởng hệ sợi nấm nhanh với tỉ lệ bịch phôi cấy giống que sắn đạt từ 80 – 99%, khí việc sử dụng nguồn nguyên liệu cũ tỉ lệ đạt 50 – 90% suất phương pháp 23 truyền thống đạt 40% Đặc biệt que sắn phế phụ phẩm nông nghiệp nên giá thành rẻ giúp giảm chi phí sản xuất, giảm thời gian nhân giống Bên cạnh mơi trường nhân giống cấp II từ lúa lõi ngô thừa nhiều chất dinh dưỡng nên vi sinh vật dễ phát triển ức chế sợi nấm phát, điều thể qua tỉ lệ nhiễm môi trường lúa -11,23%, môi trường lõi ngô 11,23% cao nhiều so với môi trường que sắn Mơi trường lúa lõi ngơ có bề mặt tiếp xúc lớn nên hệ sợi khó thích nghi làm kéo dài thời gian lan sợi Sử dụng phương pháp đánh giá cảm qua cho điểm thông qua việc quan sát hệ sợi môi trường nhân giống kết bảng 3.5 Mật độ cảm quan hệ sợi có sự khác biệt cơng thức thực nghiệm Trong đó, mơi trường que sắn (MT 1) đánh giá có hệ sợi dày đẹp với 4,8 điểm Hệ sợi nấm nhân giống que sắn có màu trắng, khỏe, sợi dài dày, liên kết chặt với lan que sắn sợi nấm bám toàn vào que sắn Đối với sự phát triển sợi nấm mơi Mẫu cị thu vườn KonKaKinh trường hạtnấm thóclinh kếtchi quảCổđánh giáhái chotạithấy sợiquốc nấmgia phát triển yếu chậm, sợi nấm mảnh Môi trường lõi ngô sợi nấm phát triển không đồng nhất, sợi Mẫu linhđều chi tốc Cổ độ cị lan háihơn vườn nấm lannấm khơng tơthu chậm so vớiquốc gia môiKonKaKin trường que sắn MT- Hansen Phân Lập Qua tốc độ phát triển hệ sợi môi trường nhân giốngBảo cảm quảnquan hệ sợi- Hanse nấm cho thấy Môi trường que sắnlậlà môi trường tối ưu cho việc MT Phân Giống gốc nhân giống cấp II Bảo 3.2.4 Quy trình nhân giống nấm cổ co Giống gố MT – PDA Cám Cấy chuyển a Sơ đồ quy trình nhân giống MT – PDA CA MT – Que sắn Cấy chuyể Giống cấp I Cấy chuyển Giống cấp Cấy chuyể Giống cấp I MT - Que sắ Giống cấp Cấy chuyề Bảo Bảo quản Bảo Giống cấp I 24 Hình 3.17 Sơ đồ quy trình nhân giống nấm linh chi Cổ co 25 b Thuyết minh quy trình nhân giống Qủa thể nấm linh chi Cổ cò thu hái vườn quốc gia KonKaKinh tỉnh Gia Lai bảo quản lạnh nhiệt độ oC để vận chuyển phịng thí nghiệm Cơng nghệ sinh học khoa Sinh – Môi trường Tiến hành phân phập môi trường Hansen thu giống nấm gốc phân lập từ mô thể nấm Giống gốc phải ổn định đặc tính di truyền, đảm bảo suất hiệu kinh tế Thực cấy chuyền giống gốc sang môi trường thạch PDA - CAM cấp I, hệ sợi nấm sinh trưởng tạo thành ống giống đĩa giống cấp I Ta tiến hành lựa chọn ống giống cấp I đạt tiêu chuẩn để sử dụng nhân giống cấp II mơi trường que ăn kín đáy chai, hình thành chai giống cấp II Sau tiến hành cấy vào bịch phôi để tiến hành lan tơ cho thể Danh mục tài liệu tham khảo Tiếng Việt [1] Đỗ Huy Bình (2004), "Cây th́c và đợng vật làm thuốc ở Việt Nam – tập II", Nhà xuất Khoa học và Kỹ thuật Hà Nội 2004 [2] Trương Thị Mỹ Chi, Nguyễn Thị Thu Hương "Nghiên cứu tác dụng chống oxy hoa in vitro và in vivo một số loài nấm Linh chi (Ganoderma lucidum) và nấm vân chi (Trametes Versicolor))", Trung tâm Sâm và Dược liệu Tp HCM – Viện Dược liệu, tr 135-141 [3] Nguyễn Thượng Dong (2005), "Nghiên cứu một số tác dụng sinh học ba loài nấm linh chi Ganoderma applanatum (Pers.) Pat.; G lobatum (Schw.) Atk vaf G lucidum (Leyss ex Fr) Karst" 26 [4] Nguyễn Lân Dũng (2004), "Công nghệ nuôi trồng nấm , tập I , II", NXB nông nghiệp [5] Cao Ngọc Điệp, Võ Văn Phước (2011), "Phân lập và nhận diện vi khuẩn phân giải cellulose", Tạp chí khoa học, tâp 18a, tr 177-184 [6] Nguyễn Hữu Đống, Đinh Xuân Linh, Nguyễn Thị Sơn (2000), "Nấm ăn – sở khoa học và công nghệ nuôi trồng", Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội [7] Lê Trung Hiếu, Trương Thị Như Tâm, Nguyễn Thị Ái Huyền, Lê Thùy Trang (2014), "Bước đầu nghiên cứu đánh giá khả kháng oxy hoá một số đối tượng làm nguồn dược liệu", Tạp chí khoa học và công nghệ, trường đại học khoa học Huế, tr 20-30 [8] Trần Hùng (2004), "Phương pháp nghiên cứu dược liệu", Đại học Y Dược Tp.Hờ Chí Minh [9] ThS Ngun Minh Khang (2010), "Công nghệ nuôi trồng nấm", Đại học Bình Dương, Bình Dương [10] Nguyễn Phương Đại Nguyên (2015), "Đa dạng thành phần loài chi Ganoderma ở vườn quốc gia Kon Ka Kinh tỉnh Gia Lai, Việt Nam", Hội nghị khoa học toàn quốc sinh thái và tài nguyên sinh vật lần thứ 6, tr 738-742 [11] Nguyễn Thị Ngọc Hằng Nguyễn Thị Thu Hương (2010), Nghiên cứu tác dụng chống oxy hoa theo hướng bảo vệ gan nấm linh chi đỏ (Ganoderma lucidum), Trung tâm và Dược liệu Tp HCM- Viện Dược liệu, tr 129 - 134 27 [12] Nguyễn Như Quỳnh (2006), "Tìm hiểu một loại nấm linh chi thu hái tại Thủ Đức – Tp Hồ Chí Minh" [13] Viện Dược liệu – Bộ Y Tế (2006), "Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ Dược thảo", NXB Khoa học Kỹ thuật Hà Nội, tr 279-292 [14] Lê Xuân Thám (2010), "Nấm công nghệ và chuyển hoa môi trường – Nấm linh chi Ganoderma lucidum Donk", Nhà xuất Khoa học Và Kỹ Thuật, Hà Nội [15] Lê Xuân Thám (1996), "Nghiên cứu đặc điểm sinh học và đặc điểm hấp thu khoảng nấm Linh chi Ganoderma lucidum (Leyss.ẽ Fr)Kát phân tích hạt nhân đánh dấu đồng vị và kỹ thuật liên hợp", ĐH Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội [16] Bộ Nơng nghiệp và Phát triển Nơng thơn (2009), "Giáo trình modun nhân giống nấm, Hà Nội" [17] Nguyễn Phúc Thuận (2001), "Giáo trình sinh hoa, phần 1", Nhà xuất Đại học Quốc Gia Tp Hờ Chí Minh [18] ThS Tạ Bích Thuận (2007), Đánh giá một số tính chất sinh y học nấm Linh Chi Ganoderma lucium, Đại học Khoa học Tự nhiên (ĐHQG Hà Nội) [19] Cồ Thị Thùy Vân (2015), "Nghiên cứu quy trình phân lập, nhân giống dạng dịch thể để nuôi trồng nấm đầu khỉ (hericium erinaceus (Bull.: FR) PERS.) và tách chiết một số polysaccharide co hoạt tính sinh học" 28 [20] Nguyễn Lân Dũng (2004), Công nghệ nuôi trồng nấm , tập I , II NXB nông nghiệp Tiếng Anh [21] Adams M., Plitzko I., Zimmermann S., Brun R., Kaiser M., Hamburger "Antiplasmodial M., Lanostanes Christen from the M (2010), Ganoderma lucidum Mushroom", pp 897-900 [22] Afyon A., Yaiz D., Helfer S., Konuk M (2005), "A study of wood decaying macrofungi of the western Black Sea Region", Turkey, pp 319-322 [23] Agarwal K., Verma S., Chakarborthy G S (2012), "In vitro antioxidant activity of different extract of Ganoderma lucidum " 3(1) 24] Boh B., Zhang J., Zhi-Bin L., Berovic M (2007), "Ganoderma lucidum and its pharmaceutically active compounds" 13, pp 265-301 [25] Carlos A.Z.C., Fabisan C.N.A., Jorge R-C., Melva L-L., Maria X.R-B., Marisa C.R.R (2011), "Optimizing a culture medium for biomass and phenolic compounds production using Ganoderma lucidum", an Journal of Microbiology 44(1), pp 215-223 [26] Claudia I.M., James o., Navindra P.S., David H., Koeffler p., Takashi K (2006), "Ganoderma lucidum causes apoptosis in leukemia, lymphoma and multiple myeloma cells", Leukemia Research, pp 841-848 [27] Chee W.L, Angelo V., Sheot H.C (2011), "Feed- forward neural network assisted by discriminant 29 analysis for the spectroscopic discriminantion of cracked spores Ganoderma lucidum", A prospective biotechnology production tool, AMB Express [28] Cheng P-G., Sabaratnam V., Abdullah N., Abdulla M.A., Kuppusamy U.R., Phan C-W (2013), "Polysaccharides-Rich Extract of Ganoderma lucidum (M.A Curtis:Fr.) P Karst Accelerates Wound Healing in Streptozotocin-Induced Diabetic Rats", Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine [29] Cheng P-G., Sabaratnam V., Abdullah N., Abdulla M.A., Kuppusamy R.U., Phan C.W (2013), "Polysaccharides-Rich Extract of Ganoderma lucidum (M.A Curtis:Fr.) P Karst Accelerates Wound Healing in treptozotocin-Induced Diabetic Rats" [30] Du M., Hu X.S., Zhao GH., Wang C (2008), "Biological properties of different protein extracts from selenium-enriched Ganoderma lucidum" 59(2), pp 134-147 [31] Helenoa S.A., Martinsa A.,Queiroz R.P.J.M., Barrosa L (2012), "ruiting body, spores and in vitro produced mycelium of Ganoderma lucidum from Northeast Portugal: A comparative study of the antioxidant potential of phenolic and polysaccharidic extracts", Food Research International 46, pp 135-140 [32] Helenoa A.S., Vaz A J., Almeida M.G., Tavares.C (2006), "Ganoderma lucidum methanolic extract: chemical characterization in phenolic compounds and 30 study of growth inhibitory activity in human tumour cell lines" 49, pp 159-170 [33] Hexiang Wang (2010), "Ganodermin, an antifungal protein from fruiting bodies of the medicinal mushroom Ganoderma lucidum", Peptides 27, pp 27-30 [34] H., Hirokazu M., Iwata N., Kamiuchi S., Suzuki F, Iizuka Hibino Y., Okazaki M., Shimizu Y (2013), "Antidepressant-like effects of a water-soluble extract from the culture medium of Ganoderma lucidum mycelia in rats", BioMed central [35] Jayasinghe C., Hur H., Lee G.W., Lee TS., Lee UY., Imtiaj A (2008), "Favorable Culture Conditions for Mycelial Growth of Korean Wild Strains in Ganoderma lucidum" 36(1), pp 28-33 [36] Jia J, Hua Y.S., Wu Y., Wang Q-Z., Li N-N., Guo Q-C., Dong X-C., Zhang X (2009), "Evaluation of in vivo antioxidant activities of Ganoderma lucidum polysaccharides in STZ-diabetic rats", Food Chemistry, pp 32-36 [37] Jiang J, Valachovicova T, Harvey K, Sliva D., Slivova V (2004), "Ganoderma lucidum Suppresses Growth of Breast Cancer Cells Through the Inhibition of Akt/NF-κB Signaling", pp 209-216 [38] Jiang J., Valachovicova T., Harvey Slivova V (2004), "Ganoderma K., Sliva D., lucidum inhibits proliferation and induces apoptosis in human prostate cancer cells PC-3", pp 1093-1099 31 [39] Ko H-H., Wang "Antiinflammatory J-P., triterpenoids Hung and C-F (2007), steroids from Ganoderma lucidum and G tsugae", Article in press 69, pp 234-239 [40] Lin H-J., Lin L-H., Haung C-F., Wu C-Y., Ou K-L., Chang Y-S (2014), "An Immunomodulatory Protein (Ling Zhi-8) from a Ganoderma lucidum Induced Acceleration of Wound Healing in Rat Liver Tissues after Monopolar Electrosurgery" [41] Lin J-M., Chen M-F., Ujiie T., Takada A., Lin C-C (1995), "Radical scavenger and antihepatotoxic activity of Ganoderma formosanum", Journal of Ethnopharmacology, pp 33-41 [42] Liu G-Q., Han W-J., Lin Q-L., Wang X-L (2012), "Improving the Fermentation Production of the Individual Key Triterpene Ganoderic Acid Me by the Medicinal Fungus Ganoderma lucidum in Submerged Culture, Molecules" 17, pp 12575-12586 [43] Ma B., Zhou Y.,Ma J., Ruan Y., Wen C-N., Ren W (2011), "Triterpenoids from the spores of Ganoderma lucidum", NCBI 3(11), pp 495 - 498 [44] Paterson R., Russell M (2006), "Ganoderma – A therapeutic fungal biofactory", Phytochemistry", pp 1985-2001 [45] Saltarelli R., Lotti M., Zambonelli A., Buffalini M., Casadei L., Vallorani L., Stocchi V., Ceccaroli P (2009), "Biochemical characterisation and antioxidant activity 32 of mycelium of Ganoderma lucidum from Central Italy", Food Chemistry, pp 143-151 [46] Sandrina A H., Anabela M., Maria J.R.P.Q., Celestino S-B., Isabel C.F.R F., Lillian B (2012), "Fruiting body, spores and in vitro produced mycelium of Ganoderma lucidum from Northeast Portugal: A comparative study of the antioxidant potential of phenolic and polysaccharidic extracts", Food Research International, pp 135-140 [47] Sandrina A.H., Ana P.E., Ana C., Jasmina G., Anabela M, Marina S., Maria R.P.Q., Isabel C.F.R.F (2013), "Antimicrobial and demelanizing activity of Ganoderma lucidum extract, p-hydroxybenzoic and cinnamic acids and their synthetic acetylated glucuronide methyl esters", Food and Chemical Toxicology, pp 95-100 [48] Wong KL., Chan P., Chang LP., Liu CF., Chao HH (2004), "Antioxidant activity of Ganoderma lucidum in acute ethanol-induced heart toxicity" 18(12) [49] Xu Z., Zhong Z., Chen L., Wang Y., Chen X (2011), "Ganoderma lucidum polysaccharides: immunomodulation and potential anti-tumor activities" 39(1), pp 15 - 27 [50] Yegenoglu H., Oke F., Aslim B (2011), "Comparison of Antioxidant Capacities of Ganoderma lucidum (Curtis) P Karst and Funalia trogii (Berk.) Bondartsev & Singer by Using Different In Vitro Methods", Journal Of Medicinal Food, pp 512-16 33 [51] Zaidman.Z-B., Nevo E., Mahajna J., Solomon P.W (2007), "Androgen receptor-dependent and -independent mechanisms mediate Ganoderma lucidum activities in LNCaP prostate Chemistry, pp 959-967 cancer cells", Foof 34 Phụ lục Hình vị trí lấy mẫu nấm linh chi Cở co Hình phân lập nấm linh chi Cở co sau ngày 35 Hình ảnh nhân giơng cấp mơi ống nghiệm 36 Hình ảnh nhân giống cấp đĩa petri: (a)- BTH, (b)-PDA, (c)- PDA-R, (d) Hansen ... gốc tự tốt 3.2 XÂY DỰN QUY TRÌNH NHÂN GIỐNG NẤM LINH CHI CỔ CO 3.2.1 Ảnh hưởng của môi trường dinh dưỡng đến sự sinh trưởng của sợi nấm phân lập Qủa thể nấm linh chi Cổ cò thu hái... chung nấm linh chi Cổ cị nói riêng, làm cho số lượng nấm linh chi Cổ cò giảm mạnh qua năm nguy cạn kiệt tự nhiên việc khai thác mức Vì lí nêu chúng tơi chọn đề tài ? ?Xây dựng quy trình nhân giống... Bảo Bảo quản Bảo Giống cấp I 24 Hình 3.17 Sơ đồ quy trình nhân giống nấm linh chi Cở co 25 b Thuyết minh quy trình nhân giống Qủa thể nấm linh chi Cổ cò thu hái vườn quốc gia KonKaKinh tỉnh