BAO CAO VE YERSINIA hoan chinh

Báo cáo YERSINIA A- TỔNG QUÁT VỀ YERSINIA I/ ĐẶC TÍNH:  Là vi khuẩn Gram (–)  Vi sinh vật kị khí không bắt buộc  Hình que (dạng phẩy dạnh thẳng)  Di chuyển nhiệt độ nhỏ 30oC, không di chuyển nhiệt độ lớn 30oC  Đường kính: 0.5 – 0.8 micromet  Chiều dài: – micromet  Không hình thành bào tử  Có 11 loài :  Y  Y  Y  Y  Y  Y  Y  Y  Y  Y  Y pestis (1894) pseudotuberculosis (1883) enterocolitica (1939) intermedia (1981) frederiksenii (1981) kristensenii (1981) aldovae (1984) rohdei (1987) mollaretii (1988) bercovieri (1988) ruckeri (1978)  Trong có loài gây nhiễm trùng thực phẩm là:  Y pseudotuberculosis  Y enterocolitica  Có loài gây bệnh cho người:  Y pestis  Y pseudotuberculosis  Y enterocolitica II/ MOÂI TRƯỜNG:  Có mặt nhiều loài động vật, người thực phẩm  Động vật : heo, chim, hải ly, thỏ, sóc, cừu, bọ chét, chó, mèo, ngựa, loài gặm nhắm gia súc  Thực phẩm: thịt, hải sản sữa …  Ngoài yersinia có hồ, ao Trong số trường hợp, yersinia đất Bảng 1: Đặc điểm hóa sinh lồi Yersinia Chú thích: a = dương tính sau ngày, (+) = dương tính sau ngày Một vài giống Y intermedia âm tính với Simmons citrate, rhamnose, melibiose, raffinose Simmons citrate c Một vài giống biotype âm tính b Trang Báo cáo YERSINIA Bảng 1: Đặc điểm hóa sinh loài Yersinia Các loài Yersinia Reaction Y pestis Y Y Y Y Y Y Y Y Y pseudotuberculosis enterocolitica intermedia frederiksenii kristensenii aldovae rohdei mollaretii bercovieri Y ruckeri Lysine - - - - - - - - - - - Arginine - - - - - - - - - - - (c) + + + + + + + + Ornithine - - + Motility at RT (2226°C) - + + + + + + + + + + 35-37°C - - - - - - - - - - - Urea - + + + + + + + + + - Phenylalanine deaminase - - - - - - - - - - - Mannitol + + + + + + + + + + + Sorbitol +/- - + + + + + + + + - Cellobiose - - + + + + - + + + - Adonitol - - - - - - - - - - - Inositol - - +/-(+) +/-(+) +/-(+) +/-(+) + - +/- - Sucrose - - +(c) + + - - + + + - Rhamnose - + - + + - + - - - - Raffinose - +/- - + - - - +/- - - - Melibiose - +/- - + - - - +/- - - - Simmons citrate - - - +/- +/- - - + - - + Voges- Proskauer - - +/-(+) + + - + - - - - Indole - - +/- + + +/- - - - - - Salicin +/- +/- +/- + + -(+/-) - - +/- (+) Esculin + + +/- + + - + - (+) (+)/- Lipase - - +/- +/- +/- +/- +/- - - - Pyrazinamidase - - +/- + + + + + + + - Trang Báo cáo YERSINIA III/ YERNISIA ENTEROCOLITICA Đây loài vi khuẩn phổ biến có mặt thực phẩm Đặc tính:  Gram (-), hình que  Có thể phát triển có oxy  Có thể phát triển nhiệt độ ướp lạnh Môi trường sống:  Động vật: gia cầm, heo chim, hải ly, chó, mèo …  Con người  Thực phẩm: trái cây, rau quả, thịt (heo, bò, cừu …), sữa chưa tiệt trùng, hải sản, đậu hủ, bánh sandwich Tỷ lệ nhiễm thực phẩm 65 – 90% Các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển:  Nhiệt độ : – 44oC, tối ưu 28 – 29oC  pH: 4.2 – 10, tối ưu pH = 7.2 – 7.4  Hoạt độ nước: aw max = 0.945 (5% NaCl)  Chậm phát triển môi trường chân không, 100% N hay hỗn hợp CO2, N2 Phát triển hiệu nhiệt độ ướp lạnh Khả sống sót:  Nhiệt độ : Sống 64 tuần nước 4oC, dễ dàng chịu đựng lạnh  pH: sống pH có giá trị nhỏ nhiệt độ thấp Dựa vào khác hóa sinh DNA gần giống mà loài Y aldovae, Y bercovieri, Y frederiksenii, Y intermedia, Y kristensenii, Y mollaretii, Y rohdei and Y ruckeri gaàn giống với Y enterocolitica Aleksic Bockemuhl chia Y enterocolitica thành 18 nhóm huyết (serogroups) dựa vào kháng nguyên O Các nhóm gây bệnh : O:1, 2a, 3; O:2a,3; O:3; O:8; O:9; O:4,32; O:5,27; O:12,25; O:13a,13b; O:19; O:20 O:21 Trong nhóm gây bệnh người : O:3; O:8; O:9 O:5,27 Y enterocolitica gây bệnh Yersinin (một loại nhiễm trùng đường ruột, Y pseudotuberculosis gây loại nhiễm trùng này) Ở đây, chúng có mang plasmid với số đặc tính nguy hiểm: tự động kết dính với môi trường 35 – 37oC, kìm hãm phát triển môi trường thiếu hụt canxi, sản xuất protein ngoại bào 35 – 37 oC, có khả sản xuất viêm màng kết heo chuột, gây chết người nhiễm trùng đường ruột gây vi khuẩn Những chứng gần có plasmid nguy Trang Báo cáo YERSINIA hiểm Nhưng plasmid kết hợp với tính chất vật trung gian gây chết người Sự nhiễm trùng đường ruột phụ thuộc vào gen vật chủ vào nhóm huyết thanh, nhiễm sắc thể gen vật chủ tăng tính độc hại Yersinin Y enterocolitica có gen nhiễm sắc thể : inv ail Các gen mã hóa phenotype để xâm chiếm tế bào động vật hữu nhũ Các vụ bùng phát bệnh:  1976, thành phố Oneida, New York, em học sinh uống sữa sôcôla  12- 1981 đến – 1982, King County, Washington, xảy đậu hũ nhiễm trùng Kết nước bị nhiễm trùng chưa qua xử lý Clo  11/6 – 12/7/1982 bùng phát Arkansas, Tennessee Mississippi, xảy sữa chưa tiệt trùng IV/ YERSINIA PSEUDOTUBERCULOSIS Đặc tính:  Hình cầu que  Gram (-)  Thuộc họ Entorobacteria  Y.pseudotuberculosis phân bố rộng môi trường: đất, nước, rau quả…  Loài vi khuẩn phát Malassez Vignal vào năm 1883, chúng có nhiều tên khác trước xếp vào chủng Yersinia Cái tên pseudotuberculosis xuất phát từ loại bệnh gây khối u màng ruột kí sinh gây có tượng gần giống bệnh lao  Loài vi khuẩn gây bệnh động vật hoang dã vật nuôi nhà Các loài vật mang Y.pseudotuberculosis tiềm ẩn mối đe dọa  Y.pseudotuberculosis thường xuyên gây bệnh cho người có vài vụ bùng phát bệnh thức ăn nguồn nước nhiễm bẩn từ phân động vật Mức độ phát triển bệnh người khác nhau, từ đau bụng, sốt đến nhiễm trùng máu, phổ biến bệnh viêm màng ruột bắt chước hội chứng phụ V/ YERSINIA PESTIS: Đặc tính:  Vi khuẩn Gram (-)  Kị khí không bắt buộc Trang Báo cáo YERSINIA  Hình cầu que  Đường kính : 0.5 đến 0.8 micromet  Chiều dài : đến micromet  Có khả lên men đường  Di động môi trường phân lập bất động môi trường vật chủ  Được bao bọc lớp màng nhầy Các yếu tố ảnh hưởng đến phát triển: Nhiệt độ: – 40oC , tối ưu 28 – 30oC pH: – 9.6, tối ưu 7.2 – 7.6 Sự độc hại:  Bao nhầy chống lại thực bào bạch cầu  Y pestis chống lại tiêu diệt huyết  Có gen gây ức chế di chuyển bạch cầu, chống lại kết hợp tiểu cầu Môi trường sống: Con người loài vật khác: chuột, sóc, thỏ vật nuôi nhà Gây bệnh: Là tác nhân gây bệnh dịch hạch Tính nhạy cảm: Y pestis nhạy cảm cao vài loại kháng sinh, chủ yếu streptomycin chloramphenicol B- NHỮNG ĐỘC TỐ CỦA YERSININ  Enterotoxin Một số thí nghiệm tính độc hại tiến hành để phân biệt mầm bệnh nguy hiểm Yersinin enterocolitica Một vài giống Yersinin enterocolitica lồi có quan hệ gần sản xuất loại độc tố bền nhiệt enterotoxin mà phát cách tiêm chất lỏng nuôi cấy vào thú vật nhỏ làm tương tự Encherichia Coli (ST) Tuy nhiên, yersinia spp sản xuất ST nhiệt độ thấp Có nhiều giống yersinia sản xuất protein phụ thuộc vào mơi trường, giống Yersinin enterotoxin độc tính khơng Vai trị ST q trình gây bệnh yersinia không rõ ràng  Độc tố V W  Homongenate  Yersinin entercolitica mang kiểu mầm bệnh : 1A, 1B, 2, 3, 4,  1B: từ đến mang pYV Trang Báo cáo YERSINIA  1A: không mang pYV Trang Báo cáo YERSINIA C- KHẢ NĂNG GÂY BỆNH CỦA YERSINIA  BỆNH DỊCH HẠCH ( YERSINIA PESTIS ) Bệnh dịch hạch gì? Bệnh dịch hạch bệnh loài gậm nhấm (chủ yếu chuột) Tác nhân gây bệnh trực khuẩn Yersinia Pestis, thuộc họ Enterobacteriaceae, trực khuẩn Gram âm Bệnh dịch hạch lây truyền từ động vật gặm nhấm sang người qua vết cắn chấy rận, bọ chét chủ yếu qua bọ chét chuột loài Xenopsylla cheopis, véc tơ truyền bệnh dịch hạch Ngồi ra, Việt Nam cịn có lồi Pulex irritans số lồi thuộc giống Xenopsylla có khả truyền bệnh dịch hạch Trong kỷ mười bốn, bệnh lan truyền toàn giới qua ba đợt dịch lớn, giết chết từ phần ba tới nửa dân số khu vực có nạn dịch hạch Nếu khơng điều trị kịp thời, tỉ lệ tử vong thể hạch 75% v2 thể phổi gần 100% Nhờ hệ thống vệ sinh điều kiện sống cải thiện, nạn dịch hạch xảy Tuy nhiên dịch hạch bệnh nguy hiểm thuộc diện kiểm dịch quốc tế Ở Việt Nam , vùng trọng điểm mắc bệnh Tây Nguyên Bệnh thường phát triển mạnh mùa khô, phù hợp với mùa phát triển chuột bọ chét, nhiên dịch ghi nhận vào thời điểm khác năm kể mùa mưa Lịch sử phát : Yersinia Pestis khám phá vào năm 1984 công bác sĩ nhà vi khuẩn người Pháp Alexandre Yersin trận dịch bệnh dịch hạch Hồng Kông Yersin thành viên "trường phái Paster” Shibasaburo Kitasato, nhà vi khuẩn học người Nhật huấn luyện Đức, thuộc "trường phái Koch" đối thủ, lúc tham gia tìm tác nhân gây bệnh dịch hạch Tuy nhiên Yersin người liên kết bệnh dịch hạch với Yersinia pestis Vi khuẩn lúc đầu gọi Pasteurella pestis, sau đặt lại tên theo tên Yersin Có loại bệnh dich hạch triệu chứng lâm sàng: Thời kỳ ủ bệnh bệnh dịch hạch thường từ 1-6 ngày, dịch hạch thể phổi thời gian ủ bệnh ngắn khoảng từ 2-4 ngày Bệnh dịch hạch thường gặp người gồm thể bệnh: thể hạch, thể nhiễm khuẩn huyết, thể phổi thể màng não • Bệnh dịch hạch thể hạch (Bubonic plague) loại bệnh dịch hạch thường gặp tự nhiên, chiếm 90% trường hợp mắc bệnh dịch hạch Các triệu chứng bệnh khởi phát nhanh đột ngột, bao gồm sốt, lạnh run, suy nhược, đau đầu, buồn nơn Bệnh chuyển sang giai đọan tồn phát hạch bạch huyết sưng, hay gọi “sưng bạch hạch” , hạch to ngón tay trứng gà, lúc đầu đau cứng chắc, sau hạch mềm hóa mủ Thể hạch tiến triển thành thể phổi thể màng não thứ phát • Bệnh dịch hạch gây nhiễm trùng huyết (Septicemic plague) bệnh nhiễm trùng máu, gặp Bệnh chiếm chưa tới 20% trường hợp mắc bệnh dịch hạch “tự nhiên” Thường thứ phát, thể hạch dễ tiến triển đột ngột thành nhiễm khuẩn tối cấp với sốt cao khoảng 40-41°C, tình trạng nhiễm khuẩn, Trang Báo cáo YERSINIA nhiễm độc, huyết áp giảm, mạch nhanh, nhỏ vật vã, rối loạn tinh thần, mê, thường bệnh nhân chết vịng 3-5 ngày ko điều trị sớm • Bệnh dịch hạch thể phổi (Pneumonic plague) loại bệnh dịch hạch nghiêm trọng thường gặp tự nhiên Bệnh chiếm chưa tới 14% trường hợp mắc bệnh dịch hạch Tuy nhiên, người ta tin dạng bệnh dịch hạch chủ yếu công khủng bố gây Bệnh xuất vi khuẩn xâm nhập vào phổi nhanh chóng gây dạng bệnh viêm phổi nghiêm trọng Các triệu chứng bệnh dịch hạch thể phổi bao gồm sốt cao, đau ngực, ho, thở dốc ho chất dịch có lẫn máu đờm, xuất tràn dịch màng phổi, có biến chứng phù phổi cấp Nếu khơng bắt đầu điều trị thuốc trụ sinh vịng 24 đồng hồ, bệnh nhân nhanh chóng bị shock tử vong Đối với bệnh nhân không điều trị ngay, tỷ lệ tử vong gần 100% Các triệu chứng bệnh dịch hạch thể phổi thường xuất vòng hai ngày sau tiếp xúc với vi khuẩn gây bệnh • Bệnh dịch hạch thể màng não: ln thứ phát sau thể hạch nhiễm khuẩn huyết, gặp Cách lây nhiễm: Người ta bị nhiễm bệnh dịch hạch thể hạch từ thú vật nhiễm bệnh Vi khuẩn lây truyền qua vết cắn chấy/rận nhiễm bệnh, vết cắn cào thú vật nhiễm bệnh,hoặc tiếp xúc trực tiếp với xác thú vật nhiễm bệnh Con người bị nhiễm bệnh dịch hạch thể phổi hít phải hạt nước nhỏ li ti có chứa vi khuẩn gây bệnh dịch hạch Các hạt nước bắn vào khơng khí người bị nhiễm bệnh thú vật nhiễm bệnh ho Tuy nhiên, bệnh dịch hạch sử dụng làm vũ khí, vi khuẩn gây bệnh dịch hạch chủ tâm thả vào khơng khí Chẩn bệnh điều trị : Tính sinh bệnh hai kháng nguyên kháng thực bào F1 VW; hai cần thiết cho độc tính vi khuẩn Chúng vi khuẩn sản xuất 37°C, điều giải thích số trùng bọ chét mang khuẩn khơng độc tính Hơn nữa, Y pestis sống sót sản xuất kháng nguyên F1 VW bên tế bào máu bạch cầu đơn nhân mà không bạch cầu đa nhân trung tính Miễn dịch tự nhiên hay cảm ứng có thể sản xuất kháng thể opsonin đặc hiệu chống lại kháng nguyên F1 VW Chúng kích thích tượng thực bào bạch cầu trung tính Chẩn đốn xác định tác nhân gây bệnh phịng thí nghiệm cách nhuộm bệnh phẩm (nhuộm Wayson, Giemsa), ni cấy, thử phage, tìm kháng ngun F1 với loại phản ứng ngưng kết hồng cầu thụ động trung hồ kháng thể Phịng chống bệnh dịch hạch: đến chưa có vacxin phịng chống bệnh có hiệu lực cao việc phịng chống dịch hạch chủ yếu giám sát vật chủ, vector vi sinh vật; phát sớm bệnh nhân điều trị kịp thời bệnh nhân dịch hạch; điều trị dự phịng với người tiếp xúc có nguy lây bệnh; diệt chuột diệt bọ chét Tất loại bệnh dịch hạch điều trị thuốc trụ sinh Thuốc điều trị đặc hiệu: Streptomycine, Tetracycline, Chloramphenicol, Trimethoprim / Sulfamethoxazol Trang Báo cáo YERSINIA Tuy nhiên, người mắc bệnh dịch hạch thể phổi phải điều trị vòng 24 tiếng sau triệu chứng xuất Nếu không chữa trị, bệnh dịch hạch thể phổi gần gây tử vong Thuốc chuyển gene vắc-xin chống dịch hạch : Kháng sinh sử dụng để chữa bệnh dịch hạch, biện pháp chữa trị có hiệu bệnh phát sớm Một vài chủng Y pestis kháng thuốc kháng sinh, nên nhà khoa học phải tìm kiếm biện pháp sản xuất hàng loạt câc loại vắc-xin Luca Santi Hugh S Mason khám phá loại vắc-xin phòng bệnh dịch hạch thuốc Cây trồng chuyển gen hệ thống sản xuất vắc xin thay có hiệu quả, chúng biểu lộ nhiều loại prơtêin, thực thay đổi cần thiết để loại prơtêin hoạt động Hệ thống trồng chứa loại vi khuẩn nguồn bệnh động vật Và việc sản xuất đại trà loại vắc-xin trồng dễ dàng Trong nghiên cứu gần đây, nhà khoa học phân tích biểu thị prơtêin Y.pestis trồng: kháng nguyên F1, tạo thành phần vỏ bao tế bào Y.pestis, kháng ngun V, có tham gia vào q trình gây bệnh, hỗn hợp F1 V Các gen kháng nguyên đưa vào tế bào thuốc khuẩn Agrobacterium tumefaciens Sau prơtêin tạo thành phân tích tính kháng nguyên thử nghiệm chuột bạch Các nhà nghiên cứu thấy rằng: 1) loại kháng nguyên biểu lộ mức độ cao thuốc lá; 2) loại prôtêin tạo phản ứng miễn dịch chuột thí nghiệm; 3) sau xịt liều Y pestsis có chứa 100% độc tố vào chuột, chuột sử dụng vắc-xin có tỉ lệ sống cao sau 21 ngày, chuột giả miễn dịch (sham-immunized) chết sau ngày Cách phòng chống: Tuyên truyền giáo dục cộng đồng thực tốt cơng tác vệ sinh mơi trường, bố trí xếp vị trí cấu trúc nhà kho hàng hợp lý, quản lý lương thực, thực phẩm, nuôi mèo, đặt bẫy, phá vỡ hang tổ chuột, khống chế, phá huỷ nơi sinh sản chuột, bọ chét, thấy chuột chết bất thường phải khai báo với y tế sở Các tượng sốt, hạch phải đến sở y tế để khám điều trị Bệnh dịch hạch dùng làm vũ khí khủng bố: Việc sử dụng bệnh dịch hạch làm vũ khí nghiên cứu 60 năm Theo hồ sơ báo cáo, người Nhật tìm cách sử dụng bom nhỏ (bom tiểu) để reo rắc chấy/rận nhiễm bệnh dịch hạch chiến tranh giới II Cả Hoa Kỳ Liên Xô cũ nghiên cứu phương pháp thả vi khuẩn dịch hạch vào khơng khí năm 50 60 Bệnh dịch hạch coi dùng làm vũ khí sinh học vì: • Vi khuẩn dịch hạch thả vào khơng khí, chúng truyền bệnh cho nhiều người • Vi khuẩn thả vào khơng khí gây bệnh dịch hạch thể phổi nguy hiểm • Bệnh dịch hạch thể phổi truyền từ người sang người khác, làm bệnh lan rộng • Bệnh dịch hạch thể phổi bệnh nghiêm trọng có tỷ lệ tử vong cao • Nạn dịch hạch thể phổi gây cảm giác sợ hãi hoang mang Dấu hiệu công bệnh dịch hạch thể phổi nhiều Trang Báo cáo YERSINIA người cần chữa trị bệnh hô hấp nghiêm trọng, khoảng tới hai ngày sau cơng Tới lúc đó, vi khuẩn dịch hạch khơng cịn có khơng khí Nếu khơng điều trị nhanh chóng tích cực, nhiều người tiếp xúc với vi khuẩn dịch hạch chết  BỆNH GIẢ LAO Ở BỒ CÂU (PSEUDOTUBERCULOSIS) Bệnh giả lao lồi gia cầm chim hoang, có bồ câu biết đến từ lâu (Riech, 1889), đến 1904, Kynyoun (1904) phân lập vi khuẩn gây bệnh, gọi Yersinia pseudotuberculosis (vi khuẩn giả lao) Tác nhân: Tác nhân gây bệnh giả lao bồ câu Yersinia pseudotuberculosis Vi khuẩn có đặc tính gần giống vi khuẩn tụ huyết trùng nên gọi Pasteurella pseudotuberculosis Vi khuẩn thuộc gram âm, trịn hai đầu, có kích thước 0,5x0,85µm, cịn gọi vi khuẩn lưỡng cực nhuộm bắt màu sẫm hai đầu Vi khuẩn phát triển tốt mơi trường thạch pepton, thạch máu có thêm số axit amin thích hợp nhiệt độ 37°C Vi khuẩn dễ dàng bị diệt ánh sáng mặt trời, nhiệt độ 60°C làm khơ Nhưng bảo quản hàng năm môi trường thạch để nhiệt độ lạnh Hiện có serotype vi khuẩn xác định typ I, II, III, IV, V, VI subtyp gây bệnh cho số loài chim thú Các triệu chứng lâm sàng : Chim bị nhiễm vi khuẩn chủ yếu qua đường tiêu hố Vi khuẩn tồn lưu hành mơi trường tự nhiên thức ăn Chim ăn uống phải thức ăn nước uống bị nhiễm vi khuẩn bị mắc bệnh Vi khuẩn xâm nhập vào thể chim qua đường hơ hấp, hít thở khơng khí có vi khuẩn Vào thể chim, vi khuẩn nhanh chóng xâm nhập vào hệ thống hạch lâm ba, phát triển nhanh số lượng, vào máu, đến phủ tạng gan, lách, phổi, thận ruột Các trường hợp bệnh cấp tính, vi khuẩn tăng số lượng, vào máu, đến phủ tạng gan, lách, phổi, thận ruột Các trường hợp bệnh cấp tính, vi khuẩn tăng số lượng nhanh máu, gây nhiễm trùng huyết Khi đến phủ tạng, vi khuẩn tồn gây tượng viêm nhiễm với hạt nhỏ có chứa bựa vàng xám, giống hạt lao dạng "lao kê" Các hạt đơi có tổ chức Chim nhiễm mầm bệnh có thời gian ủ bệnh ngắn, 1-2 ngày Chim bệnh có biểu tăng thân nhiệt, bỏ ăn, niêm mạc tụ huyết đỏ sẫm, mắt nhắm, đứng ủ rũ, thở khó, chảy nước mũi, nước mắt; sau xuất ỉa chảy phân xanh vàng Bệnh tiến triển nhanh Chim bệnh chết sau 2-4 ngày, từ xuất dấu hiệu lâm sàng Mổ chim bệnh thấy: bao tim có tụ huyết, đơi có dịch vàng; phổi, lách, gan niêm mạc có tụ máu Các phủ tạng đơi cịn có hạt giống hạt kê, hoại tử có màu vàng xám Các trường hợp nhiễm trùng huyết thấy: máu đỏ sẫm, chậm đơng, niêm mạc tím đỏ Dịch tễ học : Trong tự nhiên, nhiều loài gia cầm chim trời bị bệnh giả lao gà nhà, gà rừng, ngỗng, vịt, gà tây, bồ câu, vẹt Nhiều loại thú nhỏ nhiễm pseudotuberculosis như: khi, chuột lang, thỏ, chuột bạch tiêm truyền thực nghiệm Trang 10 Báo cáo YERSINIA Bồ câu non năm tuổi thường nhiễm vi khuẩn bị bệnh thể cấp tính Bệnh thường phát tra lây lan đàn chim thời tiết lạnh ẩm ướt Chẩn đoán: Chẩn đoán lâm sàng Căn vào dấu hiệu lâm sàng bệnh tính đặc trưng để chẩn đoán: bệnh tiến triển nhanh với triệu chứng thở khó, chảy rãi rớt,tiêu chảy phân xanh vàng vàng đục; mổ khám có đám tụ huyết nội tạng; đặc biệt có hạt nhỏ hoại tử có bựa vàng xám Chẩn đốn vi sinh vật Phân lập, xác định vi khuẩn từ mẫu bệnh phẩm dịch xuất tiết phủ tạng chim bệnh Điều trị: Điều trị có hiệu quả, bệnh tiến triển nhanh Khi phát dấu hiệu lâm sàng chim bị nặng, khó chữa Khi phát vài chim bị bệnh cần phải điều trị có tính chất phịng ngừa cho tồn đàn Thuốc điều trị: Phối hợp hai loại: Kanamycin gam, Tetracyclin gam, nước 1000 ml, cho toàn đàn chim uống liên tục 3-4 ngày.Thuốc trợ tim mạch: tăng sức đề kháng: cho uống trộn thức ăn vitamin B1, K, A, D, E Cho chim ăn thức ăn dễ tiêu, bớt ăn loại hạt Phòng bệnh: Thực cho chim ăn sạch, uống Giữ gìn vệ sinh chuồng trại mơi trường sống chim, cần làm vệ sinh tiêu độc theo định kỳ Khi có dịch xảy ra: Phát sớm chim bệnh để cách ly điều trị xử lý, tránh lây nhiễm cho đàn chim Tổ chức tiêm vacxin phòng bệnh cho đàn chim trưởng thành có vacxin phịng bệnh giả lao  BỆNH GAN: Thói quen người Việt Nam ta hay ăn rau cải sống, gỏi cá sống, hải sản, thịt tái, thịt chó, ăn thật ngon… khơng biết nguồn mang ký sinh trùng: giun, sán: sán chó, sán gan… gây nên bệnh gan nguy hiểm mà việc điều trị dễ dàng Bệnh gan nhiều loài vi sinh vật gây nên có: Yersinia Enterocolitica Bệnh thường biểu viêm hồi đại tràng trẻ em, viêm hồi tràng đoạn cuối hay viêm hạch mạc treo người lớn Bệnh nhân có triệu chứng liên quan đến gan thường có kèm bệnh tồn thân khác như: xơ gan, xơ gan, nhiễm sắc mô Thể nhiễm trùng huyết bán cấp thường giống thương hàn hay sốt rét Đa ổ abces lan tỏa có gan, lách Tỉ lệ tử vong khoảng 50% Điều trị với fluoroquinolone  BỆNH VIÊM RUỘT Bệnh viêm ruột gì? Bệnh nhiễm vi khuẩn Yersinia ruột bệnh viêm ruột vi khuẩn (vi trùng) gọi Yersinia enterocolitica gây Vi khuẩn tìm thấy phân (đi tiêu) người thú vật bị nhiễm, đặc biệt heo Trang 11 Báo cáo YERSINIA Vi khuẩn Yersinia enterocolitica thường nhiễm bệnh trẻ em Triêu chứng: Các triệu chứng thường đến ngày sau bị nhiễm bệnh bao gồm: Tiêu chảy, đau bụng, sốt, số triệu chứng khác buồn nôn ói mửa Đơi người khơng có triệu chứng bệnh, chuyển vi khuẩn phân họ Những người khơng có điều trị thuốc kháng sinh chuyển vi khuẩn phân họ từ đến tháng, họ khơng có triệu chứng bệnh Cách lây nhiễm: Người ta bị nhiễm bệnh cách ăn thực phẩm bị ô nhiễm, đặc biệt thịt heo sống nấu chưa chín, sữa khơng khử trùng, qua tiếp xúc với thú vật bị bệnh nước bị ô nhiễm Những người bị bệnh mà không rửa tay sau sử dụng nhà vệ sinh lây truyền bệnh cho người khác Chẩn bệnh điều trị: Vi khuẩn đưọc nhận dạng thử nghiệm cấy phân Trong trường hợp nặng, bác sĩ cho toa thuốc kháng sinh để điều trị bệnh nhiễm vi khuẩn Yersinia Phòng ngừa: Đừng ăn thịt heo sống nấu chưa chín Chỉ nên uống sữa sản phẩm sữa khử trùng Rửa tay xà nước trước ăn chuẩn bị thức ăn, sau tiếp xúc với thú vật, sau đụng đến thịt sống Sau xử lý ruột heo non, rửa tay móng tay cho kỹ xà nước trước đụng đến ấu nhi đồ chơi, chai sữa, núm vú cao su chúng Nếu quý vị làm ruột heo non, đừng chăm sóc trẻ nhỏ pha chế thức ăn hay sữa chúng trình Dùng riêng thớt cho thịt loại thực phẩm khác Cẩn thận chùi rửa tất thớt, mặt quầy, dụng cụ nấu nướng xà bơng nước nóng sau chuẩn bị thịt sống Vứt bỏ phân thú vật theo cách vệ sinh LƯU Ý: Những người bị nhiễm vi khuẩn Yersinia không nên phụ trách thức ăn cung cấp chăm sóc trẻ hay chăm sóc bệnh nhân trực tiếp khơng cịn triệu chứng bệnh Trang 12 Báo cáo YERSINIA D- SỰ XUẤT HIỆN TRONG THỰC PHẨM CỦA YERSINIA  Những người bị bệnh mà không rửa tay sau sử dụng nhà vệ sinh lây truyền bệnh cho người khác  Vi khuẩn Yersinia enterocoliticia tìm thấy sản phẩm phân bón thú ni, thú vật hố hay hoang dã Do đó, Yersinia enterocolicitica tìm thấy thịt, gia cầm, sữa chưa qua khử trùng, sản phẩm từ bơ sữa, đồ biển từ nước thải bị ô nhiễm, sản phẩm bón vườn với phân thơ Do đó, người ta bị nhiễm bệnh cách ăn thực phẩm bị ô nhiễm, đặc biệt thịt heo sống nấu chưa chín, sữa không khử trùng, qua tiếp xúc với thú vật bị bệnh nước bị ô nhiễm Thực phẩm bị nhiễm người chế biến thức ăn không rửa tay trước cầm vào thức ăn hay dụng cụ dùng để chế biến thức ăn Các trường hợp nhiễm Yersinia enterocolitica, xác định cách cấy làm serotypes từ phân bệnh nhân từ nguồn thực phẩm nghi ngờ hoại nhiễm Nhiều trận dịch ngộ độc thức ăn bị nhiễm độc tố tụ ghi nhận Phần lớn loại thức ăn làm tay, chứa nhiều protein thịt jambon, thịt gà, vịt, khoai lang tây, xà lách trộn trứng, bánh có kem Về phương diện cổ điển, thức ăn bị nhiễm độc tố người làm thức ăn có ổ mủ da tay, thực tế điều số trường hợp Gần Hoa Kỳ người ta ghi nhận vụ dịch nhiễm phải Yersinia enterocolitica bệnh nhân ăn phải đậu hủ uống phải sữa tươi bị hoại nhiễm(4) Một số loại thực phẩm có nhiều khả nhiễm Yersinin:  THỊT GÀ: Giống thịt bò heo, thịt gà khơng có chất xơ, chất carbohydrate chứa nhiều chất cholesterol chất béo bão hòa Chất cholesterol thịt gà khoảng thịt bò 25 milligrams ounce Bác sĩ Castilli nói rằng, 100 mg cholesterol, tức ăn khoảng ounces thịt gà ngày làm gia tăng hàm lượng máu lên nửa chấm (0,5) Giống loại thịt khác, thịt nạc gà có sẵn chất béo mà bạn loại bỏ Chất béo bão hịa saturated fat khơng tốt cho chúng ta, đóng cục xung quanh bờ thành mạch máu Khi nhập vào thể, biến đổi thành cholesterol qua kích thích gan Vì thế, thịt gà nạc "lean" có số lượng đáng kể chất béo bão hòa chất cholesterol So sánh với thịt gà, thực phẩm rau đậu hồn tồn khơng có cholesterol Ngồi chất béo bão hịa chất cholesterol, chất độc thịt gà vấn đề nghiêm trọng Theo Consumer Reports, "Có phần trăm hội chứng thuốc độc thừa nhận báo cáo." Tổ chức sức khỏe giới WHO (The United Nations World Health Organization) cho biết khoảng 10% bệnh tật thực phẩm độc hại giới Cơ quan phịng ngừa kiểm sốt bệnh tật CDC phủ Trang 13 Báo cáo YERSINIA Hoa Kỳ cho bệnh gây nên thịt gà gia tăng 300% khoảng từ năm 1988 đến năm 1992 Theo báo cáo sở nghiên cứu kinh tế Bộ Nơng Nghiệp Hoa Kỳ "những vi khuẩn sinh bệnh tật gồm virus, bacteria, parasites, fungi thức ăn gây nên 6,5 triệu đến 33 triệu người bệnh có 9.000 tử vong năm Hoa Kỳ Chi phí năm tốn khoảng 5,6 tỷ đến 9,4 tỷ dollars Thịt nguồn dẫn đến số người bệnh chết này." Tài liệu báo cáo nói "Thực phẩm mang vi khuẩn gây bệnh loại chứa nhiều protein động vật, thịt bị, heo, gà, cá, tơm, trứng sữa phó sản sữa cheese bơ" Trong số bệnh gây nên thực phẩm xác nhận CDC, 90 phần trăm chín loại bacteria Thịt gia cầm (poultry) bao gồm thịt gà ta gà tây nguồn cung cấp lớn năm loại vi khuẩn Campylobacter jejuni hay coli, Salmonella, Shigella, Yersinia, and Staphylococcus aureus  THỊT HEO: Hầu hết trường hợp nhiễm bệnh ăn phải thức ăn bị hư hỏng sản phẩm thịt heo sống hay chưa nấu chín Sự chuẩn bị bữa ăn với ruột hay ruột non heo mạo hiểm lớn Trẻ em bị nhiễm người giữ trẻ cầm vào ruột non sống không rửa tay kỹ trước bế đứa trẻ hay cầm vào đồ chơi đứa bé, chai lọ, hay núm vú giả Thức uống hư hỏng, sữa chưa tiệt trùng, hay nước chưa xử lý truyền mầm bệnh Đôi lây nhiễm Yersinin enterocoliticia xảy sau tiếp xúc với thú vật bị nhiễm Ở trường hợp hơn, truyền vi khuẩn từ phân hay ngón tay bẩn người đến người khác Nó xảy thói quen vệ sinh thói quen rửa tay không thực đầy đủ Hiếm vi khuẩn lây qua trình truyền máu Thịt Heo Là Nguồn Lây Nhiễm Yersinin Ở Người: Thịt heo nguồn quan trọng góp phần vào lây nhiễm Yersinin người Vào năm 2000, báo cáo Đan Mạch cho rằng: phòng thí nghiệm địa phương thực điều tra thịt heo sống tìm có 6.3% 96 mẫu điều tra có kết dương tính với Yersinin enterocoliticia Tổng cộng có 265 trường hợp lây nhiễm với Yersinin enterocoliticia báo cáo Đan Mạch vào năm 2000 Hầu hết mẫu phân lập serotype O:3 Vào năm 1985, có 1512 trường hợp nhiễm Yersinin phát Bởi hầu hết thịt heo bán chợ Đan Mạch bị nhiễm Yersinin enterocoliticia serotype O:3 Ở Đan Mạch, nguyên nhân lây nhiễm Yersinin thịt heo Trang 14 Báo cáo YERSINIA Mỗi năm Mỹ, Yersinin enterocoliticia gây từ 3000 đến 20000 trường hợp nhiễm người Trong trận dịch Chicago, tác nhân gây nhiễm bệnh đường ruột chẩn đoán Yersinin serotype O:3 Trận dịch xác định ruột non heo mà đứa bé ăn Tất đứa trẻ bị nhiễm trực tiếp ăn ruột non heo, liên quan đến nhà trẻ mà ruột heo chuẩn bị Ở Canada, Y.pseudotuberculosis từ sữa nhận dạng nguyên nhân trận dịch truyền nhiễm Yersinin British Columbia vào năm 1998 Y.pseudotuberculosis đượïc phân lập heo thịt heo Nhật Sự Thịnh Hành Của Yersinin Trong Các Trại Nuôi Heo: Thịt heo xem nguồn quan trọng,nếu nguồn cho lây truyền yersinin người Sự tồn Y.enterocolitica cao nông trại nuôi heo toàn giới Kết từ nghiên cứu đạo trường Đại Học Guelph cho thấy xấp xỉ 39% 80 trại heo Ontario kiểm tra có kết dương tính với Yersinia Sự tồn thật bầy heo cao 39% đợt nghiên cứu người ta kiểm tra chợ bán thịt heo Ở Đan Mạch, khảo sát vào năm 1993 cho thấy 90% bầy heo 75% heo thịt có xét nghiệm máu dương tính với Yersinia Năm 2000, mẫu phân thu từ heo cho thấy 13% chợ bán thịt heo có kết dương tính với Y.enterocoliticia Báo cáo tỷ lệ % phổ biến Yersinin vài quốc gia khác khoảng từ 30% - 90% Những số Yersinia tác nhân gây bệnh thực phẩm có thịt heo Để giảm, hay tiêu diệt Y.enterocoliticia từ thịt heo, công nghiệp thịt heo phải tiến đến quy trình gắn liền chăn nuôi với chế biến Trang 15 Báo cáo YERSINIA E- CÁC PHƯƠNG PHÁP KIỂM TRA TRONG THỰC PHẨM Phương pháp 1: Phương pháp ni cấy (Culture Methods) Nguồn Yersinia Enterocolitica tác động rõ rệt đến phương pháp phân lập Thường dễ dàng tìm phân lập lồi gây bệnh mẫu bệnh nhiễm độc riêng rẽ mẫu thực phẩm không mang triệu chứng Do số giống Yersinia Enterocoliticia mang triệu chứng gây bệnh nhỏ số giống sinh vật quần thể lớn mẫu thực phẩm, việc phân lập trực tiếp môi trường chọn lọc thành công Để phát triển số chuỗi Yersinia mẫu này, việc bổ sung vào mội trường lỏng trước phân lập môi trường rắn cần thiết Một vài phương pháp phân lập khác có giá trị cho việc phân lập Yersinia Enterocoliticia cho Bảng1 Làm lạnh (cold enrichment) : Loài psychrotrophic Yersinia Enterocoliticia so với Enterobacteriaceae khác Do đó, việc bổ sung chất hòa tan khác 4ºC khoảng thời gian dài áp dụng để phân lập Yersinia spp Làm giàu lạnh PBS (photphate – buffersd saline) hay PSB (photphate – buffered saline with sorbitol and bile salts) đựơc dùng rộng rãi cho mẫu bệnh, thực phẩm, môi trường Làm giàu lạnh có hiệu mẫu phân Tuy nhiên trở ngại lớn diện yersinia Enterocoliticia không gây bệnh vi khuẩn psychrotrophic khác - đựơc thêm vào suốt trình bổ sung, gia đoạn nuôi cấy dài (cụ thể 21 ngày) Nếu dùng phương pháp làm lạnh với KOH (potassium hydroxide) hệ thực vật tảng có giảm làm cho chọn lọc khuẩn lạc chặt chẽ Làm giàu môi trường chọn lọc (selective enrichment) : Ở nhiệt độ cao, vài môi trường chọn lọc cho việc phân lập Yersinia Enterocoliticia tăng cường kèm theo tác nhân kháng khuẩn khác sử dụng nguồn chọn lọc Wauters trình bày rõ ràng MRB (modified Rappaport broth) : chứa MgCl (magnesium chloride), malachite green carbenicillin, mẫu ni 25ºC từ – ngày Sau ông tăng cường việc bổ sung broth xuất phát từ modified Rappaport với vigasan, ticarcillin potassium chloride (ITC) Các mơi trường hữu ích việc phát chuỗi bioserotypr 4/O : Schiemann thúc đẩy môi trường BOS (bile – oxalate – Trang 16 Báo cáo YERSINIA sorbose) để phân lập yersinia Enterocoliticia, đặc biệt chuỗi bioserotype 1B/O : Hai giai đoạn làm giàu biết dựa TSB (tryptic soy broth) Landgraf dùng TSB với polymyxim novobiocin (TSPN) nuôi 18ºC ngày để tách Yersinia Enterocolitica sữa Toora tạo nên bước để tách Yersinia Enterocoliticia từ thực phẩm ăn liền thịt heo cách giảm TSB có chứa men chiết, muối mật irgasan Thành phần Agar chọn lọc : Rất nhiều mơi trường có thành phần agar chọn lọc có giá trị cho việc phân lập yersinia Enterocolitica từ mẫu bệnh, thực phẩm mơi trường Đối với mơi trường ruột bình thuờng, người ta sử dụng rộng rãi MacConkey (MAC) agar, CIN agar (Cefsulodin – irgasan – novobiocin) SSDC agar (Samonella – Shigella deoxy cholate calcium chloride) thúc đẩy để phân lập Yersinia Enterocoliticia Đây môi trường thường đựơc sử dụng cho mẫu thực phẩm CIN agar đựơc chấp nhận mẫu bệnh tốc độ nhanh độ chọn lọc cao Tuy nhiên, hầu hết chuỗi Yersinia Enterocoliticia bioserotype 3/O:3 gây bệnh thường bị kìm hãm mẫu có mơi trường CIN tiêm phòng Ba loại agar chọn lọc khác : agar BABT4, VYE, KV202 tăng cường sử dụng không rộng rãi SSI (Statens Serum Institute) – môi trường ruột - môi trường tổng quát để khám phá loài gây bệnh đường ruột hiệu việc phát Yersinia spp Nhận dạng : Devenish Schiemann xác định độ tối thiểu hai lồi nghiên cứu sinh hóa Kigler iron Christensen urea Chúng yêu cầu phải xác định Yersinin lồi vi khuẩn với hình thái khuẩn lạc quen thuộc agar CIN Yersinia Enterocoliticia xác định phương pháp vi sinh lên men sucrose, rhamnose melibiose Hệ thống API 20E dùng rộng rãi cho việc nhận dạng phân lập Yersinin cách chắn xác Hệ thống có tốc độ nhận dạng xác lên đến 93% Yersinia Enterocoliticia nuôi 28oC thay 37oC Phương pháp 2: Phương pháp lai khuẩn lạc (Coliony Hybridization Methods) Sự phân lập loài Yersinia enterocoliticia gây bệnh tỉ mỉ, khó khăn, tốn nhiều thời gian, có chiếm đến tuần.Vì vậy, vài thí nghiệm áp dụng phương pháp nhanh đáng tin cậy để phát chuỗi yersinia gây bệnh từ mẫu bệnh, mẫu thức ăn môi trường Bằng cách dùng mẫu xét nghiệm có trộn lẫn DNA với giống Yersinia gây bệnh phát hiện, dùng que dị nhằm vào plasmid DNA độc hại có liên quan nhiễm sắc thể Que dò dựa vào trình tự nucleotid từ gen virF yadA plasmid độc hại : + Gen virF điều chỉnh đóng vai trị chủ yếu nhiệt cảm ứng yếu tố thành phần có nhiễm độc + Gen yadA tác nhân gây độc chủ yếu Yersinia Enterocoliticia giải mã chất hoạt động bề mặt protein màng + Goverde đưa phương pháp pha trộn lồi dùng que dị nhắm vào gen ail inv mang nhiễm sắc thể Trang 17 Báo cáo YERSINIA + Gen inv Yersinia Enterocoliticia giải mã phép vi khuẩn xâm chiếm mơ tế bào DNA tương ứng tìm thấy tất giống Yersinia Enterocoliticia Những vi khuẩn không gây bệnh không chứa chuỗi inv mang chức + Durisin lại đưa phương pháp bao gồm gen yst đựơc tìm thấy Yersinia Enterocoliticia ( khơng có Yersinia pseudotuberculosis va Yersinia pestis) Gen có chứa độc tố bền nhiệt ruột Trong loài Yersinia khác, Yersinia kristensenii có DNA tương ứng với yst Việc lai khuẩn lạc không yêu cầu phải tạo mơi trường ni cấy sạch, việc phát nhanh chóng liệt kê tất lồi sinh vật gây bệnh Tuy nhiên quần thể mang tính chất cao (high background flora) làm giảm hiệu lai tế bào quan trọng phát triển cách không khỏe mạnh đầy đủ diện quần thể thực vật đối kháng Dù vậy, Nesbakken tìm chứng minh đựơc số lượng Yersinia Enterocoliticia gây bệnh sản phẩm thịt heo Norwegian có giá trị cao kiểm tra phương pháp lai khuẩn lạc phương pháp nuôi cấy Phương pháp 3: Phương pháp PCR (PCR-Based Detection Methods) PCR (Polymerase Chain Reaction) phản ứng chuỗi trùng hợp PCR kỹ thuật phổ biến sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo nhiều sao) đoạn DNA mà không cần sử dụng sinh vật sống (E coli, nấm men) PCR sử dụng nghiên cứu sinh học, y học, thực phẩm… Trang 18 Báo cáo YERSINIA PCR phương pháp đầy hứa hẹn để phát vi khuẩn gây bệnh mẫu bệnh, mẫu thực phẩm môi trường Phương pháp nhanh phương pháp lai khuẩn lạc phát triển độc lập lồi trước phân tích khơng cần thiết Những xét nghiệm PCR khác tạo nên việc phát Yersinia Enterocoliticia gây bệnh mẫu tự nhiên Gen mục tiêu ( target genes) * Một vài xét nghiệm PCR phát triển để phát pYV dương tính Yersinia Enterocoliticia mẫu bệnh, thực phẩm môi trường Phương pháp sử dụng primers nhằm vào gen virF yadA định vị pYV Viitanen ứng dụng primers đặc biệt cho plasmid độc hại khoá mã gen yopN Yersinia Enterocolitica O:3 YopN bị ảnh hưởng kiểm sốt Yop giải phóng Yersinia Enterocoliticia gây bệnh Arnold trình bày rõ ràng xác xét nghiệm phương pháp PCR dựa gen yopT gây ảnh hưởng độc tố đại thực bào (macrophages) * Bởi plasmid bị q trình ni cấy bảo quản, phương pháp PCR nhằm vào gen độc hại mang nhiễm sắc thể Gen ail định vị nhiễm sắc thể giống Yersinia Enterocoliticia gây bệnh thường xuyên sử dụng làm gen mục tiêu Thêm vào vài xét nghiệm tạo để phát gen inv gen yst Weynants đẩy mạnh phương pháp PCR để phát Yersinia Enterocoliticia O:3 mẫu phân, primers hình thành để mở rộng đoạn gen rfbC Yersinia - phần đặc biệt gen 16S rRNA sử sụng để phát Yersinia spp, đặc biệt mẫu máu * Rất nhiều phương pháp PCR đựơc tạo để phát nhiều gen Resinia Enterocoliticia lúc Sự kết hợp thường xuyên xét nghiệm PCR đa thành phần virF ail Trong phương pháp này, mẫu nhiễm pYV âm dương tính tách riêng phát đồng thời Lantz phát minh phương pháp PCR đa thành phần để đồng thời phát gen yadA mang plasmid phần Yersinia đặc biệt gen rRNA 16S Hai phương pháp đa thành phần sử dụng việc hoà lẫn primers đối kháng inv, ail, virF tạo để phát Yersinia Enterocoliticia Yersinia pseudotuberculosis thực phẩm nước Harnett đẩy mạnh phương pháp PCR phức tạp để phát gen yst, ail, virF đồng thời mẫu phân Weynants kết hợp gen rfbC, inv, ail virF xét nghiệm phương pháp PCR đa thành phần để so sánh, đánh giá, phân biệt khác Yersinia pseudotuberculosis, Yersinia Enterocoliticia gây bệnh Yersinia Enterocoliticia O:3 phân Sự chuẩn bị mẫu : Mặc dù kỹ thuật PCR mang lại hiệu tối ưu môi trường nuôi cấy vi khuẩn khiết độ nhạy bị giảm áp dụng trực tiếp vào mẫu tự nhiên Một nguyên nhân quan trọng : hợp thành phức tạp nhiều mẫu phân, máu, phomai, gà đất, điều ức chế phương pháp PCR Proteinases – enzym phá huỷ cấu trúc polymer DNA trở thành nhóm quan trọng chất ức chế phương pháp PCR nhiều mẫu vi khuẩn Ảnh hưởng kìm hãm phương pháp PCR mẫu phân gây vài chất, có chất biết đến muối mật Sự ức chế phương pháp PCR quan sát mẫu máu bị gây chủ yếu heme giảm bớt thêm vào huyết Albumin trâu bò Trang 19 Báo cáo YERSINIA Sự ức chế phương pháp quan sát thịt heo bị gây chủ yếu phân tử bền nhiệt qua lọc 0.2 µm Vì bước chuẩn bị mẫu khác tạo kết khác Một vài phương pháp, chẳng hạn bổ sung, pha loãng, lọc, li tâm, hấp phụ sử dụng cho việc tập trung phân chia giống Yersinia Enterocoliticia mẫu tự nhiên Bước bổ sung trước thực ngiên cứu phương pháp PCR làm gia tăng độ nhạy đảm bảo cho việc phát tế bào tồn đựơc, bước áp dụng cho hầu hết phương pháp Để hạn chế phát triển, gia tăng quần thể đặc trưng, việc chọn lọc bổ sung broth đựơc sử dụng Từ bề mặt thực phẩm hướng chủ yếu việc nhiễm khuẩn, cách tiến hành trao đổi nhẹ nhàng ( không bị phá hoại) để bổ sung Yersinia Enterocoliticia trước tiến hành phương pháp PCR làm giảm lượng DNA không đặc hiệu lấy từ thực phẩm nhân tố gây ức chế lưới thức ăn Bước pha loãng yêu cầu mẫu nhiễm nặng để làm giảm số lượng hợp chất gây ức chế giảm tập trung cao vào DNA khơng yếu Waage chứng minh việc pha loãng sau làm giàu qua đêm lại cần thiết trước phân tích vi khuẩn để đạt kết PCR chắn, có lẽ ức chế hàm lượng DNA cao broth giàu dinh dưỡng Bước li tâm thường sử dụng để tập trung giống Yersinia Enterocoliticia trước tiến hành phương pháp PCR Trở ngại q trình li tâm việc tập hợp mẫu gây ức chế với kèm theo sinh vật muốn hướng đến Mật độ li tâm bề mặt đựơc sử dụng để tập trung giống Yersinia Enterocoliticia để giảm bớt chất ức chế phương pháp PCR Quy trình chia cắt đựơc sử dụng vài nghiên cứu để tập trung phân cắt Tersinia Enterocoliticia O:3 từ chất ức chế phương pháp PCR Sự lọc sử dụng để tập trung giống Yersinia Enterocoliticia mẫu nước Các mẫu thực phẩm : Thực phẩm thường trở thành nguồn chủ yếu lây nhiễm Yersinia Enterocoliticia, việc tách loài gây bệnh đựơc phát hiện, khám phá từ mẫu thực phẩm Thịt heo sống đựơc kiểm tra rộng rãi liên kết Yersinia Enterocoliticia 4/O:3 loài heo Tuy nhiên, tốc độ tách riêng loài gây bệnh Yersinia Enterocoliticia chậm thịt sống ngoại trừ gan, thận heo… Trong nghiên cứu này, việc bổ sung chọn lọc ITC MRB sử dụng Các giống Yersinia Enterocoliticia dựa vào bioserotypes liên kết với bệnh người đựơc khám phá vài lần từ mẫu thịt bò, gia cầm sữa Trong trường hợp này, lây nhiễm chéo có khả xuất suốt tiến trình, q trình đóng gói điều khiển từ lúc giống Yersinia Enterocoliticia gây bệnh chưa khám phá từ trâu bò gia cầm sống Sự xuất Yersinia Enterocoliticia gây bệnh vài thực phẩm đựơc ước lượng, đánh giá phương pháp nuôi cấy phương pháp PCR Trong tất nghiên cứu này, phương pháp PCR chiếm ưu hơn, thể độ nhạy cao trước cho mẫu lây nhiễm tự nhiên Đối với thịt heo bị lây nhiễm nhân tạo, Boyapalle cho thấy xét nghiệm TaqMan nhằm vào gen ail từ 100 – 1000 lần hiệu xét nghiệm phương pháp PCR truyền thống với phát chất gel 10000 lần hiệu phương pháp nuôi cấy Visnubhatla dùng xét nghiệm TaqMan thay gen ail gen yst Đây lần Trang 20 Báo cáo YERSINIA yst dương tính Yersinia Enterocoliticia phát phần quanh thịt bò, tốc độ phân lập Yersinia Enterocoliticia đựơc nâng lên Cấp độ lây nhiễm sản phẩm cao cách rõ rệt, phương pháp ni cấy xác định Yersinia Enterocolitica 106 CFU nhiều sinh vật 1gam có mặt Sự xuất Yersinia Enterocoliticia gây bệnh diễn tả hiệu xét nghiệm phương pháp PCR phương pháp nuôi cấy Chiết DNA : DNA chiết từ tế bào bị thuỷ phân thành tế bào giải phóng DNA quy trình lọc DNA cách chặt chẽ Nhiệt độ thường xuyên dùng trước tiến hành phương pháp PCR để phá vỡ thành tế bào vi khuẩn khơng hoạt hố chất gây ức chế phương pháp PCR bền nhiệt Tuy nhiên nghiên cứu mẫu tự nhiên, biện pháp nhiệt độ khơng đủ cho Yersinia Enterocoliticia Biện pháp proteinase K đựơc dùng chủ yếu trước thực phương pháp nhiệt phương pháp PCR, từ phát trực tiếp Yersinia Enterocoliticia mẫu tự nhiên Proteinase K gây thoái hoá protein thành tế bào, protein ức chế phương pháp PCR polypeptids mẫu, ngồi cịn chống lại nhiễm DNase bền nhiệt Yersinia Enterocoliticia khống chế nhân hoạt động để phá vỡ sản phẩm PCR, điểu ngăn chặn proteinase K trước tiến hành PCR Dickinson nêu rằng: cách gia tăng lượng proteinase K từ 0.2 – mg/ml sử dụng thành phần isopropanol kết tủa DNA, Yersinia Enterocolitica phát trực tiếp cách hiệu mẫu gà sống phomai Việc tinh chế DNA đựơc thực việc chiết phenol – chloroform truyền thống kết tủa ethnol vài mẫu PCR đẩy mạnh để phát Yersinia Enterocoliticia trực tiếp mẫu tự nhiên Tuy nhiên, thực phương pháp hao tốn thời gian khơng thích hợp cho số lượng lớn mẫu Rất nhiều dụng cụ tinh chế DNA có giá trị để phân lập DNA nhanh dễ dàng Trong số có vài dụng cụ đựơc dùng xét nghiệm PCR Yersinia Enterocoliticia Phát sản phẩm tiến hành phương pháp PCR : Phương pháp chủ yếu dùng để phát sản phẩm tiến hành phương pháp PCR Yersinia Enterocoliticia điện di chất gel điện di Việc cho kích cỡ số lượng sản phẩm đánh giá khái quát kết Tuy nhiên khó đảm bảo đựơc phương pháp PCR giải mã trình tự primers Hơn nữa, ethidium bromide -chất gây biến dị- làm thay đổi màu gel điện di khơng thích hợp cho việc kiểm tra thực phẩm đặn phịng thí nghiệm Để khắc phục vấn đề này, Rasmussen phát sản phẩm Yersinia Enterocoliticia mở rộng cách giữ sản phẩm có dùng lai chủng oligonucleotid cố định Các sản phẩm tiến tiến hành phương pháp PCR đựơc cố định giống microtiter đựơc phát ánh huỳnh quang Gần đây, xét nghiệm PCR 5’ – nuclease (TaqMan) khơng cịn u cầu phát chất gel điện di mà dùng để phát trực tiếp Yersinia Enterocoliticia mẫu thực phẩm mẫu máu Với phương pháp fluorogenic này, que dò thiết kế để pha trộn phần bên chuỗi hướng đến Khi đó, thuốc nhuộm dính chặt có khả phát ánh huỳnh quang Trang 21 Báo cáo YERSINIA Kết dương tính giả : Khi sử dụng phương pháp PCR truyền thống (tiến hành vài bước tay) kết xuất dương tính giả dựa lây nhiễm chéo vấn đề phịng ngừa đặc biệt khơng đựơc đề cập đến Một số nhiễm bệnh xét nghiệm phương pháp PCR dương tính giả Tuy nhiên kết dương tính giả đựơc kiểm tra với số lượng điều chỉnh vừa đủ Kết dương tính giả gây primers không tương xứng đặc hiệu nhiệt độ thấp đựơc sử dụng chuỗi gen nhắm đến phát chuỗi không nhiễm bệnh Grant tìm giống khơng nhiễm biotype 1A Yersinia Enterocoloticia chuỗi đồng đẳng nhiễm sắc thể nhiễm bệnh gel ail, myf, yst Kết dương tính giả tế bào chất tránh sử dụng để làm giàu trước tiên hành phương pháp PCR Những điều bảo đảm cho phát tế bào tồn làm tăng độ nhạy Rasmussen chứng minh biện pháp làm giàu môi trường cần thiết trước tiến hành phương pháp PCR để tăng độ nhạy mẫu nhiễm bệnh tự nhiên đựơc nghiên cứu Biện pháp làm giàu trước sử dụng thường xuyên Yersinia Enterocoliticia nhiễm bệnh để phát mẫu tự nhiên Kết âm tính giả : Kết âm tính giả sử dụng phương pháp PCR xảy thường xuyên kết dương tính giả nghiên cứu mẫu tự nhiên Lý kết âm tính giả có mặt yếu tố kìm hãm mẫu thực phẩm mơi trừờng làm giàu gây cản trở việc phát phương pháp PCR Thậm chí lượng nhỏ MgCl phát ITC MRB broths kìm hãm phương pháp PCR Để khắc phục vấn đề này, Knutsson phát triển mơi trường PCR tương thích cho Yersinia Enterocoliticia Tuy nhiên, phương pháp không dễ khắc phục chất kìm hãm phương pháp PCR mẫu tự nhiên chưa nhận thức mức Kết âm tính giả gây chất kìm hãm mẫu đựơc kiểm tra việc điều khiển bên Kết âm tính giả nguyên nhân chuỗi hỗn tạp gen nhắm đến giống Yersinia Enterocoliticia khác KẾT LUẬN Phương pháp phân lập không hiệu nguyên nhân chủ yếu cho không phổ biến Yersinia Enterocoliticia gây bệnh nghiên cứu trước Việc phát giới hạn cho Yersinia Enterocoliticia gây bệnh từ 10 – 106 CFU nhiều sinh vật 1gam mẫu Vì vậy, mẫu agar Yersinia chọn lọc đánh giá không đầy đủ Hơn nữa, lồi Yersinia Enterocoliticia khơng gây bệnh xuất lúc với Yersinia Enterocolitica gây bệnh Điều làm khó khăn để đánh giá loài Khi nguồn dinh dưỡng bổ sung không đầy đủ, chúng chứa tác nhân gây ức chế phát triển vài chuỗi gây bệnh Do đó, lý lúc phát giống Yersinia Enterocoliticia ( bioserotype 4/O:3) phương pháp phân lập đa dạng lồi Xét nghiệm phương pháp PCR cung cấp đánh giá việc xuất Yersinia Enterocoliticia gây bệnh mẫu bệnh, thực phẩm, môi trường tốt phương pháp nuôi cấy Hiện phương pháp PCR nhanh hiệu để xác định liệt kê Yersinia Enterocoliticia gây bệnh mẫu tự nhiên Sự cải tiến sau xét nghiệm PCR tập trung vào việc hợp kiểm soát bên Trang 22 Báo cáo YERSINIA cách chắn phát triển khả tự động tồn tiến trình, từ nâng cao hữu ích phương pháp phịng thí nghiệm nghiên cứu công nghệ thực phẩm Khi mẫu trở nên tự động, số lần dùng mẫu thủ công giảm xuống lây nhiễm mức tối thiểu Tuy nhiên, phương pháp phân lập hiệu cần khơng có phân lập giống Yersinia Enterocoliticia, khơng có giống đựơc diễn tả, thơng tin quan trọng lan truyền bị bỏ qua Trang 23 ... phương pháp bao gồm gen yst đựơc tìm thấy Yersinia Enterocoliticia ( khơng có Yersinia pseudotuberculosis va Yersinia pestis) Gen có chứa độc tố bền nhiệt ruột Trong lồi Yersinia khác, Yersinia. .. khuẩn Yersinia ruột bệnh viêm ruột vi khuẩn (vi trùng) gọi Yersinia enterocolitica gây Vi khuẩn tìm thấy phân (đi tiêu) người thú vật bị nhiễm, đặc biệt heo Trang 11 Báo cáo YERSINIA Vi khuẩn Yersinia. .. 3, 4,  1B: từ đến mang pYV Trang Báo cáo YERSINIA  1A: không mang pYV Trang Báo cáo YERSINIA C- KHẢ NĂNG GÂY BỆNH CỦA YERSINIA  BỆNH DỊCH HẠCH ( YERSINIA PESTIS ) Bệnh dịch hạch gì? Bệnh dịch