1.1 Đặt vấn đề
Nấm Linh Chi có tén khoa hoc 1a [Ganoderma lucidum
(W.Curt.:Fr.)Karst.] phiên âm theo tiếng Trung Quốc gọi la Ling zhi, theo
tiếng Nhật gọi là Reishi Ở Việt Nam còn có tên gọi là nắm Lim, nhưng thông dụng nhất vẫn gọi là nắm Linh Chi Linh Chi đã được người xưa kể lại với rất nhiều truyền thuyết, họ coi đó là tiên đan, linh dược, chữa được bách bệnh, trường sinh bat lão, cải tử hoàn sinh v.v
Ngày nay, khoa học càng phát triển nhưng Linh Chi vẫn được coi
như là một được thảo quý, đã được nhiều người, cơ quan, viện nghiên cứu
chú ý đến loài nắm này
Từ thời Hoàng đề (trên 4.000 năm về trước) cho đến nay Linh Chi
vẫn được coi là "7ượng dược" được xếp vào hàng siêu dược liệu, trên cả nhân sâm, là loại thuốc quý trong y học cổ truyền đã được ghi trong "Than nông bản thảo" cách đây 2.000 năm và trong "Bản thảo cương mục" (thế kỷ 16), nhưng nó mới thực sự chú ý nghiên cứu và sử dụng nhiều từ những
năm 1960 trở lai đây nhất là ở Trung Quốc, số lượng các loài nấm Linh
Chi được sử dụng trong công nghệ dược liệu ngày càng tăng, đặc biệt ở các
quốc gia Á Đông
Ở Việt Nam từ thế kỷ 18 Hải Thượng Lãn Ông đã có bài thơ "Lên
núi hái Linh Chi" chứng tỏ nước ta đã sử dụng Linh Chỉ từ rất lâu đời Từ đầu thế kỷ 17 các loài nắm Linh Chi đã được nuôi trồng ở Trung
Trang 2trên 200USD/kg quả thể khô đóng gói, giá xuất chính thức tại thành phố Hồ Chí Minh khoảng từ 15 đến 20 USD/kg khô Cho nên việc khai thác nguồn nắm mọc hoang đại trong tự nhiên trở nên khó khăn và khan hiếm
dần Từ đó người ta đã nghĩ đến việc nuôi trồng nắm Linh Chỉ trong điều
kiện môi trường nhân tạo, sử dụng các nguồn nguyên vật liệu có trong tự
nhiên hoặc các phế thải trong sản xuất Nông - Lâm nghiệp để làm cơ chất nuôi trồng nắm Linh Chi
Dựa vào đặc tính sinh học và sinh thái của nắm Linh Chi, Thừa Thiên-Huế có các điều kiện tự nhiên thích hợp cho quả thể nắm Linh Chi
sinh trưởng và phát triển
Vì vậy, việc "So sánh một số chúng giống nấm Linh Chi
[Ganoderma lucidum (W.Curt.:Fr.)Karst.] nudi trồng ở Hợp Tác Xã
Nông nghiệp Phú Lương 1, huyện Phú Vang, tính Thừa Thiên- Huế "
sẽ chọn ra những chủng giống nấm cho năng suất cao, chất lượng tót, thích ứng rộng và có tính di truyền ồn định, bố sung một số giống mới phục vu
cho sản xuất nuôi trồng nắm dược liệu, tăng hiệu quả kinh tế và cung cấp
nguồn dược liệu phong phú cho việc bào chế các loại được liệu chữa bệnh
hiểm nghèo bảo vệ sức khoẻ cộng đồng Việc hoàn chỉnh qui trình trồng nắm Linh Chi góp phần vào ngành sản xuầt nắm nói chung và nắm được liệu nói riêng của tỉnh nhà phát triển nhanh, mạnh và bền vững
1.2 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 1.2.1 Ý nghĩa khoa học
So sánh một số chủng giống nắm Linh Chi, được trồng trên 3 công
thức cơ chất trong điều kiện tự nhiên ở Thừa Thiên Huế, sẽ đóng góp cơ sở
Trang 31.2.2 Y nghia thwe tién
Từ kết quả nghiên cứu sẽ chọn lựa được một số chủng giống nắm
Linh Chi thích hợp cho sản xuất, góp phần xây dựng quy trình kỹ thuật sản xuất hoàn chỉnh Tăng thu nhập cho người dân, tận dụng được một số phế
thải Nông-Lâm nghiệp để sản xuất nắm, sau đó làm nguồn phân hữu cơ cho trồng trọt, góp phần bảo vệ môi trường, tận dụng thời gian nhàn rỗi của nông dân
1.3 Mục đích của đề tài
Dựa vào các chỉ tiêu nghiên cứu theo dõi và so sánh bốn chủng
giống nắm Linh Chi để lựa chọn một số chủng giống thích hợp, góp phần
xây dựng một quy trình sản xuất nắm hoàn chỉnh nhất, đơn giản, dễ áp
Trang 42.1 Tống quan tài liệu nghiên cứu
2.1.1 Sơ lược lịch sử về nuôi trồng nấm Linh Chi
Linh Chi có nhiều tên gọi: Nắm van nam, Nam than tiên, Cây điềm
lành, Có huyền diệu Nhưng tên Linh Chi là được dùng phổ biến nhất
Trong "Thần nông bản thảo" cách đây 2.000 năm đã đề cập 365 dược thảo
thì Linh Chi được xếp vào loại thượng dược Đến thời nhà Minh, Lý Thời
Trân đã viết "Bản thảo cương mục" gồm 2.000 loại thuốc thì Linh Chi vẫn
được xếp hàng đầu, ông còn phân biệt Linh Chi theo màu sắc: Đỏ, Vàng, Đen, Tím, Trắng, Xanh (Lục bảo Linh Chì)
Linh Chi phân bố khắp nơi trên thế giới, hoại sinh hoặc ký sinh rộng khắp ở các loài cây lá rộng đến lá kim, thậm chí ở các tre trúc, đừa,
cau, cọ đừa và nho đều có cả Linh Chi tiết ra các men phân giải màng tế bao endopolygalacturonase va endopectin methyl-translinase có tác dụng lam nhiin té bao thue vat rất mạnh gây nên tình trạng các loại gỗ và rễ cây
bị mủn ra.[
Theo Wang nắm Linh Chỉ được nuôi trồng ở Trung Quốc năm 1621 chính bởi giá trị dược liệu cao của chúng [10] Ngay từ thời kỳ hoàng đế trong các thư tịch cô đã ghi chép về giá trị của Linh Chi (Zhao Ji Ding và Zhang Xiao - Quing, 1994) cách nay đã trên dưới 4.000 năm
Trong "Bản thảo cương mục" các ghi chép đã chuẩn mực hơn và
nam Linh Chi càng được coi trọng hơn Các nhà Y dược Việt Nam đã kế
tục Lý Thời Trân phát hiện Linh Chi ở nước ta như Lê Quý Đôn đã chỉ rõ là "nguồn sản vật quý hiếm của đất rừng Đại Nam" Gần đây người ta lại
Trang 5[10]
Chính vì công nghệ dược học Linh Chi mà các nhà nghiên cứu
Trung Quốc đã đạt được các thành tựu lớn về điều tra, sưu tầm, bảo tồn và khai thác triệt để họ Ganodermataceae Cho đến nay đã có ít nhất 10 lồi
được chính thức ni trồng làm thuốc: G applanatum, G ambonense,
G gorninose, G capense, G japonicum, G lucidum, G tsugae, G tenue, G formosarum và vài loài Amauroderma [10]
Theo nghiên cứu của Ngô Anh ở Việt Nam, riêng ở Thừa Thiên Huế họ Ganodermataceae Donk rất đa dạng phong phú có đến 39 loài thuộc
3 chi Amauroderma, Ganoderma va Haddowia Trong đó có 5 loài được làm dược liệu: G amboinense, G applanatum, G capense, G lucidum va
G sinense [1]
Người nuôi trồng nấm Linh Chi đầu tiên ở Việt Nam là kỹ sư Nguyễn Thanh, ông đã đưa được nam Linh Chi chuẩn từ Trung Quốc về
Việt Nam Nhờ đó vào cuối năm 1978 dưới sự hướng dẫn của giáo sư Trịnh Tam Kiệt lần đầu tiên nấm Hồng Chi Trung Quốc đã ra quả thể trong
phòng thí nghiệm, nhưng mãi đến năm 1987 sau khi kỹ sư Nguyễn Thanh,
TS Nguyễn Thiện Tịch cùng với thạc sĩ Cổ Đức Trọng đi tìm Linh Chi
mọc hoang ở vùng rừng núi tỉnh Lâm Đồng đề tìm nguồn giống ban đầu thì
Linh Chi mới thực sự được đưa vào nghiên cứu trồng trọt và sản xuất
Đến năm 1988, xí nghiệp được phẩm Trung ương 24 đã nghiên cứu
các đạng thành phẩm, cùng sự khảo sát về dược lý của giáo sư Bùi Chí Hiếu tại viện y học thành phố Hồ Chí Minh và khảo sát về lão khoa lâm sàng của giáo sư Nguyễn Thiện Thành tại bệnh viện Thống Nhất, đã đưa ra những kết luận bước đầu rất quan trọng về giá trị của Linh Chi Việt Nam từ
Trang 6Ducke, bắc Calorina ông đã phân tích về quan hệ chủng loại phát sinh của các nhóm loài Ganodermataceae (15 loài) bằng kỹ thuật chân đoán cấu trúc DNA ribosome (1995) Đáng lưu ý là tiến sĩ Hseu ở Đại học Quốc gia Đài Loan cũng dùng phân tích phổ izozyme và đặc điểm hệ sợi, sự phát sinh bào tử màng dày trong nuôi cấy thuần khiết của các chủng, loài Ganoderma
để đánh giá mức quan hệ họ hàng của chúng (khoảng 9 loài) trong luận án
tiến sĩ năm 1980 [5]
2.1.2 Đặc tính sinh học của nắm Linh Chi
2.1.2.1 Mũ nắm
Nam Linh Chi hay con goi là nắm Lim, quả thể có cuống dài, ngắn hay hầu như không có cuống và mũ đính lệch hay đính bên, có màu nâu đỏ bóng
Mới sinh có đạng cục lồi, tròn, sau phát triển thành dạng thận, dạng
tâm lượn sóng nhiều hay ít, hơi có vân ran dạng phóng xạ Mép nắm mỏng
hoặc hơi tù, lượn sóng, hơi chia thuỳ ở những mũ nắm có kích thước lớn
Mũ mới sinh có mầu trắng, có sắc thái vàng lưu huỳnh, sau chuyển sang
màu vàng, vàng rỉ sắt, nâu, nâu đỏ, nâu hồng tím tạo nên một lớp vỏ
bóng nhoáng như quét sơn hoặc vécni Kích thước mũ 2 - 25 x 3 - 30 cm,
day 0,5 - 1,5 cm
2.1.2.2 Thé sinh san
La dang éng màu nâu nhạt đến nâu, một lớp, dày 0,1 đến 0,7cm
Mô của ống và thịt nắm đồng nhất Miệng ống lúc non có màu trắng sau có sắc thái màu vàng lưu huỳnh, màu trắng vàng khi già khô hoặc khi bị sờ mó thì chuyển sang màu nâu, nâu ri, sẫm, miệng ống hình tròn, trong 1mm có
Trang 7thường đính ở bên phần lõm vào của mũ nắm Cuống mới hình thành có màu trắng sau chuyển sang màu vàng đến nâu và phủ vỏ bóng, có màu
sắc và cấu trúc tương tự như mũ nắm Cuống hình trụ, gần như tròn hoặc
hơi dẹp, chiều dài có kích thước 3-20 x 0,5-2 cm Mô của cuống đồng nhất
với mô của mũ
2.1.2.4 Bào tử
Hình trứng hoặc hình trứng cụt đầu, có phần phụ không màu phát triển bao quanh lỗ nây mầm có màu vàng rỉ sắt, bào tử có vỏ với cấu trúc 2 lớp màng, màng ngoài nhẫn, không màu, màng trong màu nâu rỉ, phát triển
thành những gai nhọn vươn sát màng ngoài Kích thước 5-6,5 x 8,5-11 um [8] [14]
Mặt dù hình thái bên ngoài rất biến đổi đa đạng song về cấu tạo hiển vi của bào tử đảm thì có độ ổn định rất cao dù là chủng nuôi trồng ở Nhật, Trung Quốc, chủng nấm Lim Hà Bắc hay chủng Đà Lạt
Lớp vỏ bóng trên mặt mũ được tạo nên do một lớp sợi nam dang chuỳ không có vách ngăn ngang (phần phình lớn đạt 8 - 10 um dudng kinh)
sắp xếp theo dạng bờ rào tạo nên Hệ thống sợi của quả thể thường do sợi
cứng (không vách, màng dày) và sợi bện phân nhánh nhiều, kích thước nhỏ hơn tạo nên Kích thước sợi 1,5-6,5 um đường kính Hệ sợi khi nuôi cấy thuần khiết lúc đầu có màu trắng sau có màu sáng, màu vàng có hình thành sợi nguyên thuỷ vách mỏng có màng ngăn ngang và hình thành bào tử vô tính với kích thước 9,5-11 x 12,5-15 um [8]
Trang 8như mọc từ đất, nhưng thực ra chúng phát triển hệ sợi theo các rễ cây
ngầm, rồi thể quả vượt lên trên mặt đất Ở miền Bắc dé gap tig nam Lim,
ở rừng Lâm Đồng dưới tán rừng thông, cũng dễ gặp Linh Chi mọc từng
đám
2.1.3 Chu kỳ sống của nắm Linh Chi
Bào tử đảm đơn bội trong điều kiện thuận lợi nảy mắm tạo nên hệ SỢI SƠ cấp, trong thực nghiệm tỉ lệ nây mam khá thấp ở nhiệt độ 28 - 30°C chỉ đạt 2-10% Hệ sợi sơ cấp đơn nhân, đơn bội mau chóng phát triển phối hợp với nhau tạo thành hệ sợi thứ cấp (tức hệ sợi song hạch), phát triển và
phân nhánh rất mạnh tràn ngập khắp giá thẻ
Lúc này thường có hiện tượng hình thành bào tử vô tính màng dày, chúng dễ dàng rụng ra và khi gặp điều kiện phù hợp sẽ nây mầm cho ra hệ sợi song hạch tái sinh Hệ sợi thứ cấp sẽ phát triển mạnh đạt đến giai đoạn
cộng bào tức là các vách ngăn được hoà tan
Tiếp đó là giai đoạn sợi bện kết chuẩn bị cho sự hình thành mầm mống thể quả Đây chính là giai đoạn phân hoá hệ sợi từ hệ sợi nguyên
thuỷ hình thành các sợi cứng màng dày, ít phân nhánh, bện kết lại thành các
cấu trúc bó, được cấu kết bởi các sợi bện phân nhánh rất mạnh Từ đó hình thành các mầm nắm màu trắng mịn vươn dài thành các trụ tròn mập, phần đỉnh trụ bắt đầu xoè tán, trong lúc lớp vỏ đỏ cam xuất hiện Tán lớn dần hình thành bào tầng và bắt đầu phát tán bào tử đảm liên tục cho đến khi
Trang 9Chi
Với các phương pháp cô điển trước đây người ta đã phân tích các thành phần hoá được tổng quát của Linh Chi như sau: + Nước: 12 - 13% + Cellulose: 54 - 56% + Lignin: 13 - 14% + Hợp chất Nitơ: 1,6 - 2,1% + Chat béo (kế cả đạng xà phòng): 1,9 -2% + Hop chat Phenol: 0,08 - 0,1% + Hợp chất Sterol toàn phần: 0,11 - 0,16% + Saponine toan phan: 0,3 - 1,23% + Alcaloide và Glucoside tổng SỐ: 1,82 - 3,06% [5]
Từ những năm 1980 đến nay, bằng các phương pháp hiện đại đã xác
định chính xác gần 100 hoạt chất và dẫn xuất trong nắm Linh Chi Dẫn liệu
từ Medline cho thấy cũng có đến gần 200 công trình nghiên cứu trong lĩnh
vực này (từ 1983 - 1993) (Bảng 1)
Trong số các hoạt chất, nhóm có bản chất protein nổi bật với Ling
Zhi - 8 do các nhà khoa học Nhật Bản tìm ra (Kino, K ¿/ a/ 1989, 1991 ) được chứng minh là một tác nhân chống dị ứng phổ rộng và điều hoà miễn
Trang 10Nhóm Steroide khá phong phú ở các nắm Linh Chi với tác đụng chủ
đạo ức chế sinh tổng hợp cholesterol
Bảng 1: Thành phần hoạt chất cơ bán ớ nắm Linh Chi Hoạt chất Nhóm Hoạt tính dược lý Cyclooct asulsus Uc chế giải phóng nhóm Histamine
Adenosine Nuceotide Ức chế kết dính tiểu cầu, thư giãn
cơ, giảm đau
Dẫn xuất Proteine Chống dị ứng phổ rộng, điều hoà
miễn dịch
Linh Zhi-8 Ancaloide Tro tim
Ganodosterone Steroide Giải độc gan
Lanosporeric acid A | Steroide Ức chế sinh tổng hợp
Lanosterol Steroide Choesterol
II, II, IV, V Steroide Choesterol
Ganoderans A, B, C Polysaccharide | Ha duong huyét
Beta - D-Glucan Polysacc Chống ung thư, tăng tính miễn dịch
BN- 3B: 1, 2, 3, 4 Polysacc
D-6 Polysacc Tăng tổng hợp Protein, tăng chuyển
hoá acid nucleic
Ganoderic acidR,S | Tritepenoide | Ức chế giải phóng histamine Ganoderic acid B, D, | Triterpen F,H, K, Y Hạ huyết áp, ức chế ACE Ganoderic acids Triterpen Uc chế sinh tổng hợp chol Ganodermadiol Triterpen Hạ huyết áp, ức chế ACE Ganodermic acids Mf | Triterpen Uc chế sinh tổng hợp chol Ganodermic acids T.O | Triterpen Uc ché sinh tông hợp chol
Lucidone A Triterpen Bao vé gan
Lucidenol Triterpen Bao vé gan
Ganosporelacton A Triterpen Chống khối u Ganosporelacton B Triterpen Chống khối u
Oleic acid dẫn xuất Acid béo Uc chế giái phong histamine
Trang 11
(Theo Medline, 1993; Kino va CTV 1989)
Nhóm các ester với acid béo không no linoleic ghi nhận vào 199]
có hoạt tính chống ung thư với công trình của Lin, C, N e/ ai, đồng thời các tác giả còn tìm ra một Lanostaroid và một Steroid mới cũng có tác dụng ức chế các tế bào ung thư [10]
Hikino,H ¿/ a/ từ 1985 - 1989 chứng minh hoạt lực hạ đường huyết
của nhiều polysaccharid đó là các heteroglycan có cả hoạt tính chống ung thư [10]
Các nghiên cứu về polysaccharid không tan trong nước của các tác
gia Nhat Ban (Sone, H H et al, 1985; Takashi, M et al 1985 va Trung
Quéc (Cheng, H H et al 1982, Liu G T et al, 1998 ) chứng tỏ hiệu lực chống khối u rat rõ, thậm chí làm tan khối u với các loài G applanatum và
G lucidum [10], [16]
Trong các nhóm hoạt chất của nắm Linh Chi có tác dụng được lý mạnh nhất là Saponine - Triterpenoids - các acid ganoderic Trong đó có
Ganoderic acid B Chúng thể hiện hoạt lực ức chế giải phóng histamine, ức
chế Angiotensine Conversion enzyme (ACE) ức chế sinh tổng hợp cholesterol và hạ huyết áp [10] [16]
2.1.4.2 Tác dụng trị liệu cơ bán của nắm Linh Chi
Trên thực tế, có thế coi Linh Chi không có độc tính Quá trình kiểm tra đã được thực hiện ở Việt Nam, tại một số cơ sở sau (Theo GS Bùi Chí Hiéu et al 1993)
+ Phan nghiém kiém vién duoc pham - Bộ y tế
Trang 12+ Viện dược liệu, Hà Nội (Đàm Nhận 1994 - 1995)
Kết quả cho thấy dùng liều cao (gấp 50 - 150 lần liều dùng thông thường cho người) cũng không gây nhiễm độc cấp tính, hay trường diễn
[5]
Bệnh gan và tiết niệu cũng được điều trị khả quan bằng chế phẩm từ
Linh Chi Bệnh viện ở Sơn Đông - Trung Quốc dùng một loại "súp" Linh
Chi để giải độc và bổ gan có kết quả tét (> 90%) cho 70.000 ca (Lui Xing
Ja 1994) [5]
Theo kết quả thí nghiệm của Nguyễn Thị Chính (1999) trên chuột
nhắt trắng có trọng lượng 18-22 gam với liều cho chuột uống 160g/kg trọng lượng Liều sử dụng của chuột như vậy là gấp 800 lần so với liều sử dụng cho người 0,2 gam/kg trọng lượng Với liều cao như trên, chuột uống trong
một tuần nhưng không chết chứng tỏ nắm không có độc tố của latoxin và
an toàn đối với người sử dụng [8] Công trình của GS Zhi bin Lin et al (1994) về tác dụng chống ung thư của các chế phẩm từ Linh Chi chứng tỏ phô tác dụng rộng Nguyên lý hiệu dụng là tăng khôi phục hệ miễn dịch đã
thử nghiệm lâm sàng trên hàng chục bệnh nhân tại bệnh viện Xanh pôn, Hà Nội cũng cho kết quả tương tự
Trong tình hình nhiễm HIV càng gia tăng, Linh Chi đã được đưa
vào chữa cho các bệnh nhân nhiễm HIV tại bệnh viện Quan Yin Chine ở
Fransico và đã có những kết quả tốt (1987) Được cơ quan quản lý thực phẩm và dược phẩm (FDA) của Hoa Kỳ cho phép sử dụng trong khi chờ
các loại thuốc công hiệu hơn ra đời [10]
Theo kết quả nghiên cứu của Kim B K (1996), trong quả thể của
G lucidum có một số hoạt chất như Methanol, Hexane, Ethyl acetate và
những chất cơ bản khác có tác dụng kìm hãm quá trình phát triển của viruc
Trang 13tốn thương do phóng xạ ở mô và tế bào bởi Linh Chi có khả năng đào thải phóng xa [1] 2.1.5 Các công nghệ nuôi trồng nắm Linh Chỉ trong nước và trên thế giới Hiện nay có hai công nghệ chính được áp dụng phô biến: Trồng trên gỗ khúc và trồng trên cơ chất hỗn hợp
Tuỳ điều kiện từng nước và từng vùng khí hậu mà người ta chọn
cách trồng phù hợp Ở Việt Nam hoàn toàn trồng bằng mùn cưa cao su Các thí nghiệm trồng trên gỗ khúc và trên các mùn cưa khác đã được tiến hành
ở một số trại nắm cho thấy có thé trồng ra được nhưng không thể sản xuất lớn và khó khăn về nguồn nguyên liệu phục vụ trong xử lý cơ chất và đất
nen
Biện pháp phủ đất cũng thường được khuyến cáo Ngồi ra cơng
nghệ ni cấy chìm hệ sợi thu sinh khối cũng được thử nghiệm ở nhiều nơi,
song chất lượng vẫn chưa được thuyết phục
Việc nuôi trồng quy mô lớn hiện đại có thể coi như bắt đầu từ 1936
với công trình của GS Dật Kiến Vũ Hưng Cho đến nay, ở Nhật Bản người ta vẫn ưa trồng trên gỗ vùi dưới đất và cho rang qua thé lớn và chất lượng hơn Tuy vậy công nghệ này dẫn đến tình trạng suy kiệt nguồn gỗ, nhất là ở
Đài Loan, Nhật Bản, Trung Quốc
Công nghệ tận thu các phế thải Nông - Lâm nghiệp tỏ ra thích hợp hơn vì giúp cho xử lý các phế thải gây ô nhiễm môi trường như các loại
mùn cưa, vỏ bào, cành cây, rơm rạ, trấu, bã mía, vỏ cà phê, vỏ lạc đều có
Trang 14Trong quy trình này, kỹ thuật vùi đất là rất cần thiết, rất tiếc là ở
Việt Nam chưa được phô biến lắm và cũng có ý kiến e ngại về nguồn gỗ khúc, trong tình trạng phá rừng hiện nay Theo kỹ thuật của Trung Quốc cây gỗ chặt hạ bỏ cành nhánh, cưa thành khúc 80 - 120cm mặt cắt quét vôi,
chất đống ủ khoảng 1 tháng sau đó tiến hành các bước sau:
- Cây giống: Giống sản xuất thường là hỗn hợp mùn cưa, cám, bột
bánh đầu ít khi dùng giống hạt ngũ cóc vì dễ bị chuột mối mọt cắn phá,
dùng búa hoặc khoan đục những hành lỗ so le đường kính 1 - 1,5cm dọc theo khúc gỗ, cách nhau 5cm, sâu 3 - 5cm Gieo meo giống cho đây lỗ cấy, sau đó đậy lại bằng chính miếng gỗ đục từ lõi ra Dán giấy parafin hoặc nhỏ sáp lên bịt kín lỗ cấy Các thao tác làm kế tiếp nhau và nhanh để tránh
nhiễm tạp
- Nuôi ủ gỗ: Sau khi gieo meo giống, gỗ được xếp đồng quây vuông
hoặc hình chữ nhật cao 50 - 80cm Phủ vải nhựa hoặc bạt lên trên, tránh bọc chặt vào các dầu của gỗ Độ am trong déng ủ 75 - 80%, nhiệt độ khoảng 25 - 30°C Sau khoảng 15 - 20 ngày kiểm tra sự lan toả của sợi nắm và chuyền sang ủ trong đất + cát Gỗ cũng xếp đống chồng lên nhau và phủ
đất + cát đã khử trùng bằng Formalin kỹ Tưới phun âm trong khoảng 30 ngày
- Vùi đất: Các khúc gỗ được cưa thành đoạn 15 - 20cm Vùi cắm các khúc gỗ xuống nền đã làm kỹ và khử trùng diệt mối, kọt, sâu bọ Bên trên là mái vòm che mưa nắng và ánh sáng trực xạ Người ta vùi các khúc gỗ đề nhô lên cỡ 5 - 7cm, ở Nhật thì người ta ding cát sạch + đất mịn phủ
kín lên dày trên lớp gỗ khoảng 2 -3 cm Tưới phun sương âm giữ độ khoảng 80 - 95% và thơng thống Sau 15 - 20 ngày sẽ xuất hiện mầm quả
thể Từ giai đoạn này nấm rất hay bị sâu, mối, sên ăn phá, cần chăm sóc
Trang 15- Thu hoạch: Hái tán nắm chín, đem phơi, say ở nhiệt độ 40 - 45°C trong 2 - 3 ngày Như vậy theo quy trình này, từ lúc gieo meo giống cho tới khi thu hoạch đợt I co thể từ 4 - 5 tháng Nếu chăm sóc tốt khoảng 2 - 2,5
tháng sẽ thu tiếp đợt sau và có thé thu hái trong vòng ba năm 2.1.5.2 Quy trình nuôi trồng trên giá thể tổng hợp
Thường được áp dụng phố biến ở nhiều nước trên thế giới và đã
được áp dụng ở Việt Nam
- Phối trộn cơ chất: Tận dụng mùn cưa các loại, cần lưu ý tránh mùn cưa mủn mốc Tỷ lệ mùn cưa nên đạt 30-60%, phần còn lại dùng rơm rạ
băm nhỏ, trâu, bã trà khô, vỏ hạt bông, vỏ lạc, cành thân cây nhỏ xử lý
hỗn hợp cơ chất này với nước vôi 1,5% trong một ngày
Nguồn dinh dưỡng bổ sung quan trọng là các loại cám ngũ cốc, tỷ lệ
nên phối trộn khoảng l5 - 20% Nên cho thêm (NH¿}» SO¿ (0,5%),
Superphosphate (1 - 1,5%) và MgSOa 7H;O (0,05%) Căn cứ vào hàm lượng Kali rất cao trong nấm nên cần bổ sung thêm Kali (KCI hoặc K;SO¿), độ 4m sau cùng đạt 65 - 70%
- Khử trùng giá thể: Sau khi cơ chất hỗn hợp được nhồi vào bịch PP hay chai PP với trọng lượng 0,5 - 1,5kg, việc tiếp theo hết sức quan
trọng là hấp khử trùng Vì độ nhiễm tạp ban đầu của cơ chất hỗn hợp rất lớn do vậy phải khử trùng kỹ hoặc 3 lần x 45 phút trong nồi Autoclave
(121C, Iatm) hoặc bằng lò hơi nước không áp suất cao (85 - 95°C) trong 5
- 6 gid, sau đó để nguội
- Cấy giống: Cấy giống vào giữa khối cơ chất (khoảng 3 - 5% khối lượng so với cơ chất), nuôi ủ trong phòng tối (25 - 30°C), sau 25 - 35 ngày
Trang 16- Tưới đón nấm: Hệ sợi bắt đầu bện kết sau 25 - 30 ngày, cần chuyển bịch (chai) vào nhà trồng có ánh sáng khuếch tán nhẹ, nhiệt độ hạ thấp 21 + 3C có thể vùi dưới đất hoặc treo, xếp trên giàn, kệ mở nút bich cho mầm nắm vươn ra đễ đàng Độ âm phòng duy trì 80 - 90% Nên thơng thống phịng ni cho tán nắm xoè lớn, hình quạt chuẩn, ít bị di dang
e Sơ đồ quy trình trồng nắm Linh Chỉ: Mùn cưa gỗ Mẫu nắm tươi Cây gỗ mềm Tron Cua, nhồi cơ duc chat GiDng ge lỗ Bảo quản
BOch nOm GiOng sn GO khe
Cấy giống Cấy giống ủ26‡2°C ủ 26+2°C TL trLlng TO trong [> Pha soi ——] Anh sâng khuLlch tân nhL] 350 lux NhiLIt LIL] 22 + 2°C
QuO thO QuD th
Pha thu hái
(Theo Lê Duy Thắng, 1995)
Theo quy trình này tán nắm sẽ thành thục 35 - 45 ngày tức là 2 - 2,5 tháng kế từ khi cấy giống Mỗi bịch (chai) thường cho một tán nấm lớn khoảng 20g tươi (với 350 - 500g cơ chất tươi) như vậy hiệu suất đạt 4 - 9%
Trang 17hiệu suất thu được lại nhỏ: 2,5-3,5% Thực tế các nước trong vùng cũng đạt hiệu suất 5-8% 2.1.6 Tiềm năng của huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên- Huế với việc trồng nắm 2.1.6.1 Điều kiện tự nhiên Vị trí địa ly
Phú Vang là huyện đồng bằng ven biển, nằm về phía Đông Bắc của
tỉnh Thừa Thiên Hué, có vị trí địa lý như sau:
+ Phía Bắc giáp biến Đông
+ Phía Nam giáp huyện Hương Thuỷ và Thành phó Huế
+ Phía Đông giáp huyện Phú Lộc + Phía Tây giáp huyện Hương Trà
Phú Vang được đánh giá là một trong những huyện có vị trí địa lý
khá thuận lợi cho phát triển kinh tế xã hội của tỉnh Thừa Thiên Huế bởi tài
nguyên phong phú, có biển và đồng bằng thích hợp đề phát triển kinh tế
toàn diện và tổng hợp
Ranh giới của huyện được bao bọc bởi biển Đông, sông Hương, sông
Như Ý, sông Lơi Nông và đầm Cầu Hai Ngoài ra còn nằm trên trục đường
giao thông quan trọng của vùng và của tỉnh như: Quốc lộ 49 A, B, tỉnh lộ 10
Toàn huyện có một thị trấn ( Thuận An ) và 19 xã với tổng diện tích tự nhiên là 280,32 kmẺ Dân số đến cuối năm 2005
Trang 18Huyện Phú Vang có dạng địa hình khá bằng phẳng, với độ đốc < 1%
và cao trình biến thiên từ 0 m đến 2,5 m so với mặt nước biên, phô biến từ
0,8 m đến 1,5 m Nhìn chung địa hình toàn huyện thấp dần từ Tây Bắc sang
Đông Nam nhưng không lớn, tuy nhiên có những khu vực địa hình trũng
hay gò cao hơn địa hình chung, có thể chia làm ba vùng chính như sau:
Vùng cồn cát ven biển: Đây là khu vực có địa hình cao nhất, được hình thành do các cồn cát ven biển khá nổi bật so với các khu vực xung quanh, vùng đất này có đạng địa hình sống trâu được giới hạn bởi phía Đông là Biển và phía Tây là phá Tam Giang nên rất thuận lợi cho phát triển nông nghiệp
Vùng đồng bằng: Được hình thành bởi vùng đồng bằng ven sông và
dam phá nên khá bằng phẳng rất thuận lợi cho phát triển sản xuất nông
nghiệp
Vùng đầm phá: Chủ yếu là phá Tam Giang được hình thành bởi đầm
Thuỷ Tú và đầm Thanh Lam Khí hậu
Huyện Phú Vang nằm trong vùng khí hậu nhiệt đới gió mùa, có hai mùa mưa nắng rõ rệt Mùa mưa bắt đầu từ tháng 9 năm trước và kết thúc tháng 3 năm sau, mùa nắng từ tháng 4 đến tháng 8 Đồng thời, chịu ảnh hưởng trực tiếp hoạt động của hai loại gió mùa chính, đó là gió mùa Đông Bắc và gió Tây Nam Gió Đông Bắc hoạt động bắt đầu từ tháng 10 và kết thúc vào tháng 3 năm sau thường gây mưa, lụt vào tháng 10, 11 Gió Tây
Trang 20900 + 800 4 700 + —®— NHIỆT ĐỘ (0C) 600 + —+ ẨM ĐỘ (%) 500 + > 400 4 —— MƯA (mm) 300 + , ~*~ NANG 200 + (giỏ) 100 + + > 0- (2 I IV VI VII x XII
Đồ thị 1: Đồ thị biểu diễn lượng mưa và nhiệt độ
Từ tháng I1 đến tháng 3 năm sau nhiệt độ trung bình thấp, thấp nhất
vào tháng 1, nhiệt độ trung bình các tháng còn lại đạt trên 26°C, cao nhất là các tháng 6 và 7 Nhiệt độ tối cao tuyệt đối 1a 38,1°C vào tháng? và tối thấp tuyệt đối là 15,8°C vào tháng 1
Âm độ trung bình 10 năm qua các tháng đều >77,3%, cao nhất vào tháng 12 và thấp nhất vào tháng 7
Lượng mưa trung bình 10 năm thấp ở các tháng 2.3.4 và lượng mưa thường tập trung vào các tháng 9, 10,11 Trong đó, lượng mưa đo được ở tháng cao nhất là tháng 11 dat 854,47mm, thấp nhất là 59,5mm vào tháng 3
Trang 21Khả năng bốc hơi trung bình năm là 977 mm/ năm Lượng bốc hơi nhiều nhất từ tháng 5 đến tháng 8 ( tháng 7 là 138 mm ), tháng có lượng bốc hơi thấp nhất là tháng 2 cũng đạt 39,6 mm Bảng 3 Diễn biến khí hậu thuỷ văn của huyện Phú Vang từ tháng 12/2005 đến tháng 6/2006 Tháng Nhiệt độ °C) Ấm độ (%) L.Mưa — Giờ nắng (mm) (giờ) T.B max min T.B min Ngày R 12/2005 19,2 27,2 14 95 56 27 500 9 01/2006 199 33,5 148 92 60 14 179 89 02/2006 216 30,8 17,1 91 64 17 88 81 03/2006 22,7 35,3 14,8 90 65 9 19 108 04/2006 264 3725 18,6 85 53 11 52 186 052006 273 36,0 18,7 80 39 11 60 239 06/2006 30,1 39,6 243 73 41 4 13 279
(Nguôn: Trung tâm KTTV Thừa Thiên Huế, 2005-2006.)
Qua các số liệu về khí tượng ta thấy nhiệt độ trung bình và âm độ
trung bình thích hợp cho nắm Linh Chỉ sinh trưởng và phát triển
Chế độ thuỷ văn
Dòng chảy của sông ngòi trên địa bàn huyện là sản phẩm trực tiếp của mưa nên phân bố không đồng đều theo không gian và thời gian Vùng mưa nhiều thì dòng chảy nhiều, dòng chảy chủ yếu tập trung vào mùa lũ ( tháng 9, tháng 12 ) Tổng lượng dòng chảy lũ chiếm 80 - 85 %/ năm đối
Trang 22Khu vực huyện Phú Vang chịu ảnh hưởng trực tiếp của chế độ thuỷ
văn Sông Hương và có các chế độ thuỷ văn như sau: + Diện tích lưu vực: 3.000 km”
+ Lưu lượng mùa lũ là 12.000 m”/s + Lưu lượng mùa kiệt là 1 m?/s
Thực tế cho thấy lưu lượng ngày tháng kiệt thường rơi vào tháng 4 hoặc tháng 8, đôi khi xuất hiện sớm hơn hoặc muộn hơn, đao động trong
khoảng 1 tháng Theo kết quả tính sơ bộ lưu lượng kiệt nhất ngày trong năm của lưu vực sông Hương là 8 mỶ/⁄s Vì vậy, những biện pháp tích cực trong mùa mưa để điều tiết phục vụ dùng nước trong mùa khô là cần thiết
Ngồi ra con sơng chính cấp nước cho vùng Nam sông Hương dé qua huyện Phú Vang là sông Lợi Nông- Đại Giang dài 27 km và một nhánh
rẻ lớn khác của sông Hương là sông La Ÿ- Chợ Nọ, lưu vực của sông này bao gồm thị trấn Thuận An và Xã Phú Thanh
Nhánh rẽ của sông Lợi Nông là sông Như Ý có chiều đài 12 km Lưu
vực của sông này bao gồm các xã như: Phú Dương, Phú Thanh, Phú Mậu,
Phú Tân, Phú An và Phú Mỹ Từ sông này có nhiều rạch nước dẫn vào khu
vực sản xuất như vùng Mộc Hàng, Phú Khê, Vinh Vệ, Cầu Lông và Xuân Lương Hồ
2.1.6.2 Tình hình kinh tế- xã hội
a Ax ^
Dân sô và lao động
- _ Tổng số dân đến năm 2004: 181.149 người, mật độ 647người/km”
Trang 23Lao động đang làm việc ngành nông lâm nghiệp thuỷ sản có mức
độ thu hút đông nhất ,chiếm 89% Tuy nhiên phần lớn người dân ở khu vực làm nghề cá có trình độ văn hoá thấp,tỷ lệ thất nghiệp cao và đây là một trong những điểm khó khăn làm cản trở quá trình phát triển kinh tế xã hội
Tình hình sắn xuất và cơ cấu cây trồng trong nông nghiệp năm 2001- 2005
Bảng 4 Diện tích một số cây trồng qua các năm (ha) 2001 2002 2003 2004 2005 Diện tch 1 Cây lương thực - La 10297 10287 10.293 10.254 10.211 + Đông Xuân 5.815 5.704 5.647 5.535 5.410 + Hi Thu 4482 4583 4.646 4.719 4.801 - Ng: 100 102 82 82 82 - Khoai lang 1.480 1.453 1.188 1.100 1.120 - San 644 685 816 860 = 1.235 2 Cây thực phẩm
-Rau câc loại 850 856 1.019 1.100 1.150
- Dau cac loai 418 425 437 440 440
Trang 24Bảng 5: Năng suất một số cây trồng chính 2001-2005( tạ/ha) Năm 2001 2002 2003 2004 2005 Lúa cả năm 37 38,41 44,54 47,01 44,03 - Dong Xuan 35,52 41 46,55 47,60 40,33 - Hi Thu 38,92 35,2 42,1 46,32 48,22 Ng 18 18 20,24 20 22,07 Khoai lang 55,54 55,45 56,48 56,08 57,7 San 59,1 68 104 105 205 Lac 15,57 16,59 17,61 17,36 18,1 Virng 1,63 1,60 1,64 1,64 1,65
Rau câc loại 85,44 84,5 91,27 87,51 88,30
Dau cac loai 3,83 3,83 4,05 4,09 40
Trang 25
2.1.6.3 Khái quát về đời sống văn hoá
Giáo dục, y tế
Trong lĩnh vực giáo dục qua số liệu thống kê cho thấy ở Phú Vang
đến năm 2004 hầu hết các xã đều có trường mam non, truong tiểu học, có trường PTTH cơ sở, đảm bảo cho con em trên địa bàn dân cư được học tập, mặt bằng dân trí được nâng cao là cơ sở thuận lợi cho việc tiếp thu và ứng
dụng các tiến bộ khoa học kỹ thuật trong sản xuất nông nghiệp khi được
chuyển giao
Trong lĩnh vực Y tế: 100% các xã đều có cơ sở y tế xã đáp ứng
được nhu cầu khám chữa bệnh thông thường và chăm sóc sức khoẻ cho nhân dân, bệnh viện huyện đáp ứng nhu cầu khám chữa bệnh cho nhân dân là cơ sở quan trọng cho việc đảm bảo sức lao động cho sản xuất
Cơ sở hạ tầng Nông thôn
Qua kết quả điều tra, thống kê cho thấy 100% số xã có sử dụng điện, 100% số xã có đường ô tô đến xã, 100% xã có trạm truyền thanh;
100% xã có trường cấp I va trạm xá xã
Qua kết quả trên cho thấy điều kiện văn hoá nông thôn đang trên đường phát triển, bộ mặt nông thôn ngày càng thay đổi; Đời sống văn hoá, xã hội được nâng lên rõ rệt, là cơ sở cho việc tiếp thu kiến thức về giải
pháp công nghệ, kỹ thuật canh tác trong việc phát triển nông nghiệp nói riêng, phát triển kinh tế xã hội tại các vung nông thôn nói chung và việc công nghiệp hoá hiện đại hoá nông nghiệp nông thôn
2.1.6.4 Tiềm năng về nguồn nguyên liệu
- Mùn cưa: Thừa Thiên- Huế với nguồn tài nguyên về rừng rất dồi
đào, nếu được quản lý và khai thác hợp lý sẽ cho ra một khối lượng không
Trang 26Về diện tích cây cao su của Thừa Thiên- Huế theo số liệu điều tra của Sở Nông nghiệp & Phát triển nông thôn tỉnh Thừa Thiên- Huế hiện 6.363,6 ha, hàng năm sẽ có hàng trăm ha do già cỗi, năng suất thấp được thanh lý, chế biến thành gỗ xuất khâu, đo đó sẽ cho một lượng mùn cưa khá lớn
Ngoài ra huyện Phú Vang còn có diện tích lạc là 530 ha (năm
2005), hàng năm thu về sản phẩm chính là quả lạc còn có vỏ lạc Cây sắn là
cây có diện tích khá lớn 1.235 ha hàng năm cho thu hoạch khoảng 7.875 tan củ đồng thời thân cây sắn cũng là nguyên liệu dé lam gia thé cho nam
Tất cả các loại phế thải này cộng với điều kiện khí hậu thích hợp thì
việc nuôi trồng nắm Linh Chi ở huyện Phú Vang, Thừa Thiên- Huế sẽ rất
Trang 27PHẢN 3
DOI TUQNG, NOI DUNG&PHUONG PHÁP NGHIÊN CỨU
3.1 Đối tượng nghiên cứu
Ba chủng giống nam Linh Chi duoc tuyén chọn từ Viện Di Truyền
Nông Nghiệp Hà Nội và chủng giống Giống Ganoderma lucidum nguồn
gốc Đà Lạt đã trồng nhiều năm ở địa phương được dùng làm đối chứng
- G1: Ching giéng Ganoderma lucidum L, nguén géc Trung Quéc - G2: Ching giéng Ganoderma lucidum K, nguén géc Trung Quéc
- G3: Ching giống Ganoderma lucidum DL, nguồn gốc Đà Lạt
- G4: Chủng giống Ganoderma lucidum X, nguén géc Trung Quéc
Cơ chất: Các nguồn phế thải như mùn cưa cao su, bã vỏ lạc là
nguyên liệu chính dé nuôi trồng Linh Chi Tỷ lệ phối trộn :
- NI: 96,5 % mtn cua cao su + 2 %bột ngô + 1,5 % cám gạo
- N2: 67,6 % mùn cưa cao su + 28,9 % bã vỏ lạc + 2 %bột ngô + 1,5 %
cám gạo
- N3: 57,9 % mùn cưa cao su + 38,6 % bã vỏ lạc + 2 %bột ngô + 1,5 % cám gạo
3.2 Nội dung nghiên cứu
Thực hiện việc nuôi trồng nắm Linh Chi trên các công thức phối trộn cơ chất nền khác nhau để tìm ra các công thức trộn tốt nhất
Quan sát và theo dõi một số chỉ tiêu về sinh trưởng và phát triển của
bốn chủng giống nắm Linh Chỉ để so sánh:
Trang 28- Chiều dài cuống nắm: (cm)
- Đường kính cuống nắm: (cm)
- Độ day tan nam: (cm)
- Đường kính tán nắm: (đơn vị cm)
- Năng suất tươi (g/bịch): Được tính trọng lượng trung bình của nắm tươi trên một bịch cơ chất khi thu hoạch
-Năng suất khô (g/bịch): Được tính trọng lượng trung bình của nắm khô trên một bịch cơ chất khi thu hoạch
-Tý lệ khô/ tươi : là tỷ lệ giữa khối lượng nam khô/khối lượng
nắm tươi
Xây dựng hoàn chỉnh quy trình về nuôi trồng nắm Linh Chỉ trên các
phế thải nông nghiệp của địa phương cho các chủng giống được lựa chọn 3.3 Thời gian và địa điểm nghiên cứu
3.3.1 Thời gian nghiên cứu
Đề tài bắt đầu từ tháng 8/2005 đến tháng 7/2006 3.3.2 Địa điểm nghiên cứu
Thí nghiệm được thực hiện tại Hợp Tác Xã Nông nghiệp Phú Lương 1, xã Phú Lương, huyện Phú Vang, tỉnh Thừa Thiên Huế
3.4 Phương pháp nghiên cứu
3.4.1 Phương pháp bố trí thí nghiệm
Trang 29Bang 7: So do bé tri thí nghiệm 6 3 8 4 Khối I 7 10 1 11 2 5 12 9 5 2 9 7 Khối II 12 11 6 10 1 § 4 3 9 11 7 1 Khi II 3 4 2 12 § 6 10 4 Ký hiệu Tổ hop Ký hiệu Tổ hợp 1 GI+NI 7 G3+NI 2 GI+N2 8 G3+N2 3 GI+N3 9 G3+N3 4 G2+NI 10 G4+NI 5 G2+N2 11 G4+N2 6 G2+N3 12 G4+N3
3.4.2 Phương pháp theo dõi
- Thời gian sinh trưởng của hệ sợi: Khi hệ sợi lan kín bịch thì chiếm
khoảng thời gian bao nhiêu ngày (ngày)
- Đường kính tán nắm: Dùng thước đo tán nấm ở nơi rộng nhất (được
tính theo don vi cm)
- Độ dày tán nắm: Dùng thước kẹp do ở nơi dày nhất của tán nắm (cm) - Đường kính cuống nấm: dùng thước kẹp đo ở vị trí giữa cuống nấm
Trang 30- Chiều đài cuống nắm: Được đo từ nơi gốc nắm đến nơi phát sinh ra
tán nắm (cm)
- Năng suất tươi (g/bịch): Được tính trọng lượng trung bình của nắm
tươi trên một bịch cơ chất khi thu hoạch
-Năng suất khô (g/bịch): Được tính trọng lượng trung bình của nắm khô trên một bịch cơ chất khi thu hoạch
-T¡ lệ bệnh hại: Là tỉ lệ giữa số bịch cơ chất bị nhiễm trên tổng số bịch cơ chất được cấy
-Tỷ lệ khô/ tươi : là tỷ lệ giữa khối lượng nắm khô/khối lượng nắm tươi
3.4.3 Phương pháp xứ lý số liệu
Các số liệu thu được được xử lý trên phần mềm Excel kết hợp với phan mén SXW đề lượng hoá từng vấn đề mà nội dung nghiên cứu dé ra
3.5 Cách làm môi trường của các cấp giống
Môi trường giống cấp I: Gồm dịch chiết khoai tây, đường glucose và agar được làm theo cách sau: (với 200g khoai tây/1 lít dung dịch) khoai tây được gọt vỏ, cắt nhỏ thành từng miếng, đun sôi với 1,2 lít nước đun cạn
đến khi còn I lít lọc bỏ xác khoai tây lấy dịch sau đó thêm vào 20g đường
Trang 31Môi trường giống cấp II (Giống sơ cáp): Các loại hạt ngũ cốc được
sử đụng làm cơ chất để nuôi cấy thường dùng là lúa hạt Lúa sẽ được vo sạch vớt bỏ các hạt lép, sâu mọt Được nấu trong nồi áp suất với thời gian khoảng 45 phút sao cho hạt lúa vừa nứt vỏ trau là tốt, lúa sẽ được vớt và
cho vào bình đựng giống (khoảng 1/2 bình) dùng bông không thấm nước nút miệng bình, dùng giấy bọc ở đầu miệng bình, các bình sẽ được hấp khử
trùng với thời gian 60 phút, nhiệt độ 127°C với áp suất 1,5 atm Lúa sẽ
được đề nguội và cấy giống cấp I vào
Giống sản xuất: Các đoạn thân của cây sắn được cưa khoảng 12em mỗi đoạn chẻ ra làm 4 phần được ngâm trong nước vôi nồng độ 1,5% sau đó để ráo nước và cho vào bình đựng giống, nút bông, bịt giấy Hấp khử trùng với áp suất 1,5 atm, nhiệt độ 127C, 120 phút lấy ra để nguội cấy giống cấp II vào Sau khoảng 10 - 20 ngày ta có thể sử dụng làm giống đưa ra sản xuất
3.6.Gia thé thí nghiệm (bịch môi trường)
Cơ chất: Các nguồn phế thải mùn cưa cao su, bã vỏ lạc là nguyên
liệu chính để nuôi trồng Linh Chi Tỷ lệ phối trộn :
- NI: 96,5 % mùn cưa cao su + 2 %bột ngô + 1,5 % cám gạo
- N2: 67,6 % mùn cưa cao su + 28,9 % bã vỏ lạc + 2 %bột ngô + 1,5 %
cám gạo
- N3: 57,9 % mùn cưa cao su + 38,6 % bã vỏ lạc + 2 %bột ngô + 1,5 % cám gạo
Trang 32Sau đó đưa cơ chất đã ủ trộn đều với bột ngô (2%) và cám gạo (1,5%) Tiếp đó, đưa cơ chất nền đã được trộn đều vào bịch và nện nhẹ đồng thời xoay tròn bịch để cơ chất được nén đều vừa đủ độ chặt, tránh nén chặt quá sẽ làm cho sợi nam khó phát triển, mỗi bịch cơ chất có trọng
lượngIkg Tiếp đến ta buộc cổ bịch, dùng que nhọn có đường kính 1-1,5 cm xuyên vào miệng bịch cách đáy bịch khoảng I cm Với mục đích trong
khi hấp khí nóng sẽ toả đều trong bịch thông qua lỗ xuyên này
Trước khi hấp khử trùng ta đậy nút bông sao cho không quá lỏng và
cũng đừng nên quá chặt nó sẽ làm cho bịch đễ nhiễm bệnh nếu quá lỏng, gây khó khăn trong thao tác cấy giống nếu đậy quá chặt
Tiến hành xếp các bịch nắm vào nồi hấp thành từng lớp sao cho các
bịch nắm phía trên không đè lên miệng của các bịch nắm phía dưới, như vậy khí nóng đễ xâm nhập vào và lưu thông trong bịch nắm hơn, đồng thời cũng làm cho bịch nắm không bị biến dạng sau khi hấp Dụng cụ để hấp là
nôi hấp không có áp suất, hấp với thời gian 10-12 giờ ở nhiệt độ 90-100°C Bịch nắm sau khi được hấp khử trùng sẽ đề nguội, lúc đó sẽ tiến hành
cấy giống nắm vào bịch
3.7 Thao tác trong cấy giống
Các thao tác trong khi cấy nhân giống đều phải thực hiện trong
phòng cấy vô trùng, còn cấy giống vào bịch yêu cầu không khắc khe lắm, chỉ cân nơi kín gió, sạch sẽ, bàn cây phải được lau côn
Các dụng cụ chuẩn bị: Que cấy, đèn cồn, cồn, muỗng, kẹp, khay
Inox Tắt cả được sát trùng bằng lửa đèn cồn
Người cấy: sử dụng quần áo chuyên dùng, tay được xoa cồn, nên đeo khẩu trang
Cách làm: Dùng que cấy (nếu cấy giống cấp I sang giống cấp II)
Trang 33giống cấp II sang giống sản xuất) dùng kẹp (nếu cấy giống sản xuất vào
bịch) Tất cả các thao tác phải thao tác nhanh gọn sau khi đưa giống vào
các nút bông sẽ được hơ nhanh qua ngọn lửa đèn cồn trước khi nút bông
Trong khi cấy các miệng chai, bịch đều đặt sát ngọn đền cồn để đảm bảo vô trùng, sau khi cấy xong phái ghi ngày cấy lên nơi đã cấy sang
PHAN 4
KET QUA NGHIEN CUU VA THẢO LUẬN
4.1 Nghiên cứu thời gian sinh trưởng, phát triển hệ sợi cúa các chung giống nam Linh Chi
4.1.1 Thời gian sinh trướng hệ sợi từ khi nuôi cấy đến lan 1/2 bịch Trong thời gian đầu, từ sau khi nuôi cấy đến khi hệ soi lan 1/2 bich
có tốc độ sinh trưởng chậm Nhìn chung, thời gian để đạt tới giai đoạn này
ở tất cả các chủng giống nghiên cứu là chênh lệch nhau không đáng kế,
ngoại trừ chủng giống G4 (bảng 8) Hệ sợi của các chủng giống còn lại đều
mọc với tốc độ tương đương nhau Chứng tỏ trên các nền cơ chất nghiên cứu, hệ sợi có thể mọc tốt trong giai đoạn đầu
4.1.2 Thời gian sinh trướng hệ sợi từ khi cấy đến giai đoạn lan kín bịch Mặc dù trong giai đoạn đầu, chủng giống G4 có thời gian chậm hơn so với các chủng giống còn lại nhưng trong giai đoạn này thời gian đạt đến hệ sợ lan kín bịch ở tất cả các chủng giống đều xấp xỉ như nhau, vào khoảng 31-32 ngày (bảng 8) Tuy nhiên, kết quả cũng cho thấy thời gian hệ sợi lan kín bịch của chủng giống G3(Ganoderma lucidum DL nguén géc
Đà Lạt) phát triển trên cơ chất nền N1(96,5 % mùn cưa cao su + 2 %bột
ngô + I,5 % cám gạo) là ngắn nhất, trung bình chỉ khoảng 28,3
Trang 34Bảng 8: Thời gian sinh trướng hệ sợi từ khi nuôi cấy đến lan kín bịch Chỉ tiêu Thời gian hệ sợi lan 1/2 Thời gian hệ sợi lan kín bịch bịch Giống CCN T.B Cv T.B Cv (ngày) (%) (ngay) (%)/size NI 22,5 0,6 32,2 3,7 G1 N2 23,5 3,7 31,8 2,2 N3 23,7 7,2 31,8 2,1 NI 23,7 7,8 31,1 4,2 G2 N2 23,2 3,7 31,3 3,7 N3 23,6 6,9 31,0 3,0 NI 23,7 0,4 28,3 14,1 G3 N2 22,8 3,5 30,8 2,1 N3 23,0 1,8 30,7 1,9 NI 24.2 3,6 32,2 3,4 Gá N2 24,7 2,4 31,8 1,7 N3 25,2 3,6 32,1 1,6
4.1.3 Thời gian sinh trướng hệ sợi đến ngày tưới đón nấm
Đây là thời kỳ rất quan trọng, có tính chất quyết định đến sức sinh
trưởng, phát triển của quả thể và năng suất của nắm Linh Chi Nếu tưới đón nắm sớm hoặc chậm sẽ dẫn đến hiện tượng quả thé phat trién kém, anh hưởng đến tính chống chịu sâu, bệnh của các chủng giống nắm nghiên cứu
Căn cứ vào thời gian hệ sợi lan kín bịch và màu sắc của hệ sợi để đề có kỹ thuật tưới đón nấm thích hợp nhất, cơ sở làm tăng năng suất Quá trình theo dõi và thực hiện kỹ thuật này được ghi nhận trong bảng 9
Do thời gian đạt đến hệ sợi lan kín bịch ở tất cả các chủng giống
Trang 35có sự thay đổi Khoảng thời gian này dao động từ 32 - 33,4 ngày Kết quả
phân tích Cv đã cho thấy mức độ biến động về số ngày trong giai đoạn này 6 ching giéng G1 (Ganoderma lucidum L); G2 (Ganoderma lucidum K) trên cơ chất nền NI (96,5 % mun cua cao su + 2 % bét ngd + 1,5 % cám gao); N2 (67,6 % mun cua cao su + 28,9 % bã vỏ lạc + 2 %bột ngô + 1,5 %
cám gạo) là thấp nhất (Cv gần bằng 3%) Như vậy, có thể thấy mức độ
đồng đều về tốc độ phát triển của hệ sợi của G1, G2 trên 2 cơ chất nền này
là khá cao Đây chính là kết quả của đặc tính giống, chất lượng cơ chất nền và mối tương tác giữa 2 yếu tố này gây ra
Bảng 9: Thời gian sinh trướng hệ sợi từ khi cấy đến ngày tưới đón nắm Chí tiêu Thời gian tưới đón nắm Cv Giống CCN (ngày) (%) Nl 33,2 3,0 G1 N2 33,1 3,0 N3 33,4 5,2 NI 32,2 3,1 G2 N2 32,5 3,1 N3 32,0 8,3 NI 32,1 5,4 G3 N2 32,3 6,2 N3 32,1 3,1 NI 32,2 5,4 G4 N2 32.4 6,2 N3 32,5 3,1
4.2 Các giai đoạn sinh trưởng, phát triển của quả thế
4.2.1 Thời gian từ khi nuôi cấy đến giai đoạn ra mầm quá thể
Trang 36(ntn NST) Các sợi tơ thứ cấp tăng trưởng dẫn đến tạo thành quả thể [Nguyễn Lân Dũng, 2003] Thời gian này dài hay ngắn phụ thuộc vào đặc tính giống và điều kiện nuôi trồng
Với điều kiện thí nghiệm, các chủng giống hình thành mầm quả thể chỉ sau khoảng thời gian từ 3-5 ngày kể từ ngày mở nút bịch Trong đó,
chủng giống GI(Ganoderma lucidum L) trên cả 3 cơ chất nền có thời gian ngan nhat, ching giéng G3 (Ganoderma lucidum DL, nguén géc Da Lat)
có thời gian dài nhất (bảng 10)
Trang 374.2.2 Thời gian từ khi nuôi cấy đến giai đoạn hình thành tán Mầm quả thể sau khi được hình thành tiếp tục phát triển Tốc độ
phát triển lúc này có thể quan sát bằng mắt thường và được thể hiện rõ qua các đặc trưng hình thái Cuống nắm và tán sẽ hình thành và lớn dần lên
Tốc độ phát triển trong giai đoạn từ khi hình thành mầm quả thể đến
hình thành tán của chủng giống G3 và G1 là vượt trội, trung bình mất
khoảng 7 ngày Tuy nhiên, khi xét tổng thời gian từ nuôi trồng đến giai
đoạn hình thành tán trên cả 3 cơ chất nền thì thấy chủng giống GI(Ganoderma lucidum L) dat nhanh nhất, trung bình 43 ngày G2 (Ganoderma lucidum K) 1a ching giéng hinh thành tán chậm nhất, chậm hon so voi G1 1a 3 ngày (bảng 10)
Bảng 11: Thời gian từ khi nuôi cấy đến giai đoạn trướng thành
& thu hoạch
Trang 384.2.3 Thời gian từ khi nuôi cấy đến giai đoạn thu hoạch
Kế thừa tính vượt trội về tốc độ sinh trưởng, phát triển ở các giai
đoạn truéc, ching giéng G1 (Ganoderma lucidum L) c6 thời gian đạt đến
thời kỳ trưởng thành nhanh nhất so với các chủng giống khác Do vậy, nó
cũng cho thu hoạch sớm hơn các chủng giống khác Trung bình sau 76
ngày kể từ khi nuôi cấy đã cho thu hoạch Trong khi đó, chủng giống G3 (Ganoderma lucidum DL, nguồn gốc Đà Lạt) và G4 (Ganoderma
Iucidum X) phải đến 85 ngày mới cho thu hoạch Rõ ràng sự sai khác về thời gian giữa các chủng giống từ khi nuôi cấy đến thu hoạch là khá lớn
Giữa chủng giống sớm nhất và chủng giống muộn nhất có thể lên đến 9
ngày Đây có thể là một trong những đặc điểm ứng dụng để rải vụ, sử dụng
hiệu quả nguồn lao động khi quy mô sản xuất mở rộng Hệ số biến động
của chỉ tiêu này rất nhỏ (Cv <1%) Điều này cho thấy thời gian sinh trưởng, phát triển của các chủng giống ít phụ thuộc vào môi trường của cơ chất
Trang 39Thoi gian (ngay) 90 ¬ 80 4 70 ¬ 60 4 ——G1 50 3 ——G2 — G3 40 + ——G4 30 + 20 4 10 5 Giai doan 0 + T + T + + 1
Ra mầm Hình thành tán Trưởng thảnh Thu hoạch
Đồ thị 2: Thời gian sinh trưởng, phát triển qua các
Trang 404.3 Đặc điểm về hình thái giữa các chúng giống nắm Linh Chi
4.3.1 Chiều cao cuống của các chúng giống thí nghiệm
Cuống nắm là bộ phận tiếp giáp giữa gốc nắm và tán nắm Cuống khi mới hình thành có màu trắng, sau đó chuyển sang màu vàng đến nâu Cuống có hình trụ Đây cũng là cơ quan vận chuyền đinh dưỡng từ gốc lên
để nuôi tán nắm Quá trình đo đếm và thu thập số liệu được thực hiện khi trưởng thành và được thê hiện ở bảng 12
Kết quả thí nghiệm cho thấy chiều cao cuống giữa các chủng giống thí nghiệm có sự sai khác rất có ý nghĩa thống kê Chiều cao cuống của các
chủng giống thu được trên các cơ chất nền dao động từ 4,23-12,06cm,
trong đó G3 (Ganoderma lucidum DL, nguồn gốc Đà Lạt) có chiều cao
cuống lớn nhất, đạt trung bình 12,06 cm G1(Ganoderma lucidum L) 1a
chủng giống có chiều cao cuồng nhỏ nhất (bảng 12)
Khi phân tích hệ số biến động về chiều cao cuống của các chủng giống phát triển trên các cơ chất nền đã cho thấy: Chủng giống GI có hệ số biến động lớn hơn (Cv =7,46%) Điều này chứng tỏ chủng giống này khi phát triển ở cơ chất nền khác nhau thì chiều cao cuống của G1 chịu tác
động mạnh mẽ của môi trường nuôi cấy Các chủng giống có biến động thấp hơn thì ít bị ảnh hưởng bởi các cơ chất nền khác nhau so với GI
Tuy nhiên, trung bình chiều cao của các chủng giống khi phát triển trên NI, N2 và N3 thì không có sự sai khác một cách có ý nghĩa Trung bình chiều cao cuống thu được khi các chủng giống phát triển trên NI có hệ số biến động nhỏ nhất(Cv = 33,95) Điều này chứng tỏ: các giống khác
nhau sinh trưởng trên NI ( 96,5 % mun cua cao su + 2 %bột ngô + 1,5 %